课件：红细胞血型检测.ppt

第二章 红细胞血型检测,红细胞血型检测,1,1.输血前主要包括哪些内容？ 2.受血标本接受时的注意事项有哪些？ 3.ABO血型和RhD血型鉴定时的注意事项有哪些？ 4.交叉配血试验的影响因素有哪些？ 5.抗球蛋白试验的临床应用有哪些方面？ 6.红细胞血型分子生物学检测技术主要有哪些？,红细胞血型检测,2,了解： 红细胞血型分子生物学检测。 熟悉： 交叉配血实验技术的分类及各自的操作步骤及原理。 掌握： 1.输血前检查内容。 2.受血者标本接收时的注意事项。 3.ABO血型和Rh血型鉴定时的注意事项。 4.交叉配血试验的方法及影响因素。 5.抗球蛋白试验技术。 6.不规则抗体的筛选和鉴定。,红细胞血型检测,3,学习要求：,目录,第一节 输血前免疫学检查 第二节 盐水介质试验技术 第三节 酶处理试验技术 第四节 抗球蛋白试验技术 第五节 聚凝胺介质试验技术 第六节 微柱凝集试验技术 第七节 吸收放散技术 第八节 凝集试验技术 第九节 红细胞血型分子生物学检测技术,红细胞血型检测,4,第一节 输血前免疫学检查,目的：输入的血液成分在受血者的体内发挥其有效作用. 在正常情况下，输入的红细胞在受血者体内不溶血，输入的血浆成分不破坏受血者的红细胞。 输血前检查的主要程序：患者的病史和标本等的检查、核对及处理；ABO血型和RhD血型定型；红细胞同种抗体筛查和鉴定；交叉配血试验。,红细胞血型检测,5,一、受血者标本的处理,（一） 标本的采集 输血除了需要达到预期的治疗效果外，必须确保输血安全。 血样由临床护士完成，严格遵守一次只能为一位受血者抽取标本，标本不得从输液管或输液侧静脉中抽取。 （二）标本的接收 输血科技师接收血样标本时，应认真核对受血者的相关信息，尽可能了解受血者有无输血史、药物史、妊娠史等情况。如果有输血史，这有必要进一步了解最后一次输血的日期，若3个月内输过血，那么供血者的红细胞没有完全代谢消失，可能依然存在于血液循环中，导致血型定型试验中出现混合凝集的结果。,红细胞血型检测,6,（三）标本的要求 1. 对输血前检查的血液标本应严格要求能代表受血者当前的免疫学状况，标本还需经鉴定和标记，保证其准确无误地来自受血者和供血者，应和血液申请单上的内容一致。 2. 防止受血者血液标本稀释和（或）溶血，若采集过程中发生溶血则不能使用。 3. 受血者配血试验的血液标本必须是输血前3天采集的。 4. 若受血者使用右旋糖酐、PVP等治疗，应注意洗涤被检红细胞。 5. 每次输血后，受血者和供血者的标本必须保存于28至少7天。,红细胞血型检测,7,二、受血者和供血者ABO和Rh定型,（一）、原理 根据红细胞膜表面上有无A 抗原或B抗原，将血型分为 A型、B型、AB型、O型4种。A型人血清中含有抗-B抗体，B型人血清中含有抗-A抗体，O型人血清中含有抗-A抗体和抗-B抗体，AB型人血清中不含ABO抗体。 正定型：用抗-A及抗-B试剂与被检红细胞反应，检测红细胞表面是否存在A抗原或B抗原。 反定型：用标准A细胞及B细胞与被检血清反应，检测血清中是否存在抗体。 由于ABO血型系统抗体多数为IgM类，在室温盐水介质中就能出现明显的凝集反应。,红细胞血型检测,8,二、受血者和供血者ABO和Rh定型,1.ABO定型 最适的反应温度为4，但在室温反应良好，所以常规的ABO定型试验仅在室温进行。 (1)定型方法：正、反定型的试管离心方法目前仍被认为是最可信赖的ABO定型方法。,红细胞血型检测,9,二、受血者和供血者ABO和Rh定型,红细胞血型检测,10,二、受血者和供血者ABO和Rh定型,2)ABO亚型的鉴定： ABO亚型的鉴定通常使用下列试剂：抗A、抗B、抗A1、抗H、抗AB、A1红细胞、A2红细胞、B型红细胞和O型红细胞。