散射免疫比浊法

1、散射免疫比浊法散射免疫比浊法第1页目录 第一节 免疫比浊技术原理 第二节 自动化免疫比浊分析 第三节 小结 散射免疫比浊法第2页第一节 免疫比浊技术原理免疫比浊技术分类：透射免疫比浊法（turbidimetric immunoassay）散射免疫比浊法（nephelometry immunoassay）速率散射比浊法终点散射比浊法散射免疫比浊法第3页一、透射免疫比浊法 当一定波长光经过抗原抗体反应形成免疫复合物时会因为反射和吸收而减弱，一定范围内，透射光被吸收量与复合物量呈正相关关系，而复合物量与抗原抗体量为一定函数关系。（一）基础原理散射免疫比浊法第4页 在抗原或抗体量一定条件下，能够利用比

2、浊仪在光源光路方向上测定透射光强度与入射光强度比值或吸光度，来判断待测抗原量，这种方法称为透射比浊法 。散射免疫比浊法第5页透射免疫比浊法光路图散射免疫比浊法第6页待测抗原抗体复合物分子量足够大。抗原抗体复合物数量足够多。含有充分反应时间。高亲和力抗体，并确保抗体过量。（二）技术要求散射免疫比浊法第7页 透射免疫比浊法灵敏度是单向琼脂扩散方法510倍，但其与标识免疫分析技术相比还不够高。所以，透射比浊类自动分析仪用于免疫测定已趋降低，该测定原理主要用于生化分析仪。（三）方法学评价散射免疫比浊法第8页抗原抗体反应曲线散射免疫比浊法第9页二、散射免疫比浊法散射比浊法是指一定波长光沿水平轴照射，经过

3、溶液时碰到其中抗原抗体复合物，光线被粒子颗粒折射而发生偏转，产 生散射光。（一）基础原理散射免疫比浊法第10页 其中光线偏转角度与发射光波长和抗原抗体复合物大小和多少亲密相关。散射光强度与复合物含量成正比，即待测抗原越多，形成复合物越多，散射光就越强。散射免疫比浊法第11页透射浊度法和散射浊度法光路散射免疫比浊法第12页 应选择适当光源强度、反应时间、测量角度及光源波长。另外，要注意确保抗原浓度适当。另外，还要选择适宜离子强度、pH值等。（二）技术要求散射免疫比浊法第13页 散射免疫比浊法是当今免疫化学分析中比较有优势方法。能够实现自动化管理，但用于免疫沉淀反应有很多缺点，如因为是一次性测定光

4、吸收值，没有考虑单个待测样本散射效果，可能使测定结果不准确。（三）方法学评价散射免疫比浊法第14页 测定时间依然较长，且随时间延长，抗原抗体复合物有重新结合趋势，可影响散射值改变及存在反应本底，在微量测定时，本底干扰是影响测定准确性主要原因。散射免疫比浊法第15页三、速率免疫比浊法该法是抗原抗体结合反应一个动态测定方法。将抗原抗体沉淀反应与散射比浊分析相结合，对单位时间内抗原和抗体结合形成复合物速度进行动力学测定即为速率免疫比浊法。（一）基础原理散射免疫比浊法第16页 当抗体浓度固定于一定范围时，速度峰值高低与抗原含量成正比，伴随时间延长，免疫复合物量逐步增多，抗原抗体结合速度峰值在一定时间出

5、现。经过微机处理即可得到待测蛋白成份含量。散射免疫比浊法第17页累计时间复合物产生总量产生速率510152025303540455055608132560150230300360415450480500512359080706055453020 抗原抗体复合物形成时间与速率关系散射免疫比浊法第18页 速率散射比浊法峰值出现时间与抗体浓度及纯度直接相关，需选取抗体纯度及亲和力交高试剂。另外，要确保待测样本血清性状符合要求，如严重脂血等即为不合格样本。（二）技术要求散射免疫比浊法第19页 该法含有快速、敏感度及精密度高特点，其最大优点在于快速，检测无须等到抗原抗体到达平衡，大大节约反应时间，每小时

6、可检测标本数十份；敏感度高，最小检出量达微克/升水平。（三）方法学评价散射免疫比浊法第20页四、免疫胶乳比浊法将抗体吸附在大小适中、均匀一致胶乳颗粒上，制成致敏胶乳颗粒，当碰到对应抗原时，发生交联反应，形成抗原抗体复合物，胶乳颗粒发生凝集。（一）基础原理散射免疫比浊法第21页 单个胶乳颗粒在入射光波长之内并不妨碍光线透过，两个及其两个以上胶乳颗粒凝聚时则使透过光降低，其降低程度与胶乳颗粒凝聚程度呈正比，即与待测抗原量呈正比，由此可检测样本中特定抗原含量。散射免疫比浊法第22页 胶乳颗粒均一性将直接影响光散射作用，影响检测结果，所以需要选择均匀一致胶乳颗粒。另外，试剂需要加保护剂以提升其稳定性，

7、所用器皿要洁净，防止杂质微粒干扰。（二）技术要求散射免疫比浊法第23页 该法敏感度高，试剂稳定，个体免疫复合物对结果影响也小，所以结果稳定、可靠，特异性好，准确度高，且不需要特殊仪器设备，普通分光光度计、自动化生化分析仪或散射比浊仪均可使用。返回章目录（三）方法学评价散射免疫比浊法第24页（一）BN特种蛋白分析测定系统该系统测定方法是透射免疫比浊法一个改良。以发光二极管作为光源，检测前向角1324度散射光，然后利用硅化光电二极管接收散射光信号，经过微电脑处理，与标准曲线进行比较，最终转换成待检物质浓度。第二节 自动化免疫比浊分析一、主流免疫比浊设备概况1.测定原理散射免疫比浊法第25页 系统由

8、分析仪、计算机、条码读取器、打印机四个别组成，其中分析仪是主要组成个别，包含散射测浊仪、自动加样系统、运输装置和比色杯装置。 2.仪器基础组成散射免疫比浊法第26页BN100、BN特种蛋白分析分析系统散射免疫比浊法第27页本系统属于速率散射比浊分析法，在抗体过量前提下，光束经过抗原抗体复合物时所产生散射光速率改变大小与抗原浓度成正比。速率峰值经过电脑处理系统转换成待测抗原浓度。1.测定原理（二）ARRAY分析系统散射免疫比浊法第28页 ARRAY系统由分析仪、电脑处理系统、打印机组成，其主要组成个别为分析仪，由加液系统、散射测浊仪、40孔样本转盘、20孔试剂转盘、软盘驱动器等组成。2.仪器基础组成散射免疫比浊法第29页Array360、IMMAGE特种蛋白分析分析系统散射免疫比浊法第30页二、免疫比浊分析主要影响原因1抗原抗体百分比 抗原抗体百分比要适当。2抗体纯度与效价 诊疗试剂应尽可能选择高纯度与高效价抗体。3免疫复合物大小及稳定性 溶液中免疫复合物颗粒分散度尽可能相同，颗粒应该不轻易相互聚集。散射免疫比浊法第31页4增聚剂 利用增聚剂破坏抗原抗体水化层，促进反应进行。5. 离子强度 PBS是很好反应液 。 返回章目录散射免疫比浊法第32页小 结 经典免疫沉淀反应通常是在抗原抗体反应终点进行结果判断，存在操作繁