茯苓多糖的提取纯化及应用研究进展

1、茯苓多糖的提取纯化及应用研究希望张晓娟唐洁梁引库张林生【摘要】茯苓多糖为我国传统中药茯苓的重要有用身分，具有抗肿瘤、抗病毒、加强机体免疫力、抗氧化、落血糖血脂、保肝、催眠等作用，可用于医疗、保健等范畴，具有辽阔的开拓应用远景。为进一步优化茯苓多糖的提取工艺，促进其开拓应用，文章参考大量国表里文献，对近几年茯苓多糖的提娶纯化及其应用作一综述。【关键词】茯苓多糖；提取；纯化；应用Abstrat：PahyanistheaineffetivepnentfthetraditinalhineseediinePrias.Ithaseffetfantitur,antivirus,enhaningiunity,

2、antixidant,hypglyeiandreduingbldlipid,prtetingliverandhypnsiset.Itanbeusedinthefieldfedialareandthers,sithasidedevelpentandappliatinprspet.Inrdertfurtherptiizetheextratingpressesfpahyanandprtingitsdevelpentandappliatin,thisartilerevieedtheextratin,purifiatinandappliatinfpahyaninreentyearsbasednlarge

3、quantityfdestifrEignliteratures.Keyrds：Pahyan;Extratin;Purifiatin;Appliatin自从20世纪60年代研究创造酵母细胞壁多糖(zysan)具有免疫加强以及抗肿瘤作用以来，人们对多糖的研究产生了极大的爱好，尤其是其生物活性方面的研究。茯苓多糖pahyan是比年来研究较多的一种真菌多糖，泉源于多孔菌科真菌茯苓的菌核，约占整个茯苓菌核干重的70%90%1，其化学构成为13-D-葡聚糖2。茯苓多糖具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、加强机体免疫力、保肝、催眠、抗炎、消石等作用，可普及应用于医疗保舰食品等范畴。茯苓多糖可用于抗肿瘤药物的研发，从

4、而为肿瘤、癌症的治疗提供新的要领，还可作为免疫加强剂，用于保健品的开拓与研制。别的，羧甲基茯苓多糖具有水溶性及增稠性，可配制成种种保健食品。因此，茯苓多糖的提取及开拓意义庞大。现将茯苓多糖的提娶纯化及应用综述如下。1茯苓多糖的提取要领茯苓多糖重要存在于茯苓细胞壁中，根据溶解度的差异又分为水溶性茯苓多糖和碱溶性茯苓多糖3。通常接纳水提醇沉法、碱提醇沉法提龋水溶性多糖的提取重要与提取次数、时间、固液比及温度等因素有关。随着提取次数增多，多糖的浸出率显着增高，但提取次数不易过多，一样平常为两次，不然，将造成后期事情量增大，提取本钱过高。提取时间延伸可进步多糖的浸出率，但浸提时间过长，将造成提取工艺延

5、伸。同时，另有大概增长杂质的溶出，通常选3h。固液比也影响多糖的浸出，在包管浸出率的条件下，尽大概淘汰液体体积，以淘汰浓缩事情量。多糖的浸出率还与浸提温度有关，随后者的升高而进步，但温度过高大概粉碎多糖的布局，一样平常选择80提龋碱溶性多糖的提取一样平常在4下举行，其影响因素除以上几点外，还与碱浓度有关，常接纳0.5l/L。在乙醇沉淀步调中，浸提液浓缩比及乙醇加量是影响茯苓多糖沉淀率的重要因素4。1.1水提醇沉法称取必然量茯苓粉末热水浸提抽滤滤液减压浓缩(浸提液浓缩液=101)95%乙醇沉淀含醇量达80%于冰箱中静置留宿离心沉淀物用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤真空枯燥得茯苓多糖粗品4。该法接纳水作