有些工作者在定型试验中，常规地选择应用抗AB抗血清，以避免错误地把弱反应性A或B型红细胞分类为O型。一般抗AB试剂对Ax型红细胞可增加凝集反应的强度。,红细胞血型检测,11,二、受血者和供血者ABO和Rh定型,(一)ABO定型试验中的常见问题：造成这种正反定型不一致的原因主要有： 1)技术和管理错误：这是ABO定型中产生异常结果的主要原因，包括：标本或试剂搞错；器材不洁；试剂污染或失效；离心过度或不足；阳性反应产生溶血现象未能识别；漏加试剂；结果记录或判断错误；细胞与血清间比例不适当。 2)血清异常：脐带血中的华通胶或血清高M蛋白引起红细胞缗钱状形成，影响定型结果。 3)红细胞致敏：受免疫球蛋白致敏的红细胞，在含高蛋白介质的试剂中，可发生凝集。 4)异常基因型：ABO亚型的检查中，A、B抗原可能为弱抗原，使用常规方法难以检出。,红细胞血型检测,12,二、受血者和供血者ABO和Rh定型,5)近期输血：试验前曾输入过其它ABO血型不一致的血液，使血液标本成为混合血型的红细胞悬液，定型时显示“混合外观凝集”现象。 6)嵌合体血型：这种血型者体内有两类血型红细胞群体，定型时可以出现“混合外观凝集”现象。 7)疾病因素导致抗原减弱：某些白血病或骨髓增生异常综合征等受血者，ABO血型抗原在红细胞表面表达受到抑制，导致正、反定型不符。 8)红细胞多凝集现象：红细胞因遗传或获得性的表面异常，如细菌酶作用，几乎与所有人的血清发生凝集。 9)获得性B：由于革兰阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类B”的活性，常见于患肠道疾病的A1血型受血者。,红细胞血型检测,13,二、受血者和供血者ABO和Rh定型,10)血型特异性物质过高：一些卵巢囊肿病例，血型物质的浓度很高，可中和抗A和抗B定型试剂，要得到正确的正定型结果，必须洗涤红细胞多次。 11)近期内进行大量的血浆置换治疗：由于使用大量的非同型的血浆作置换治疗，标本血清中含有所输供体提供的抗A或抗B抗体，造成反定型错误。 12)异常的血浆蛋白：受检者血浆中异常的白蛋白、球蛋白比例和高浓度的纤维蛋白原等导致红细胞缗钱状形成，造成假凝集现象。 13)不规则抗体的存在：受检者血浆中，含有ABO血型抗体以外的不规则抗体，与试剂红细胞上其他血型抗原系统的抗原起反应。,红细胞血型检测,14,二、受血者和供血者ABO和Rh定型,14)低丙种球蛋白血症：低丙种球蛋白血症(丙种球蛋白量减低)病例，可能会因免疫球蛋白水平下降而使血清定型时不凝集或弱凝集反应。 15)药物等因素：药物、右旋糖酐及静脉注射某些造影剂可引起红细胞凝集或类似凝集。 16)年龄因素：免疫系统尚未健全的婴儿、由母亲被动获得抗体的婴儿，或抗体水平下降的老人，试验时可出现异常的结果。 17)防腐剂因素：患者体内可能含有对防腐剂中的成分或对混悬介质的抗体，导致ABO定型差错。,红细胞血型检测,15,二、受血者和供血者ABO和Rh定型,（二）Rh(D)定型和定型试验中应注意的问题：Rh定型主要鉴定D抗原（IgG抗D和IgM抗D）。 Rh系统是最为复杂得多一个系统，涉及临床的主要有D、C、c、E、e五个抗原，其中D抗原的免疫原性最强，仅次于A或B抗原。 Rh血型鉴定方法有：玻片法、试管法、微量板法、微柱凝胶法等，试管法最为经典。目前大部分医院都使用微柱凝胶卡式血型鉴定，方法简便快捷，准确度较高。