细菌培养方法

1、关于细菌的培养方法第一张，PPT共三十一页，创作于2022年6月教学目标1. 熟悉常用的纯种细菌的接种方法。2. 掌握标本中细菌的分离培养技术。3. 了解细菌广泛分布于自然界及正常人体，树立“有菌观念”。4. 深刻认识“无菌操作”对于微生物实验及医药学实践的重要性。5进一步理解“正常菌群”的概念。第二张，PPT共三十一页，创作于2022年6月实验主要内容1录相：细菌的培养方法2操作：空气中细菌的检查 （沉降法 血平板 1块/6人）呼吸道细菌的检查 （咽拭子法培养 血平板 1块/3人）随身物品的细菌检查（手指消毒前后 普通平板1块/3人）细菌的接种法（液体、半固体、固体 1套/3人） 材料： 大

2、肠埃希菌培养物 （1支/6人） 碘酒、75%酒精、棉签等 （1套/6人）第三张，PPT共三十一页，创作于2022年6月培养基的制备一、培养基（culture medium）由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。 第四张，PPT共三十一页，创作于2022年6月（一）培养基的类型及应用1、按用途划分1）基础培养基 能满足一般细菌生长繁殖的营养需要，如肉汤（包括牛肉膏、蛋白胨、氯化钠等）。2）营养培养基 在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏等。第五张，PPT共三十一页，创作于2022年6月3）鉴别培养基4）选择培养基 用于鉴别不同类型细菌的培养基。特定的化学反应，产

3、生明显的特征性变化，根据这种特征性变化，可将该种细菌与其他细菌区分开来。 将某种细菌从混杂的细菌群体中分离出来的培养基。根据不同种类细菌的特殊营养需求，在培养基中加入相应的特殊营养物质；或者加入某些化学物质，抑制不需要的细菌生长，有利于所需细菌的生长。5）厌氧培养基第六张，PPT共三十一页，创作于2022年6月SS琼脂培养基 （Salmonella-Shigella agar） 大肠埃希菌沙门菌志贺菌第七张，PPT共三十一页，创作于2022年6月2、根据物理状态划分 液体培养基：增菌固体培养基（琼脂浓度为23）： 增菌，分离培养半固体培养基（琼脂浓度为0.2-0.5%）：动力检查，保种 液体培

4、养基 固体培养基 半固体培养基第八张，PPT共三十一页，创作于2022年6月（二）细菌生长繁殖的条件1充足的营养物质；2适宜的温度；3合适的酸碱度（ph）；4必要的气体环境；第九张，PPT共三十一页，创作于2022年6月温 度嗜冷菌 (10-15)嗜温菌（30-40）：绝大多数病原菌嗜热菌（50-85）第十张，PPT共三十一页，创作于2022年6月 pH 嗜中性菌（ 5 to 8）嗜酸性菌（below 5.5）嗜碱性菌（above 8.5） 多数病原菌最适酸碱度为PH7.2-7.6霍乱弧菌耐碱 PH8.4-9.2结核分支杆菌耐酸 PH6.5-6.8第十一张，PPT共三十一页，创作于2022年6

5、月气体环境氧和二氧化碳按细菌对氧的需求可分为四种类型：（1）专性需氧菌（obligate aerobe, O2 20%）（2）兼性厌氧菌（facultative anaerobe, O2 : Yes or no ）（3）微需氧菌（microaerophilic bacterium , O2 :210% ）（4）专性厌氧菌（obligate anaerobe, O2 : No ）某些细菌如奈瑟菌在培养时需要提供5-10%二氧化碳；第十二张，PPT共三十一页，创作于2022年6月二、细菌在培养基中的生长现象1固体培养单个微生物在适宜的固体培养基表面生长、繁殖到一定程度，可以形成肉眼可见的有一定形态

