血型检查方法学评价及其质量控制

1、血型检查方法学评价血型检查方法学评价及其质量控制及其质量控制血型概述血型概述主要内容主要内容l ABO血型系统血型系统lABOABO血型系统抗原血型系统抗原lABOABO血型系统抗体血型系统抗体lABOABO血型系统亚型血型系统亚型l ABO血型鉴定血型鉴定 l检测原理检测原理l鉴定方法鉴定方法l方法学评价方法学评价l质量控制质量控制l RH血型系统血型系统lRHRH血型系统血型系统抗原抗原lRHRH血型系统抗体血型系统抗体l RH血型鉴定血型鉴定 l检测原理检测原理l鉴定方法鉴定方法l方法学评价方法学评价l质量控制质量控制ABO血型系统抗体血型系统抗体l 分为天然抗体和免疫性抗体分为天然抗体

2、和免疫性抗体l 天然抗体主要为天然抗体主要为IgMIgM型型免疫球蛋白免疫球蛋白l 免疫性抗体则来自母婴血型不合的妊娠或血型不合免疫性抗体则来自母婴血型不合的妊娠或血型不合的输血，通常是来自母体的的输血，通常是来自母体的IgGIgG型型免疫球蛋白。免疫球蛋白。ABO血型系统抗体血型系统抗体两种抗体的比较两种抗体的比较特性特性IgMIgM型型IgGIgG型型分子量（kD）1000160耐热性（70）破坏稳定与红细胞结合最适温度（）4-2537与红细胞反应介质生理盐水酶处理或清蛋白溶液被血型物质中和能不能通过胎盘不能能ABO血型系统亚型血型系统亚型l A抗原的主要亚型有抗原的主要亚型有A1和和A2

3、，均能与抗，均能与抗A血清发生血清发生直接凝集反应。直接凝集反应。l AB血型中也存在相应的血型中也存在相应的A1 B和和A2 B亚型。亚型。l B亚型较少见，且抗原性弱，故临床意义不大。亚型较少见，且抗原性弱，故临床意义不大。ABO血型检测原理血型检测原理l 血型抗原与相应抗体在反应介质中形成红细胞和相血型抗原与相应抗体在反应介质中形成红细胞和相应血型抗体结合的免疫复合物，出现肉眼可见的凝应血型抗体结合的免疫复合物，出现肉眼可见的凝集现象。集现象。l 正向定型（正向定型（direct typingdirect typing）l 反向定型（反向定型（indirect typingindirec

4、t typing）鉴定方法鉴定方法l 血凝试验血凝试验 玻片法玻片法 试管法试管法l 全自动微板法全自动微板法 l 流式细胞技术流式细胞技术l 酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验l 微柱凝胶试验微柱凝胶试验鉴定方法鉴定方法l 盐水凝集法（盐水凝集法（salt medium test）鉴定方法鉴定方法正定型，玻片法正定型，玻片法鉴定方法鉴定方法玻片法评价玻片法评价l 它是目前临床常用的血型鉴定的它是目前临床常用的血型鉴定的初筛试验初筛试验方法。方法。l 具有操作简便，节省材料的优点。具有操作简便，节省材料的优点。l 但但弱凝集反应弱凝集反应需要借助显微镜观察确定。需要借助显微镜观察确定。鉴定方法鉴

5、定方法反定型，试管法反定型，试管法鉴定方法鉴定方法试管法评价试管法评价优点优点l 试管法是交叉配血试验中最基础的试验方法之一。试管法是交叉配血试验中最基础的试验方法之一。l 与玻片法原理相同，但是借助试管与玻片法原理相同，但是借助试管更大的反应空间更大的反应空间，并对待测红细胞予以一定的浓度的并对待测红细胞予以一定的浓度的稀释稀释或者加入更或者加入更多的待测红细胞，通过多的待测红细胞，通过低速离心低速离心后可根据有无肉眼后可根据有无肉眼可见凝集反应来判断结果。可见凝集反应来判断结果。l 由于待测红细胞经过稀释，在一定程度上由于待测红细胞经过稀释，在一定程度上减少了血减少了血液中非特异性抗体的浓