,红细胞血型检测,16,二、受血者和供血者ABO和Rh定型,红细胞血型检测,17,二、受血者和供血者ABO和Rh定型,(1)导致Rh血型鉴定可能出现假阳性的原因： 1)直接抗球蛋白实验阳性：标本采自因血型不合造成的急性血管内溶血或自身免疫性溶血贫血患者。 2)受检红细胞与抗血清孵育的时间过长，含高蛋白的定型试剂会引起缗钱状形成。 3)标本抗凝不当，受检过程中出现凝血或小的纤维蛋白凝块，误判为阳性。 4)定型血清中含有事先未被检测的其它特异性抗体，造成假阳性定型结果。 5)多凝集细胞造成定型的假阳性。 6)鉴定用器材或抗血清被污染，造成假阳性。,红细胞血型检测,18,二、受血者和供血者ABO和Rh定型,(2)可能出现假阴性的原因 1）直接抗人球蛋白实验（DAT）强阳性：婴儿患有新生儿溶血病，红细胞被Rh抗体（常为抗-D）附着。 2)受检细胞悬液浓度太高，与抗血清比例失调。 3)漏加或错加定型血清。 4)离心后重悬细胞扣时，摇动用力过度，摇散微弱的凝集。 5)弱D抗原或D变异型与某些抗-D不发生反应。,红细胞血型检测,19,二、受血者和供血者ABO和Rh定型,(三) 弱D型(Du型)血型及其鉴定： Du型抗原是RhD的弱抗原，这种抗原通常与IgM类抗D试剂不产生直接凝集反应，而与部分的IgG抗D血型用间接抗球蛋白试验反应阳性。因此当我们初次得到Rh阴性结果时，必须进行Rh阴性确认试验，即用三种不同批号的IgG抗D定型，如果全部阴性方可认为该被检者为Rh阴性，否则，只要有一批为阳性，则可认为是Du型。 弱D人群作为献血者按照RhD阳性对待，其血液只能给Rh阳性受血者输注；作为受血者按照RhD阴性对待，只能接受RhD阴性血液。,红细胞血型检测,20,三、不规则抗体筛选和鉴定,（一）、 概念：不规则抗体是指血清中抗-A、抗-B以外的其他血型抗体，也称意外抗体。不规则抗体包括同种抗体和自身抗体。ABO血型中的亚型也称为不规则抗体。 自身抗体：受血者体内产生的抗体，针对自己本身的红细 胞抗原。 同种抗体：不只针对自身抗原，也与同种异型抗原发生反应。,红细胞血型检测,21,三、不规则抗体筛选和鉴定,（二）、不规则抗体的筛查方法 抗体筛选试验的原则是让受检的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞起反应，以发现具有临床意义的抗体，包括IgG类和IgM类 。 1. 盐水介质法：主要用于IgM类抗体的筛查。 优点是：方法简单、操作简单、成本低廉。 缺点是：灵敏度低 2. 聚凝胺法优点：与盐水介质法比灵敏度有所提高。 3. 抗球蛋白试验：缺点：操作繁琐、工作量大、耗时等。 4. 酶法：能暴露隐蔽抗原，增强一些稀有抗原检测。但可能 会破坏有些抗原，影响检测。目前临床已不用。,红细胞血型检测,22,三、不规则抗体筛选和鉴定,5. 微柱凝胶卡式检测法：凝胶过滤技术+免疫学抗原技术 （三）、不规则抗体的鉴定 抗体筛选试验用的试剂筛选红细胞，通常是2或3人份的非混合O型红细胞。 一旦抗体被检出，应作抗体鉴定试验，以确定其特异性。抗体鉴定实验包含以下主要内容： (1)自身细胞检查：观察患者(受者)的血清与患者(受者)自身细胞的反应情况，确定血清内是否有自身抗体或自身抗体和同种抗体二者同时存在。 (2)谱红细胞：使用试剂细胞中的谱细胞，应用各种抗体检查技术，检测患者的血清，确定其抗体的特异性。,红细胞血型检测,23,三、不规则抗体筛选和鉴定,抗体鉴定试验结果的解释及处理： 1.与谱细胞反应明显，确定为单一抗体或无法确定为单一抗体，应加以鉴别。 2.与谱细胞呈弱反应，结果不明确 （1）分析结果： 是否符合剂量效应 谱细胞是否新鲜 （2）改变试验方法： 使用高灵敏度的方法重复试验 添加试剂后重复实验 待抗体增强后重复试验,红细胞血型检测,24,三、不规则抗体筛选和鉴定,3.