6、结构的细菌集团，称为菌落（colony）。菌落特征是鉴别细菌的重要依据之一。第十三张，PPT共三十一页，创作于2022年6月2 液体培养表面生长 沉淀生长 混浊生长 第十四张，PPT共三十一页，创作于2022年6月3 半固体培养常用于检查细菌动力无动力 有动力第十五张，PPT共三十一页，创作于2022年6月本次试验的操作：空气中细菌的检查（沉降法，血平板）呼吸道细菌的检查（咽拭子或咳碟培养，血平板）随身物品细菌检查（普通平板）细菌的接种法：液体、半固体、固体培养基 第十六张，PPT共三十一页，创作于2022年6月空气中细菌的检查 检查空气中细菌的方法很多，沉降法是其中的一种。它是利用含有细菌的

7、尘粒或气溶胶粒因重力作用而自然下降于培养基表面，通过细菌培养，计数其菌落数，而粗略地进行评估。第十七张，PPT共三十一页，创作于2022年6月 操作：将血平板打开盖，放到教室的四个角上，静止15分钟后，合上盖后送37孵箱培养。 沉降法简单易行，缺点是不够准确。但它客观地反映了空气污染的程度和卫生通风状况，对手术室、食品业等有重要的参考意义，是判断空气污染的指标之一。第十八张，PPT共三十一页，创作于2022年6月 据推算，每100cm培养基在空气中暴露5分钟，其表面接受自然沉降的细菌数约相当于10升空气中所含的细菌量。 所以： 每m空气中活菌数=（100cm培养基上菌落平均数/30）x1000

8、。第十九张，PPT共三十一页，创作于2022年6月 鼻咽喉及口腔是人体与外界相通的腔道，常常有不同种类的细菌存在。这些细菌常是条件致病菌，在一般情况下并不致病，但是当机体的抵抗下降时，可引起疾病而对机体造成危害。 由于寄居人体的关系，这些细菌对营养的要求较高，所以常用含血的培养基进行分离。 鼻咽喉及口腔中细菌的检查 咳碟试验第二十张，PPT共三十一页，创作于2022年6月方法： （1块3人） 打开血平板，将平板置于口腔前约15cm处，对准培养基表面用力咳嗽34次，然后盖好平板盖，放置于37孵箱内培养24小时观察结果。第二十一张，PPT共三十一页，创作于2022年6月 在人体的皮肤表面有多种细菌

9、存在，用水洗手或用肥皂洗手，可以除去皮肤上的污垢和灰尘，从而减少手上细菌的数量，但并不能有效的杀死细菌。而日常医疗、试验工作中常用的化学消毒剂如碘酒、酒精等有很好的杀菌作用，它们不仅对细菌的繁殖体，对芽孢也有一定的杀灭效果，所以在临床医疗中广泛应用。正常人体皮肤及随身物品的细菌检查第二十二张，PPT共三十一页，创作于2022年6月1、将平板底部用mark笔划线分成均匀的8个区，分别标记为。2、用右手的食指在区上轻轻按一下，然后用肥皂在流水下将手洗干净，用无菌棉签拭干右手食指皮肤上的水，再轻轻在区培养基上按一下。3、用左手食指轻轻在区按一下，然后用棉签蘸碘酒消毒左手食指皮肤，待干后轻轻在区按一下

10、。4、任取随身物品在区各按一下。5、盖好平板，送37孵箱培育24小时后观察结果。操作与注意事项（1块3人）第二十三张，PPT共三十一页，创作于2022年6月注意事项： 用手指或物品按培养基时，接触面可稍微大一些，但切勿用力，否则，易将培养基压破，影响结果的判断。如果不慎压破，可在临近未破处重新按一下。第二十四张，PPT共三十一页，创作于2022年6月三线法分离接种第二十五张，PPT共三十一页，创作于2022年6月 细菌的分离接种琼脂平板划线分离接种法（固体培养基） 三线法穿刺接种法（半固体培养基）液体培养基接种法 接种时要注意无菌操作，避免污染，防止细菌外溢污染环境。第二十六张，PPT共三十一页，创作于2022年6月