6、为溶剂，具有价廉、无毒、操纵宁静等长处，其缺点是浸提时间长且提取率较低。1.2稀碱浸提法稀碱法浸提碱溶性茯苓多糖应留意，在提取竣事后应敏捷用醋酸中和，以免多糖活性受影响4。取必然量茯苓粉末溶于0.5l/L稀碱液中，4安排留宿，滤液以10%的醋酸中和至中性，再参加95%乙醇沉淀，以下步调同水提醇沉法。该法提取率较水提醇沉法高，但浸提步伐较繁琐，浸提条件较剧烈，极易粉碎多糖的立体布局，使其生物活性受到限定。1.3酶+热水浸提法该法通过外加酶落解茯苓的细胞壁，从而促进茯苓多糖的浸出。通常参加卵白酶或植物复合酶，后者重要是由纤维素酶、中性卵白酶、果胶酶等构成的混淆酶系。陈莉4接纳植物精提复合酶+热水浸

7、提法提取茯苓多糖，在平凡热水浸提底子上参加酶解步调，通过改变酶参加量、酶解温度、酶解时间等因素将茯苓多糖的浸出率进步到热水浸提法的2.32倍。黄才欢5接纳有机溶剂预处置惩罚一木瓜卵白酶水解加热水浸提法提取多糖，使得水溶性多糖的提取率显着进步，比通例浸泡水煮法的提取率约高85%。酶解法可以在较低的温度下进步多糖的提取率，与传统的热水浸提法比拟，浸提时间收缩，得率进步，是水溶性茯苓多糖提取的好要领。1.4微波、超声波帮助提取法微波提取法利用加热导致细胞内的极性物质，尤其是水分子汲取微波能，从而使胞内温度敏捷上升，液态水汽化产生的压力将细胞膜和细胞壁打破，形成微小的孔洞，进而出现裂纹，从而使胞外溶剂

8、轻易进入细胞内，溶解并开释出胞内产物6。聂金媛等7利用微波帮助法提取茯苓多糖，在微波占空比42%，固液比为150，提取时间18in条件下，提取率达2.792%，为传统水回流提取法的两倍。该法具有受热匀称、快速、高效、宁静、节能等长处，比年来，普及应用于多糖的提龋超声波提取技能也是比年来生长起来的一种提取生物活性物质的要领，具有便利、快速、提取物活性高的特点。赵声兰等8接纳超声波法提取茯苓多糖，但提取率不高，最高到达1.6%。1.5发酵醇沉法发酵醇沉法提取茯苓多糖包罗胞外多糖的提取及胞内多糖的提取，前者将发酵液离心得上清液，浓缩至必然体积，乙醇沉淀，将沉淀物用丙酮、乙醚洗涤，得胞外多糖。后者包罗

9、胞内水溶性多糖及碱溶性多糖的提龋水溶性多糖的提取:取有机溶剂处置惩罚脱脂后的茯苓菌丝体粉末接纳水提醇沉法举行提取；碱溶性多糖的提取:将上述提取水溶性多糖后的菌丝体滤渣用5倍量0.5l/L的NaH浸提，步调同稀碱浸提法。液体发酵具有易于操纵、节省资源、产率高、周期短、可大范围投入产业消费等长处，已渐渐成为猎取茯苓多糖的重要要领9。但研究表白10，发酵茯苓菌丝体中总多糖的提取率较自然茯苓低，这大概由于发酵茯苓菌丝体多糖的提取工艺不美满，有待进一步优化，也大概由于发酵茯苓菌丝体中总多糖占总糖的比例低于自然茯苓。2茯苓多糖纯化要领茯苓多糖提取之后，常常混有卵白质、色素、低聚糖等杂质，需对其举行除杂纯化