与所有谱细胞反应，自身细胞阴性 （1）强度不一致：可能存在混合抗体 （2）强度一致：抗体可能为专于O细胞反应的抗体 （如：抗-I、抗-H、抗-HI） 可能针对高频抗原的抗体 可能针对谱细胞的抗体 4.与所有谱细胞反应，自身细胞阳性 （1）存在自身抗体 （2）同种和自身抗体同时存在 （3）冷凝集：在冷凝集素的作用下存在凝集红细胞,红细胞血型检测,25,三、不规则抗体筛选和鉴定,（4）假凝剂：在干扰因子的作用下可造成红细胞假凝集 （5）酶引起的多凝集 （6）补体的影响 5.与谱细胞不反应，自身细胞阳性 可能是自身抗体或C阳性,红细胞血型检测,26,三、不规则抗体筛选和鉴定,（四）、抗体筛查和鉴定的影响因素 1.抗体筛查和鉴定细胞的质量 筛查细胞不包括低频率抗原，不能检出低频率抗原。 谱细胞：用于抗体鉴定的试剂红细胞。 在选择不规则抗体筛查或鉴定细胞时，应符合本地 区不规则抗体分布的特点。 2.试验方法 IgM抗体在4，凝集强度明显大于室温，37会有减弱 3.抗体的特异性 抗体筛查试验为阴性，并不意味着被检血清中一定没有抗体 筛查细胞漏检ABO亚型抗体（如抗-A） 有些抗体在盐水介质中可溶解抗原不配合的红细胞，出现溶血现象。 应在标本采集48小时内完成实验，放置时间过久，可能造成抗体减弱导致漏检。,红细胞血型检测,27,三、不规则抗体筛选和鉴定,（五）、 不规则抗体鉴定时遇见的的问题 1.不规则抗体筛查阴性，输血后发现溶血 （1）交叉配血假阴性 （2）抗球蛋白试验不规则抗体筛查假阴性 试剂保存不当 洗涤不充分 实验操作 红细胞浓度过高造成凝集减弱 或红细胞浓度过低造成凝集不易被观察到 2.不规则抗体筛查阳性，抗体特异性难以鉴定 （1）抗体筛查假阳性：离心不当试管污染 硅胶管引起的凝集 （2）谱细胞单一：应采用3个以上不同供应商的谱细胞系，排查抗体的特异性。,红细胞血型检测,28,四、交叉配血试验,（一）要求和内容 交叉配血：,红细胞血型检测,29,检查受血者血清中有无破坏供血者红细胞的抗体，使受血者与供血者的血液间没有可测的不相配合的抗原、抗体成分。 要求：在任何步骤均不出现溶血或同种凝集的结果时，方可将供者的血液成分输给受血者。,四、交叉配血试验,交叉配血试验的内容,红细胞血型检测,30,主侧配血 用患者血清与供者红细胞进行试验 次测配血 供血者血清与患 者红细胞进行试验,四、交叉配血试验,红细胞血型检测,31,完整的交叉配血试验应包括： 1、复查收到的受血者血样的ABO、Rh血型及抗体筛查的结果 2、查阅受血者以前的血型检查记录，如与此次结果不符，应及时分析原因。 3选择预先进行血性检查的合格献血者做交叉配血试验。,四、交叉配血试验,（二）结果的解释及处理 1.抗体筛查阴性，交叉配血相容： 绝大部分标本抗体筛查阴性，交叉配血也是相容的。 2.抗体筛查阴性，主侧交叉配合试验阳性 （1）复查血型 （2）主侧凝集类B抗原 （3）血清中可能含有一种ABO抗体，必要时可以做ABO亚型鉴定,红细胞血型检测,32,四、交叉配血试验,3.抗体筛查试验阳性，主侧交叉配合试验阳性 （1）自身对照试验阴性：受血者体内有同种不规则抗体。 （2）自身对照试验阳性：受血者血清内可能有自身抗体或同时存在不规则抗体。,红细胞血型检测,33,影响因素： （1）缗钱状形成：被检血清在室温和37中，使红细胞出现了缗钱状假凝集，造成结果误判，如巨球蛋白血症等。 （2）在室温条件下，配血结果阳性，说明受血者可能存在自身抗体或IgM类同种抗体。 （3）出现抗体筛查试验阴性和交叉配血结果阳性的现象，提示受血者血清中可能存在未检明的抗体。 （4）直接抗球蛋白实验阳性，显示受血者和供血者有自身抗体。 （5）蒸馏水 （6）孵育温度 (7) 离心力不当 （8）不正确的洗涤,34,实验结果的规范化报告,红细胞血型检测,35,第二节 盐水介质实验技术,盐水介质试验技术常用于血型鉴定、血清中IgM类抗体的筛查和鉴定、盐水介质的交叉配血等。 基本方法 1.平板法 用于ABO血型和RhD抗原的定型 特点：简单、快速，但易污染环境。 2.试管法 为定型试验方法，也可于半定量试 验。是输血前检验最常用的试验方法。 特点：简单、快速、易学，结果准确、可靠。 3.微孔板法 为定性试验方法。,红细胞血型检测,36,第二节 盐水介质实验技术,盐水介质配血方法（红细胞悬浮于盐水介质中）,红细胞血型检测,37,离心 看结果,第二节 盐水介质实验技术,结果判读 1、阳性结果 红细胞出现凝集反应或溶血 2、阴性结果 红细胞呈游离的混悬状态 3、溶血 阳性结果，有些需要补体参与。 4、凝集强度判读标准： 4+: 1个凝块，背景清晰，无游离红细胞 3+: 23个凝块，背景清晰，无游离红细胞 2+: 多个小凝块，背景稍浑浊，游离红细胞较 1+: 无数的小颗粒，背景浑浊，有游离红细胞 W+: 肉眼呈“粗颗粒”样，有较多的游离红细胞 - : 肉眼观察不到凝集，镜下全为游离红细胞,红细胞血型检测,38,第三节 酶处理实验技术,原理：在酶的作用下切断带有负电荷的羧基基团的唾液酸，降低Zeta电位，缩短红细胞之间的距离。增强IgG抗体对红细胞的凝集。 常用的酶：菠萝蛋白酶，无花果蛋白酶，木瓜蛋白酶、 胰蛋白酶等,红细胞血型检测,39,第三节 酶处理实验技术,酶介质配血方法,红细胞血型检测,40,主次侧 均加酶,第三节 酶处理实验技术,红细胞血型检测,41,37 水浴30分钟,37 ,离心 看结果,第三节 酶处理实验技术,结果的判断 （1）阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管凝集为阳性，不出现凝集判定为阴性。 （2）阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管凝集，实验失败分析原因，重新实验。,红细胞血型检测,42,2019/8/20,43,可编辑,影响因素,1、每批酶试剂的条件要标化； 2、酶试剂易失效，分装冻存，一次使用； 3、酶试剂的量按要求加入； 4、酶的作用强度。,红细胞血型检测,44,原 理,抗人球蛋白试验，又称 Coombs 试验，是检查不完全抗体的 一种方法。用人血清免疫家兔，产生抗人球蛋白抗体，即抗抗体。将抗人球蛋白抗体（抗抗体） 加入已经致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面的不完全抗体Fc段与抗人球蛋白抗体的Fab段发生特异性结合，使红细胞发生凝集。本试验可分为直接抗人球蛋白试验和间接抗人球蛋白试验,红细胞血型检测,45,第四节抗球蛋白实验技术,直接抗人球蛋白试验 (direct antiglobulin test，DAT ),检测红细胞是否在人体内被不完全抗体致敏的试验。,红细胞血型检测,46,间接抗人球蛋白试验 (indirect antiglobulin test，IAT ),间接抗球蛋白试验是一种检测血清中不完全血型抗体的方法。即用已知抗原的红细胞测定受检 血清中相应的不完全抗体，或用已知抗血清测定受检红细胞上相应抗原。