6、度液中非特异性抗体的浓度，从而提高了试验的敏感，从而提高了试验的敏感性。比玻片法更具有性。比玻片法更具有准确可靠准确可靠的优点。的优点。鉴定方法鉴定方法试管法评价试管法评价缺点缺点l 只能检测出完全抗体（抗只能检测出完全抗体（抗A、抗、抗B）引起的血型不）引起的血型不合，对免疫性抗体引起的血型不合不能检出，有输合，对免疫性抗体引起的血型不合不能检出，有输血史或不明输血史及妊娠史不能用该法。血史或不明输血史及妊娠史不能用该法。l 本实验中的生理盐水对血清（浆）中的抗体有稀释本实验中的生理盐水对血清（浆）中的抗体有稀释作用，易导致配血结果假阴性。作用，易导致配血结果假阴性。l 易受冷凝集素的干扰。

7、易受冷凝集素的干扰。方法学评价方法学评价盐水凝集法盐水凝集法 l 操作简便，无需特殊仪器。操作简便，无需特殊仪器。l 玻片法：无需离心，适用于玻片法：无需离心，适用于血型普查血型普查。但反应时间长，。但反应时间长，灵敏度差，凝集较弱时易导致定型错误。灵敏度差，凝集较弱时易导致定型错误。不适于反向不适于反向定型。定型。l 试管法：用离心法加速反应，所需时间短，适于试管法：用离心法加速反应，所需时间短，适于急诊急诊定型定型。因离心增强红细胞凝集，可发现较弱的凝集现。因离心增强红细胞凝集，可发现较弱的凝集现象，有助于检出象，有助于检出亚型亚型，故为常用血型鉴定方法。，故为常用血型鉴定方法。l 只能只

8、能检测完全抗体易受冷凝集素干扰检测完全抗体易受冷凝集素干扰鉴定方法鉴定方法l 凝胶微柱法凝胶微柱法鉴定方法鉴定方法l 凝胶微柱法的结果凝胶微柱法的结果方法学评价方法学评价凝胶微柱法凝胶微柱法l 重复性好，特异性和灵敏度高，结果准确。重复性好，特异性和灵敏度高，结果准确。l 试剂成本较高，需用离心设备。试剂成本较高，需用离心设备。l 根据不同需要可选用中性凝胶、特异凝胶或抗球蛋根据不同需要可选用中性凝胶、特异凝胶或抗球蛋白凝胶作为反应介质白凝胶作为反应介质。l 结果既可肉眼观察，也可用血型分析仪分析。结果既可肉眼观察，也可用血型分析仪分析。鉴定方法鉴定方法l 全自动微板法全自动微板法 标准化加样

9、、孵育、离心、标准化加样、孵育、离心、悬浮、静止悬浮、静止 反应前后反应前后吸光度值增加吸光度值增加数数值的计算值的计算 对血型进行正定型与反定对血型进行正定型与反定型型方法学评价方法学评价全自动微板法全自动微板法l 此法正反定型试验，准确率高，且能提高检测灵敏此法正反定型试验，准确率高，且能提高检测灵敏度，使度，使弱凝集弱凝集样本样本更加更加易显现易显现。l 快速、准确、自动化程度高等优点，适合快速、准确、自动化程度高等优点，适合批量操作批量操作。l 血型微量化检测具有节约大量昂贵抗血清、缩短检血型微量化检测具有节约大量昂贵抗血清、缩短检测时间、操作程序简单等优点，目前在各大采供血测时间、操