10、，所得茯苓多糖为粗多糖，是多糖的混淆物，化学构成不均一，可通过季胺盐沉淀法、分步沉淀法、凝胶层析法、超滤分级等要领分散纯化，成为单一组分多糖。一样平常多接纳二乙基氨基乙基DEAE-纤维素法和别的差异范例的凝胶层析法11。2.1卵白质的去除要领多糖中去除卵白质的要领常见的有Severge法、三氯乙酸法、鞣酸沉淀法、卵白酶水解法等。2.2茯苓多糖的脱色多糖中常含有色素(游离色素或团结色素)。常用的脱色要拥有：双氧水氧化法、离子互换法、金属络合物法、吸附法(纤维素、硅藻土、活性炭等)。双氧水是一种氧化剂，利用时浓度应操纵在30%摆布，其脱色耗时长，脱色不完全，有大概影响多糖的生物活性。离子互换纤维素

11、和离子互换树脂能获得较好的脱色结果，但色素洗脱困难，难以重新得到互换本领。通常用活性炭吸附，但此法易造成多糖的丧失，以是一样平常用弱碱性树脂、DEAE纤维素吸附色素。通过离子互换柱不但能到达脱色的目的，而且可以举行分散13，其缺点为色素的洗脱较耗时。2.3透析除小分子杂质该法利用必然巨细孔目的膜，使茯苓多糖中的无机盐或小分子糖透过从而到达分散的目的。透析在逆相流水中举行，pH值保持在6.06.5。操纵时将必要处置惩罚的茯苓多糖于双蒸水中留宿溶胀后，置于半透膜透析袋中，双蒸水透析，透析液浓缩后用乙醇沉淀多糖4。2.4大孔吸附树脂纯化茯苓多糖大孔吸附树脂是一类不含互换基团，具有大孔布局的高分子吸附

12、剂，其多孔性网状空穴可较好的吸附多糖中的杂质，重要用于分散、脱无机盐、浓缩及撤除有机杂质。李玲14应用大孔树脂纯化茯苓多糖，获得了较好的结果。该法具有吸附量大、选择性好、吸附速率快、易于解吸附、机器强度高、再生处置惩罚轻便等长处。3茯苓多糖的应用3.1茯苓多糖在抗肿瘤方面的应用茯苓多糖具有抗肿瘤作用，可用于抗肿瘤药物的研发，具有毒副作用低的特点。研究表白15，茯苓多糖可诱导S180肉瘤细胞的凋亡，其结果与茯苓多糖的浓度和作用时间有关。对茯苓多糖举行修饰或衍生化处置惩罚，可进步其抗肿瘤活性，且活性与剂量和给药途径相干。茯苓多糖抗肿瘤机理与细胞膜生化特性的改变有关，其影响膜的肌醇磷脂代谢，按捺磷脂

13、酰肌醇通路中的PI转化，阻断通路中卑劣信使分子间的信息下传，从而按捺肿瘤细胞增殖3。茯苓多糖抗肿瘤作用是通过加强机体免疫力、激活监视体系实现的1618。它可进步肿瘤小鼠体内肿瘤坏死因子TNF的活性，后者通过直接到场单核细胞对肿瘤细胞的杀伤，按捺瘤基因的转录实现抗肿瘤作用19。刘吉成等20研究表白，含茯苓多糖的复合多糖与化疗药物环磷酰胺团结对按捺移植性肿瘤S180具有明显的增效作用。羧甲基茯苓多糖P、硒与环磷酰胺适用后具有协同抗癌作用，通过下调bl-2基因的表达、诱导癌细胞凋亡，从而延伸荷瘤小鼠的保存期，同时减轻化疗药物的毒副作用21。因此，可将茯苓多糖与化疗技能共同，用于临床上治疗恶性肿瘤22

14、。3.2茯苓多糖在免疫加强方面的应用茯苓多糖具有加强免疫成果的作用，它可庇护免疫器官，抗胸腺萎缩、抗脾脏增大和抑瘤生长。因此，可作为免疫加强剂，用于进步机体免疫力。陈春霞23研究表白，羧甲基茯苓多糖能显着加强荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬成果,显着增长小鼠脾抗体排泄细胞数(PF)以及特异的抗原团结细胞数(SRF),显着加强小鼠对牛血明净卵白(BSA)诱导的迟发型超敏反响(DTH),显着加强小鼠脾T细胞生长因子(TGF)的生长,这大概是其加强免疫应答成果及抑瘤率的机制之一。张秀军等24研究表白羧甲基茯苓多糖P体表里给药均可明显加强小鼠免疫成果。韩凌等25研究多糖对大鼠小肠上皮细胞株IE-6细胞增殖的