,红细胞血型检测,47,第四节抗球蛋白实验技术,红细胞血型检测,48,抗球蛋白试验原理图,第四节抗球蛋白实验技术,二、分类及应用,红细胞血型检测,49,第四节抗球蛋白实验技术,抗球蛋白配血方法,红细胞血型检测,50,三洗,第四节抗球蛋白实验技术,红细胞血型检测,51,离心 看结果,第四节抗球蛋白实验技术,三、结果的判断 直接抗球蛋白试验： （1）阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管凝集，判定为阳性。 （2）阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管不凝集，须做阴性确认后判定结果。 （3）阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管凝集，结果不可信不能发出报告，分析原因后重做试验。,红细胞血型检测,52,第四节抗球蛋白实验技术,间接抗球蛋白试验： （1）阳性对照管呈现凝集反应，阴性对照管不呈现凝集反应，被检管呈现凝集反应为阳性结果，表示被检者血清中含有抗体。 （2）阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管出现凝集，实验失败，分析原因重做试验。,红细胞血型检测,53,第四节抗球蛋白实验技术,四、注意事项 （一）直接抗球蛋白试验 1. 抗球蛋白血清应按说明书使用最适稀释度，避免出现前带现象而误判为阴性。 2. 结果判读时应转动拖拉、细胞扣摇散后，如肉眼未见凝集，应将反应物涂于玻片上，再在显微镜下观察确认阴性。 3. 被检标本需用EDTA抗凝，避免出现假阳性；标本不宜久置，防止红细胞上已致敏的抗体游离到血浆中，造成假阴性或阳性程度降低。 4. 红细胞表面存在蛋白质就会与抗球蛋白结合。因此受检红细胞一定要充分洗涤，除去血清蛋白，避免假阳性的产生。 5. 如需进一步分析体内致敏红细胞的免疫球蛋白的类型，可以分别以抗IgG、抗C3单价抗球蛋白血清进行试验。,红细胞血型检测,54,第四节抗球蛋白实验技术,（二）间接抗球蛋白试验 1. 红细胞洗涤过程中不宜中途停止，每次加生理盐水前要使红细胞完全悬浮；洗涤过程中防止交叉污染；应充分洗涤，避免残留抗体部分中和抗球蛋白试剂而产生假阴性。 2. 振摇试管不宜用力过大，避免将松散红细胞凝块摇散，使强阳性结果误判为弱阳性结果，弱阳性结果误判为阴性，对于弱阳性结果观察细胞扣是否出现缺口来判读。 3. 离心后应立即看结果，不宜久置。 4. 致敏时间：30-60分钟，不超过90分钟,红细胞血型检测,55,第四节抗球蛋白实验技术,三、抗球蛋白实验的影响因素,红细胞血型检测,56,（）一、亲和力 亲和力常数越高，抗原抗体反应致敏阶段的抗体水平越高 （）二、孵育时间和温度 37孵育30-60分钟 三、离子强度 在单纯的离子强度溶液中，可增强抗体的结合作用，孵育 时间将缩短到1530分钟 四、抗原、抗体的比例 2滴血清对1滴25的红细胞悬液 五、洗涤 应尽量去除上清液，降低未结合的免球蛋白。 六、体外补体致敏：最有效的办法是将血液标本直接采集到EDTA抗凝管中，足量的EDTA可以完全的螯合血液中的Ca2+,阻断补体系统活化过程。 七、红细胞自身凝集：加盐水对照实验，充分洗涤,第五节 聚凝胺介质实验技术,聚凝胺实验技术是一种快速、简便检测红细胞不完全抗体的方法，可用来检测IgG抗体，但IgG抗体的抗-K抗体除外。 一、实验原理 凝聚胺（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，促进血清（浆）中的抗体与红细胞相应抗原结合，再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞间距，形成可逆的非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。