资生堂色谱柱使用及维护.ppt

1、1 /18,资生堂HPLC色谱柱使用及维护,资生堂色谱知识讲座,先端科学事业推进部 技术中心 资生堂（中国）投资有限公司 北京经济技术开发区景园北街2号BDA国际企业大道31号(100176) TELFAX,2 /18,资生堂色谱网站 ,色谱柱使用说明书,3 /18,色谱柱的冲洗、保存、故障和对策,4 /18,色谱柱的安装和连接,安装色谱柱之前，建议先冲洗设备，并观察系统压力，确保系统各处连接正常 通常，使用不含盐的流动相进行冲洗。如果担心系统中残存盐溶液，为避免盐析，请先使用高水相冲洗后，再置换成不含盐的流动相；,请按照色谱柱标签上的箭

2、头方向来安装色谱柱（左图）。确保配管接头连接正确，并且锥箍的顶端已插入接头内侧(下图)；,安装后，使用不含盐的流动相置换色谱柱保存液后，再用流动相平衡系统和色谱柱。如果担心色谱柱保存液含有盐，请先使用高水相冲洗。,5 /18,色谱柱使用注意事项,避免强烈撞击，以防色谱柱劣化 ； 请在压力指示为0时进行色谱柱的安装和拆卸 ； 请在色谱柱正常压力范围15MPa(IF为40MPa)内使用； 流动相pH不要超过色谱柱pH使用范围，不要发生大幅度变化，否则容易劣化； 资生堂C18柱pH2-10（ACR柱pH1-10）, SCX柱pH2-7, NH2柱pH2-8 为防止由异物导致的色谱柱入口处过滤筛板堵塞

3、，建议使用线上过滤器； 柱温越高，越易劣化； 更换流动相时请注意不要盐析。,6 /18,离子交换柱使用注意事项,不要使用100%水冲洗色谱柱； 流动相一般为含盐水溶液和有机溶剂，在配制流动相及更换色谱柱时一定注意不要发生盐析； 新SCX柱使用纯乙腈封存，若要置换成含无机盐的流动相，请确保不要发生盐析； 要严格控制流动相pH在使用范围之内 SCX柱pH2-7，NH2柱pH2-8； 色谱柱平衡时间长 NH2柱在水/乙腈系下分析糖类物质时，需要平衡45小时； SCX、NH2柱使用含缓冲盐流动相时，最好需要平衡过夜。,7 /18,Melamine结构式,平衡60min后,次日,HPLC Conditi

4、ons: Column: SCX UG80 5m, 4.6mm i.d.150mm M.Phase: 50mM KH2PO4 (pH 3.0 adjusted with H3PO4) / CH3CN=70/30 Flow rate: 1mL/min Oven Temp.: 30C Detector: UV 240 nm Sample: Melamine in M.P. Inj. Vol.: 20L,使用SCX柱三聚氰胺的分析,平衡2h以上，保留时间稳定,8 /18,色谱柱的冲洗,什么情况下需要冲洗色谱柱？ 柱压升高 色谱峰形异常 在强碱性和TFA等强酸条件下使用之后 注意：一般情况下不建议对色

5、谱柱进行冲洗，不冲洗反而更能延长色谱柱的寿命。,9 /18,反相系色谱柱该如何冲洗？ 可以用水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次冲洗，或者用H2O: CH3CN = 1 : 1或 H2O : CH3OH = 1 : 1进行长时间冲洗 。 在乙腈甲醇冲洗过程中，可以重复注射100-200L四氢呋喃或异丙醇都可以有助于除去强疏水性杂质。 四氢呋喃与乙腈和甲醇的混合物能除去类脂。 用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脱能除去蛋白质污染。,10 /18,正相系色谱柱该如何冲洗？ 一般情况下100%异丙醇的极性和正相洗脱能力足够把正相柱上的所有残留物清洗掉 ，可直接使用其冲洗色谱柱 更换溶剂时注意

6、溶剂间的互溶情况，尤其是水会较大干扰正相检测,11 /18,离子交换色谱柱的冲洗 阳离子色谱柱：酸性缓冲盐溶液冲洗 阴离子色谱柱：稀碱缓冲液冲洗 NH2色谱柱：80% CH3CN(pH11、氨水)冲洗NH2柱12小时，使在酸性条件下产生的质子化氨基回到初始状态,除去用于离子交换的盐后，可以用水、甲醇、乙腈、二氯甲烷等冲洗,12 /18,常规反相色谱柱保存方法 使用间隔为12日，请降低流速并连续通液； 短期保存（数周）时，不需要冲洗流动相，拧紧并放好。但使用了强酸强碱流动相时，请使用含有相同有机溶剂组成的中性流动相置换保存； 长期保存（数月）时，请将流动相置换为含50%以上有机溶剂的溶液； 更久

7、保存（1年左右）时，请使用100%乙腈保存；,色谱柱的保存,13 /18,色谱柱的保存,NH2 一个月以内的保存，请使用与所选用流动相组成相同的有机溶剂和水的混合溶液（不含酸、无机盐）进行置换，请避免只用水进行置换； 一个月以上的长期保存，在进行了上述处理之后，请用出厂时的溶剂（乙腈）置换并保存； SCX 短期保存时，请使用含盐的水系流动相来保存。长期保存时，请用出厂流动相纯乙腈来保存。 PC HILIC 分别使用水/乙腈=85/15及水/乙腈=10/90在通常流速下各冲洗约1小时，在色谱柱内为水/乙腈=10/90的状态下进行保存； 糖分析色谱柱SUCREBEAD 将流动相置换为1mol/L

8、NaOH后，拧紧堵头密封保存。,14 /18,色谱柱性能评价,一份合格的色谱柱评价报告应给出柱的基本参数，如柱长、内径、填料的种类、粒度、色谱柱的柱效、不对称度和柱压等。 装填技术 + 填料本身 + 配套检测系统 = 高效液相色谱柱评价结果的获得,色谱柱性能包括：在一定实验条件（样品、流动相、流速、温度）下的柱压、理论塔板高度和塔板数、对称因子、容量因子和分离度。,15 /18,资生堂 采用了严格的出厂标准,填料证明书,填料性能的保证,16 /18,色谱柱出厂报告,色谱柱充填质量的保证 萘理论塔板数和色谱峰形均符合一定标准,17 /18,常遇问题解答,流动相走空，色谱柱还能继续使用吗？ 可以。通过再通液得到解决。 步骤：更换新流动相； 排除泵中空气； 重新通液 断开色谱柱出口和配管的连接按照初始浓度开始通液，并确认柱出口是否有流动相流出（如果水系流动相为缓冲液，可能会出现盐析，需要用高水相通液，必要时请降低流速）。通液后，先停止送液，连接色谱柱