10、作程序简单等优点，目前在各大采供血机构已得到广泛应用。机构已得到广泛应用。鉴定方法鉴定方法l 流式细胞技术流式细胞技术 稀释稀释：将待测血样的红细胞用生理盐水稀释成百分之五：将待测血样的红细胞用生理盐水稀释成百分之五的红细胞悬液。的红细胞悬液。 标记标记：分装各管分别等比加入荧光素标记抗体，避光放：分装各管分别等比加入荧光素标记抗体，避光放置置15min待受检红细胞上的待受检红细胞上的血型抗原与相应荧光标记抗血型抗原与相应荧光标记抗体结合体结合后，用生理盐水洗涤离心除去未结合抗体。后，用生理盐水洗涤离心除去未结合抗体。 检测检测：重悬后立即用流式细胞仪检测与荧光标记抗体结：重悬后立即用流式细胞

11、仪检测与荧光标记抗体结合的红细胞，通过软件分析，从而得到待测样本的红细合的红细胞，通过软件分析，从而得到待测样本的红细胞血型。胞血型。方法学评价方法学评价流式细胞术流式细胞术l在细胞分型方面具有速度快、灵敏度高、特异性好，在细胞分型方面具有速度快、灵敏度高、特异性好，检测结果准确，重复性好。检测结果准确，重复性好。l特别适合应用于特别适合应用于ABO血型血型亚型亚型的快速鉴定。的快速鉴定。l目前有研究指出流式细胞技术亦可通过分离孕妇血液目前有研究指出流式细胞技术亦可通过分离孕妇血液中的胎儿红细胞用于中的胎儿红细胞用于产前非侵入性产前非侵入性胎儿血型检测。胎儿血型检测。质量控制质量控制1.1.标

12、准血清标准血清 要求要求：新鲜，在有效期内，效价高，凝集力强，严防污新鲜，在有效期内，效价高，凝集力强，严防污染染 常用的抗血清有：常用的抗血清有： 人血清人血清ABOABO血型抗体：稳定性高，已灭活补体血型抗体：稳定性高，已灭活补体 人人ABOABO血型单克隆抗体：稳定性较人血清抗体的稳定性血型单克隆抗体：稳定性较人血清抗体的稳定性差差质量控制质量控制2.2.被检红细胞被检红细胞 l 标本新鲜，严防污染。标本新鲜，严防污染。l 某些疾病出现假凝集，可加做自身血清和红细胞，某些疾病出现假凝集，可加做自身血清和红细胞，自身红细胞和生理盐水对照试验及结合反定型结果自身红细胞和生理盐水对照试验及结合

13、反定型结果进行鉴定。进行鉴定。l 当疑有血浆成分干扰血型鉴定时可用生理盐水反复当疑有血浆成分干扰血型鉴定时可用生理盐水反复洗涤红细胞以除干扰。洗涤红细胞以除干扰。质量控制质量控制3.3.试验器材试验器材 l 器材清洁、干燥、标记清楚。器材清洁、干燥、标记清楚。l 用试管法定型时，应同时进行正向和反向定型。须设置用试管法定型时，应同时进行正向和反向定型。须设置对对照照。l 红细胞浓度按要求配置，红细胞与相应抗体的比例适当。红细胞浓度按要求配置，红细胞与相应抗体的比例适当。l 反应温度、反应时间、离心时间。反应温度、反应时间、离心时间。l 弱弱A A亚型和弱亚型和弱B B亚型，肉眼判断必同时须用亚

14、型，肉眼判断必同时须用显微镜复查显微镜复查。Rh血型系统抗原及抗体血型系统抗原及抗体l RhRh血型系统抗原血型系统抗原l目前已发现的目前已发现的RhRh抗原有抗原有4545种，其中与人类关系最为密切的种，其中与人类关系最为密切的是是D D、E E、C C、c c、e e五种。五种。lD D抗原的抗原性最强。抗原的抗原性最强。l RhRh血型系统抗体血型系统抗体l绝大多数绝大多数RhRh抗体由输血或妊娠刺激机体免疫系统产生的抗体由输血或妊娠刺激机体免疫系统产生的IgGIgG型免疫性抗体。型免疫性抗体。l主要主要RhRh血型系统抗体有抗血型系统抗体有抗D D、抗、抗E E、抗、抗C C、抗、抗c

