拉氏菌素的毒理学安全性试验研究

拉氏菌素的毒理学安全性试验研究

莎拉菌素是艾瑞公司首次开发的抗动物疾病药物，具有广阔的抑制和杀死寄生虫的效果，包括跳蚤、真菌病、寄生虫、钩虫、虱、线虫和狗细虫。由于其方便、愈合效果好、毒性低等优点，深受宠物喜爱。本研究以《化学药物急性毒性试验技术指导原则》为指导,按照简化寇氏法对塞拉菌素原料药及制剂进行了急性毒性试验,为该药的毒性研究和临床合理、有效用药提供依据。1材料和方法1.1浙江海正药业股份有限公司塞拉菌素原料药,白色粉末状物质,纯度98.2%,批号:S070401,浙江海正药业股份有限公司提供。塞拉菌素制剂,无色、透明液体,规格0.75mL:45mg塞拉菌素,批号:090301,浙江海正药业股份有限公司提供,密度0.8435g/mL。1.2实验动物中心昆明种小鼠(普通级)154只,雌雄各半,体重18～22g,购自兰州大学实验动物中心,许可证号:SCXK(甘)2009-0004。Wistar大鼠(清洁级)154只,雌雄各半,体重180～220g,购自兰州大学实验动物中心,许可证号:SCXK(甘)2009-0004。1.3测试方法1.3.1不同剂量对拉伸菌素的影响每个试验组4只试验动物,雌雄各半,小鼠和大鼠一次性口服不同剂量的塞拉菌素原料药和制剂,测定LD0和LD100。此外小鼠和大鼠分别透皮给予高剂量塞拉菌素制剂10g/kg,观察动物的毒副反应。1.3.2大鼠和大鼠的急性毒性试验根据预试验获得的最高致死量和最低致死量的比值对正式试验进行分组,每组试验动物数为10只,雌雄各半。透皮给药的小鼠和大鼠的数量分别增至20只,雌雄各半。给药后观察大鼠和小鼠的死亡情况以及出现的症状,症状起始的时间,严重程度,持续时间,给药后连续观察20d。对试验中死亡的动物以及试验结束时处死的动物进行大体解剖,对组织器官出现的体积、颜色等的改变做详细记录。统计死亡率,计算LD50及其95%可信限。2结果2.1小鼠口服拉伸菌素制剂的ld0和ld200小鼠口服塞拉菌素原料药的LD0、LD100分别为4g/kg、12.6g/kg;大鼠口服塞拉菌素原料药的LD0、LD100分别为1.6g/kg、5g/kg;小鼠口服塞拉菌素制剂的LD0、LD100分别为4.2g/kg、8.4g/kg;大鼠口服塞拉菌素制剂的LD0、LD100分别为3.4g/kg、8.4g/kg。小鼠和大鼠分别透皮给予高剂量塞拉菌素制剂10g/kg,未见任何毒副反应。2.2正式测试2.2.1小鼠的急性毒性试验测得的LD50=8.72g/kg,Sx50=0.027,LD50的95%可信限为7.73～9.82g/kg。由于LD50值在5001～15000mg/kg之间,故塞拉菌素原料药对小鼠是实际无毒的。在小鼠口服原料药急性毒性试验中给药3h后开始出现临床症状,表现为弓背、精神沉郁、食欲降低、活动困难等临床症状有的小鼠还表现为眯眼、流泪、腹泻等症状。死亡时间出现在给药后的26h～9d内。死后剖检症状如下:皮下、腹膜、肠系膜、胸膈膜、心被膜、睾丸、子宫充血,十二指肠、空肠肠壁较薄,肠黏膜易剥落,肝、肾暗红色,有的小鼠肝、肾肿大、腺胃有出血点或出血带。雄性小鼠和雌性小鼠的死亡率无显著性差异(P>0.05)。详见表1。2.2.2急性毒性试验测得的LD50=2.51g/kg,Sx50=0.025,LD50的95%可信限为2.24～2.82g/kg。由于LD50值在501～5000mg/kg之间,故塞拉菌素原料药对大鼠是低毒的。在大鼠口服原料药急性毒性试验中给药后1h开始出现精神沉郁、弓背、被毛耸立、腹泻、食欲降低等症状。死亡时间出现在给药后的5～12d内,多数大鼠在死亡时有鼻孔有出血的迹象。死后剖检症状如下:皮下、腹肌严重充血,肠系膜、肠膜、胃壁、胸膈膜、心被膜、睾丸、子宫轻度充血,小肠肠壁较薄,肠黏膜易剥落,肝、肾暗红色,有的脾也为暗红色,有的大鼠肝、脾和肾肿大。雄性小鼠和雌性小鼠的死亡率无显著性差异(P>0.05)。详见表2。2.2.3小鼠的急性毒性试验测得的LD50=7.71g/kg,Sx50=0.013,LD50的95%可信限为7.26～8.19(g/kg)。由于LD50值在5001～15000mg/kg之间,故塞拉菌素制剂对小鼠是实际无毒的。在小鼠口服制剂急性毒性试验中给药后1min几乎所有小鼠均反应迟钝,四肢发紫,给药后1h几乎所有小鼠均不能活动,俯卧,呼吸急促,发出叫声。试验中未死亡的小鼠在给药后的24h能正常活动。死亡时间出现在给药后的2～26h内。尸体剖检可见皮下、腹膜、肠系膜、胸膈膜、心被膜、睾丸、子宫充血,十二指肠、空肠肠壁较薄,肠黏膜易剥落,肝暗红色,有的小鼠肾为暗红色,肝、脾和肾肿大。雄性小鼠和雌性小鼠的死亡率无显著性差异(P>0.05)。详见表3。2.2.4急性毒性试验测得的LD50=6.62g/kg,Sx50=0.023,LD50的95%可信限为6.10～7.53(g/kg)。由于LD50值在5001～15000mg/kg之间,故塞拉菌素制剂对大鼠为实际无毒。在大鼠口服制剂急性毒性试验中所有大鼠在给药后2min内反应迟钝、四肢发紫,给药后1h几乎所有小鼠均不能活动,俯卧,呼吸急促,发出叫声。试验中未死亡的小鼠在给药后24h能正常活动。死亡时间出现在给药后的5～16d内。尸体剖检可见皮下、腹肌、肠系膜、胸膈膜、心被膜、睾丸、子宫充血,十二指肠、空肠肠壁较薄,肠黏膜易剥落,肝暗红色,有出血点,有的小鼠肾为暗红色,肝、脾和肾肿大。雄性小鼠和雌性小鼠的死亡率无显著性差异(P>0.05)。详见表4。2.2.5大鼠和大鼠皮肤下的制剂试验小鼠和大鼠分别透皮给予制剂10g/kg未见任何毒副反应,饮食正常。3剂量和给药剂量小鼠和大鼠口服塞拉菌素原料药的LD50分别是8.72g/kg和2.51g/kg;小鼠和大鼠口服塞拉菌素制剂的LD50分别是7.71g/kg和6.62g/kg。由于LD50值均在501～15000mg/kg之间,故将塞拉菌素原料及制剂判为低毒或实际无毒物质。在制剂的透皮试验中,大鼠和小鼠的给药剂量是10g/kg,该剂量大于临床推荐剂量6mg/kg(原料药)的100倍,未见任何不良反应,结果提示塞拉菌素制剂临床用药剂量是安全的。口服原料药急性毒性试验中由于原料药的给药体积会影响药物的吸收,从而影响动物的死亡率,故本试验选择了合适的给药体积,大鼠为4mL,小鼠为0.8mL。在口服给药时因为试验动物胃内容物会