加入中和液后，仅由凝聚胺引起的非特异性聚集，会因电荷中和而分散，而由抗体介导的特异性凝集则不会分散,红细胞血型检测,57,第五节 聚凝胺介质实验技术,聚凝胺(Polybrene)配血方法,红细胞血型检测,58,第五节 聚凝胺介质实验技术,聚凝胺(Polybrene)配血方法,红细胞血型检测,59,第五节 聚凝胺介质实验技术,二、 应用范围 血型鉴定、抗体筛查及交叉配血试验 三、特点 灵敏、速度快、准确、操作要求高。 四、注意事项 1. 不能用含有枸橼酸钠（跟补体有关）和肝素抗凝标本：肝素属于粘多糖硫酸脂类，表面带有大量的负电荷，中和聚凝胺的正电荷，使红细胞为被中和，距离为缩短， 2. 用聚凝胺试验技术交叉配血，出现不配合时，要用抗球蛋白试验重做，结果不一致时，以抗球蛋白试验为主。 3.聚凝胺只能是正常红细胞发生凝集，对缺乏唾液酸的细胞（如：T细胞及B细胞）无作用。,红细胞血型检测,60,第六节 微柱凝集试验技术,一、实验原理 凝胶具有分子筛效应和亲和效应，在微柱凝胶介质中红细胞抗原与相应的抗体结合，利用凝胶的空间位阻经低速离心，凝集的红细胞悬浮在凝胶的上层，而未和抗体结合的红细胞则沉于凝胶的底部（管底尖部）。,红细胞血型检测,61,第六节 微柱凝集试验技术,红细胞血型检测,62,一、微柱凝胶试验原理,将红细胞和抗血清加在凝胶上部反应，离心后观察凝集的红细胞，被阻挡在小柱中凝胶的上部或中央，证明发生凝集反应，判断凝集反应阳性,游离的红细胞，被挤过装有过滤介质的小柱，而到达小柱的底部，证明未发生凝集判断阴性.,操作及结果的判定,试管中红细胞凝集强度的判断,红细胞血型检测,63,结果判读模式,红细胞血型检测,64,4+：红细胞复合物位于胶表面。 3+：大部份红细胞复合物位于胶表面，小部分位于胶中上部。 2+：大小部分位于胶中部，小部分位于胶中上部。 1+：复合物位于胶中近底部。 +/-：与阴性管结果对照，如有差别，即可判断。 d.p.：对某特异性抗体，同时存在阴性与阳性细胞，而发生混合反应。 Hemo（hemolysis）.：溶血反应。 -：离心后红细胞沉积在微柱凝胶管底部。,第六节 微柱凝集试验技术,二、应用 1.抗球蛋白试验 直接抗球蛋白试验和 间接抗球蛋白试验。 2.ABO血型鉴定 可做单纯正定型，也可同时做正反定型。 3.其他血型系统检测 如Rh其他抗原（CcEe）定型 三、特征及优点 1.简便 2.准确 结果清晰明确 ，可重复性强。 3.敏感 4.结果保存时间长 5.标本用量少 6.标准化 7.安全,红细胞血型检测,65,第六节 微柱凝集试验技术,四、微柱凝集试验中可能存在的问题 1. 抗凝剂不足或不含抗凝剂的血浆标本常出现假阳性。 2. 实验室温度较低时，易出现假阳性结果。 3. 抗原、抗体过少、过弱；抗原、抗体比例不当时易出现假阴性。 4. 离心力过大时，容易使弱阳性成为阴性格局。 5.溶血反应：反应液是低渗溶液 温度过冷或过热 红细胞或抗体被污染 其他可使红细胞破坏的理化因素,红细胞血型检测,66,第六节 微柱凝集试验技术,五、局限性与发展前景 微柱凝集抗人球蛋白试验及微柱胶免疫检测技术的本质是血凝试验，这理论上为制备抗原抗体包被的红细胞为指示红细胞，以间接血凝试验来检测红细胞抗原抗体以外的其他血液红细胞、中路标志、病原微生物，以及人体中其他可溶性抗体，如对药物抗体、自身抗体的检测等提供了比传统血凝检验更为敏感、准确、简单易行的方法。 