15、影响创造，茯苓多糖具有显着的促进细胞生长的作用，由于小肠上皮细胞被以为在宿主黏膜外貌的自然及得到性免疫体系中起中央调治作用，因此，该研究提示茯苓多糖具有促进机体免疫的作用。刘媛媛等26研究表白P能明显进步IFN-程度，低落IL-10含量，具有较好的调治Th1/Th2细胞因子排泄作用，从而进步机体免疫力。对茯苓多糖加强免疫的机制表白，茯苓多糖通过产生毒因子、开释溶酶体酶、与淋巴细胞协同粉碎抗原和癌细胞、合成和开释滋扰素、消除构造失常等反响完成3。它还可激活T、B淋巴细胞，从而加强机体的细胞免疫和体液免疫。3.3茯苓多糖在抗朽迈方面的应用侯安继等27研究创造，茯苓多糖能差异程度增长血清中超氧化物歧

16、化酶T-SD和u-SD活性，低落丙二醛DA含量。SD可扫除体内自由基，DA含量低落反响体内自由基累积程度落落，因此，该实行提示茯苓多糖具有扫除自由基作用，从而按捺脂质过氧化的活性，起到庇护生物膜和延缓朽迈的作用。因此，茯苓多糖可用于中老年保健品的研发，起到延年益寿之成果。3.4茯苓多糖在抗病毒方面的应用茯苓多糖具有抗病毒作用，可用于抗病毒药物的研发，从而治疗种种病毒玻杨吉成等28研究表白，1001000g/l的P预处置惩罚的人胚肺细胞，具有抗滤泡性口腔炎病毒的作用。张信岳等29研究创造羧甲基茯苓多糖钠2.0g/l对单纯疱疹病毒I型HSV-1的致猪肾传代细胞的细胞病变(PE)具有按捺作用，提示P

17、钠在体外有抗HSV-1作用。段会同等30研究P在人肝癌细胞抗乙型肝炎病毒(HBV)中的作用表白，P对HBV外貌抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的排泄具有较好的按捺作用。3.5茯苓多糖在防辐射方面的应用研究证实，很多多糖对种种电离射线照耀后的动物有显着的防护作用。范雁等31研究茯苓多糖对受60射线照耀后K562白血病细胞及细胞造就上清液自由基的影响，创造茯苓多糖可引起照耀后细胞中DA含量低落，但仍显着高于未照耀组。茯苓多糖比拟射后肿瘤细胞自由基活性无明显影响。由此可推测茯苓多糖对正常细胞辐射防护作用的同时根本不会影响放疗的结果。因此，可用作新的临床抗辐射损伤药物，具有泉源富厚、作用普及、

18、对机体险些无毒副作用等长处。应用远景辽阔。3.6茯苓多糖在别的方面的应用茯苓多糖还具有抗炎、消石、防肾成果衰竭、保肝、催眠等作用。对其举行开拓利用，制备种种茯苓多糖产物，如茯苓多糖制剂、口服液等，已普及用于医疗保健行业。侯安继等32研究茯苓多糖对二甲苯所致小鼠急性炎症和无菌棉球所致大鼠慢性炎症实行表白，茯苓多糖具有按捺急、慢性炎症反响作用。陈焱等33研究创造茯苓多糖能有用按捺大鼠肾内草酸钙结晶的形成和沉积，具有较好的防石作用，可用于临床上结石病的治疗。李绪亮等34研究硫酸酯化茯苓多糖SP对慢性肾成果衰竭大鼠肾成果指标及肾脏形态的影响表白，硫酸酯化茯苓多糖对大鼠慢性肾成果衰竭具有防治作用。P具有保肝作用，它可低落四氯化碳中毒小鼠血清谷丙转氨