实验6淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测

1、（1 1）稳定性显著提高稳定性显著提高( (热稳定性，对各种试剂的稳定性等热稳定性，对各种试剂的稳定性等) ) （2 2）同一批固定化酶能在工艺流程中）同一批固定化酶能在工艺流程中重复多次地使用重复多次地使用；（3 3）固定化后，）固定化后，易和反应物分开易和反应物分开，有利于控制生产过程有利于控制生产过程，同时也同时也省去了热处理使酶失活的步骤省去了热处理使酶失活的步骤；酶的固定化方法主要可分为四类：酶的固定化方法主要可分为四类：吸附法、共价偶联法、吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法交联法和包埋法等。吸附法和共价偶联法又可统称为载等。吸附法和共价偶联法又可统称为载体结合法。体结合法。酶酶酶与

2、载体形成范德华力酶与载体形成范德华力酶和载体结合不牢固，在使用过程中容易脱落，所以使用受到限制。酶和载体结合不牢固，在使用过程中容易脱落，所以使用受到限制。 但必须注意，参加共价结合的氨基酸残基但必须注意，参加共价结合的氨基酸残基应当是应当是酶催化活性非必需基团酶催化活性非必需基团，如若共价，如若共价结合包括了酶活性中心有关的基团，会导结合包括了酶活性中心有关的基团，会导致酶的活力损失。致酶的活力损失。是将酶与聚合物载体以共价键结合的固定化方法。是将酶与聚合物载体以共价键结合的固定化方法。酶中的酶中的氨基、羧基氨基、羧基、巯基、羟基、咪唑基、巯基、羟基、咪唑基、吲哚基、苯环等常与载体共价结合吲

3、哚基、苯环等常与载体共价结合载载体体共共价价键键交联法：是使用双功能或多功能试剂使酶分子交联法：是使用双功能或多功能试剂使酶分子之间相互交联呈网状结构的固定化方法。之间相互交联呈网状结构的固定化方法。其中使用最广泛的是其中使用最广泛的是戊二醛戊二醛。戊二醛和酶蛋白中的游离氨基发生。戊二醛和酶蛋白中的游离氨基发生反应，从而使酶分子之间相互交联形成固定化酶。反应，从而使酶分子之间相互交联形成固定化酶。戊二醛戊二醛但是交联法中酶的活性中心构造可能受到影响，而使但是交联法中酶的活性中心构造可能受到影响，而使酶失活明显酶失活明显。常用的载体有常用的载体有海藻酸钠凝胶海藻酸钠凝胶微胶囊包埋法，微胶囊包埋法

4、，酶被包埋成微酶被包埋成微胶囊型胶囊型凝胶包埋法，酶凝胶包埋法，酶被包埋成网格型被包埋成网格型常用的载体有常用的载体有聚酰胺、聚酰胺、火棉胶、醋酸纤维素火棉胶、醋酸纤维素四、固定化酶技术应用四、固定化酶技术应用如生产高果糖浆的图示：如生产高果糖浆的图示：把酶固定在反应柱上把酶固定在反应柱上有何好处？有何好处？反应柱能连续使用半反应柱能连续使用半年，大大降低了生产年，大大降低了生产成本，提高果糖的产成本，提高果糖的产量和质量。量和质量。 淀粉淀粉 糊精糊精葡萄糖葡萄糖 麦芽糖麦芽糖遇碘显蓝色遇碘显蓝色遇碘显红色遇碘显红色遇碘不显蓝色遇碘不显蓝色遇碘不显蓝色遇碘不显蓝色淀粉酶淀粉酶淀粉酶淀粉酶糖化

5、淀粉酶糖化淀粉酶 淀粉淀粉 糊精糊精 石英砂石英砂 淀粉酶淀粉酶反应柱反应柱 分布着小分布着小孔的筛板孔的筛板五、五、“- 淀粉酶固定化淀粉酶固定化”实验步骤实验步骤1、淀粉酶的固定化。淀粉酶的固定化。5mg 淀粉酶溶于淀粉酶溶于4ml蒸馏水，加入蒸馏水，加入5mg石英砂，搅拌石英砂，搅拌30min2、将石英砂装入含气门心并用夹子封住的注、将石英砂装入含气门心并用夹子封住的注射器中。用射器中。用40ml蒸馏水用流速蒸馏水用流速1ml/min来洗来洗涤除去未吸附的游离淀粉酶涤除去未吸附的游离淀粉酶3、使淀粉溶液以、使淀粉溶液以0.3ml/min的流速过柱，在流的流速过柱，在流出出5ml后接收后接收0.5ml流出液。加入流出液。加入1-2滴滴KI-I2溶