微柱凝集试验技术奖在临床各个领域有更为广阔的发展。,红细胞血型检测,67,第七节 吸收放射试验,一、概念 1.吸收试验:抗原与抗体的结合是特异性的，因此具有抗体活性的血清加入相应抗原后，抗体的活性下降或消失，这种作用称为吸收试验。 2.放散试验是抗原与抗体的结合是可逆的，在物理条件改变时，抗体又会从抗原抗体复合物上分离下来，将抗体由抗原抗体复合物上分离下来的试验称为放散试验,红细胞血型检测,68,第七节 吸收放射试验,（一）相关的概念 抗体可与相应的抗原在适当条件下可发生凝集或致敏，这种结合是可逆的，如改变某些实验条件，抗体可从红细胞解离下来，然后检测解离下来的抗体。这种实验称为吸收放散实验。 冷自身抗体 ：理论上讲凡是37与自身红细胞不反应，而只有在低于37环境下才能和自身红细胞反应的抗体均可称为冷自身抗体。实际上，冷自身抗体大多数只能在很低的温度下(例如4)与自身细胞反应。 温自身抗体：温自身抗体是指在37条件下能和自身红细胞反应的抗体。当患者血清中含有温自身抗体时，患者一般均有些贫血或溶血症状。温自身抗体可分为两类:大多数情况下为lgG类温自身抗体，极少数情况下也会存在IgM性质的温自身抗体。,红细胞血型检测,69,第七节 吸收放射试验,（二）吸收实验 冷抗体在4反应最强，通常用冷吸收技术（自身抗体用自身红细胞吸收；同种抗体用对应红细胞吸收）。 IgM抗体通常在4条件下比22或37更容易吸收，且容易完全吸收。 IgG抗体通常在37 的吸收效果最好，但难以完全吸收。 1.冷抗体吸收实验 应用范围：自身冷抗体的吸收其他冷抗体的吸收 2.温抗体吸收实验 应用范围：自身冷抗体的吸收其他冷抗体的吸收,红细胞血型检测,70,第七节 吸收放射试验,（三）放散实验 放散实验是把结合到红细胞膜上的抗体解离下来，用于其他目的。通过放散实验得到的含有或不含有抗体的溶液称为放散液。 放散的目的：得到红细胞上致敏的抗体或没有抗体吸附的红细胞，前者得到的是自身抗体，用于自身吸收；后者得到的是红细胞，用于血型鉴定和交叉配血。 放散的方法：热放散技术、乙醚放散技术、磷酸氯喹放散技术、冻融放散技术、柠檬酸放散技术、二甲苯放散技术等。,红细胞血型检测,71,第七节 吸收放射试验,1.热放散技术 应用范围 ABO抗体的放散（新生儿溶血病实验） 注意事项 温度过高，抗体可能变性；温度过低，容易使抗体从红细胞上解离不完全 2.乙醚放散技术 乙醚为有机溶剂，可以破坏红细胞膜，解离IgG抗体，该方法制备的放散液，抗体回收率高。 适用范围 主要用于红细胞上的各种IgG抗体的扩散。 3.磷酸氯喹放散技术 主要用于得到没有任何抗体附着的红细胞。此方法不能将补体从红细 胞膜上解离下来。,红细胞血型检测,72,第七节 吸收放射试验,4.冻融放散技术 适用范围 ：ABO抗体的放散，如新生儿溶血病的相关检测实验。 5.柠檬酸放散技术 适用范围 ：用于解离红细胞膜上致敏的IgG抗体对红细胞进行抗原 的鉴定，但Kell系统的鉴定除外。 注意事项 ：该方法可破坏Kell系统抗原，特别是K抗原，因 此本方法放散后的细胞不能进行Kll系统定型试验。,红细胞血型检测,73,第七节 吸收放射试验,（四）吸收放散试验的应用 证实存在于红细胞上的若抗原 分离、鉴定混合液体 除去血清中不需要的抗体 浓缩低效价抗体 核实抗体特异性 利用吸收放散技术鉴定引起新生溶血病和免疫性输血反应的抗体 研究鉴别免疫性溶血性贫血的抗体,红细胞血型检测,74,第八节 凝集抑制试验,一、概述： 抗体能与有相应抗原的红细胞发生特异性凝集，体液中的可溶性抗原物质能与该抗体发生特异的中和，抑制了抗体凝集