15、 c、抗、抗e e五种，其五种，其中抗中抗D D最为常见。最为常见。Rh血型检测方法血型检测方法l 酶介质法酶介质法l 聚凝胺试验聚凝胺试验（polybrenepolybrene test test）Rh血型检测方法血型检测方法l抗球蛋白试验（抗球蛋白试验（antiglobulinantiglobulin test test）Rh血型检测方法血型检测方法l人源盐水介质抗人源盐水介质抗D D试验试验l低离子强度溶液试验低离子强度溶液试验方法学评价方法学评价 方方 法法 评评 价价酶介质法（直接法） 简单、快速、经济，但灵敏度低。酶介质法（间接法） 简单、经济、灵敏。可鉴定抗原和检测抗体。 但较费

16、时，准确性和稳定性较差低离子强度溶液试验 反应时间短，灵敏度高聚凝胺试验 快速、灵敏、准确性高，应用较多抗球蛋白试验 检查不完全抗体最可靠方法，但操作复杂， 费时，试剂较贵。多用于新生儿溶血病的诊 断及因血型不合输血产生的血型抗体的检测人源盐水介质抗D试验 操作简单，特异性和灵敏度均高，应用广泛， 但试剂昂贵质量保证质量保证l 检测前检测前l标本处理：标本新鲜，严防污染。为避免假阴性，标本处理：标本新鲜，严防污染。为避免假阴性，被检红细胞要用生理盐水充分洗涤。被检红细胞要用生理盐水充分洗涤。l试剂和器材：使用有效期内的合格试剂。抗血清要试剂和器材：使用有效期内的合格试剂。抗血清要妥善保存，防治

17、污染。使用的仪器、器材清洁干燥。妥善保存，防治污染。使用的仪器、器材清洁干燥。质量保证质量保证l 检测中检测中 抗原抗体比例、介质浓度抗原抗体比例、介质浓度 反应时间、反应温度、离心条件反应时间、反应温度、离心条件 阴性对照、阳性对照及试剂对照阴性对照、阳性对照及试剂对照 红细胞上的红细胞上的Rh抗原与相应抗体反应形成的抗原与相应抗体反应形成的凝集较弱凝集较弱，观察结果观察结果不可用力振摇不可用力振摇 当结果可疑时，须用当结果可疑时，须用显微镜观察确认显微镜观察确认质量保证质量保证l 检测后检测后 复查实验全过程，填写试验报告，查对无误后方复查实验全过程，填写试验报告，查对无误后方可发出报告。

18、可发出报告。 标本置标本置4保存保存1周以上，以备复查。周以上，以备复查。临床上血型检查的质量控制临床上血型检查的质量控制1 1、 医务人员的问题医务人员的问题临床医生临床医生临床护士抽取血标本时，未校对患者的姓名、床号临床护士抽取血标本时，未校对患者的姓名、床号检验科人员没有对报告核对正确，造成血型鉴定错检验科人员没有对报告核对正确，造成血型鉴定错误误临床上血型检查的质量控制临床上血型检查的质量控制2 2、 被检红细胞被检红细胞 血型测定的错误血型：检测时只用肉眼观察结果，微弱血型测定的错误血型：检测时只用肉眼观察结果，微弱、细小的凝集未看到、细小的凝集未看到 冷凝集素：在支原体肺炎、肝硬化等疾病患者血清中，冷凝集素：在支原体肺炎、肝硬化等疾病患者血清中，冷凝集素很高，严重干扰血型鉴定。冷凝集素很高，严重干扰血型鉴定。 ABOABO亚型：抗原结构和位点数改变导致的弱表现。亚型：抗原结构和位点数改变导致的弱表现。 ABOABO血型抗体减弱：当献血者血清中抗血型抗体减弱：当献血者血清中抗A A