胎盘因子的制备及其对淋巴细胞免疫调节作用的体外研究_医学论文_医药学论文__8404

胎盘因子的制备及其对淋巴细胞免疫调节作用的体外研究_医学论文_医药学论文_【摘要】为了建立制备胎盘因子（PLACENTAFACTOR,PF）的新方法，研究PF理化性质，并探讨PF体外应用对淋巴细胞的影响，应用超滤法制备PF，对PF的含量及各种成分的分子量进行测试，并以环孢素ACSA为阳性对照，生理盐水NS为阴性对照。应用甲基噻唑基四唑（MTT）法检测植物血凝素（PHA）诱导的淋巴细胞增殖及混合淋巴细胞反应（MLR）；应用流式细胞术检测T细胞CD69的表达；应用乳酸脱氢酶释放法测定自然杀伤（NK）细胞对肿瘤细胞K562的杀伤作用。结果表明在本研究中所制备的PF是一组小分子多肽类物质，主要含有两种成分，分子量分别为9187KD及4794KD；用BRADFORD法证实，多肽质量为5769MG/G鲜重胎盘。体外研究显示，PF抑制PHA诱导的淋巴细胞增殖及混合淋巴细胞反应的作用与环孢菌素A（CSA）相当（P005）。PF和CSA均可下调佛波酯（PMA）离子霉素（IONOMYCIN）刺激后T淋巴细胞活化抗原CD69的表达（PFVSCSA,P005）。细胞杀伤试验显示，PF组NK细胞杀伤活性略高于或等于NS组（P005），而CSA组杀伤活性明显低于NS组（P005）BOTHPFANDCSACOULDDOWNREGULATETHEEXPRESSIONOFCD69ONTCELLSWHICHHADBEENSTIMULATEDBYPMAPLUSIONOMYCINPFVSCSA,P005THECYTOTOXICITYOFNKCELLSAGAINSTK562CELLSINPFGROUPWASSLIGHTLYHIGHEROREQUIVALENTASCOMPAREDWITHTHATINNSGROUPP005,BUTTHECYTOTOXICITYINCSAGROUPWASMUCHLOWERTHANTHATINNSGROUPP005），并呈剂量依赖关系。CD69抗原亦称早期激活抗原，文献报道CD69可通过提高钙离子浓度，上调IL2R的P55链，产生TH1型细胞因子，引发淋巴细胞增殖，起到信号传递功能17，CD69仅表达于活化的T细胞，而在静止的T细胞表面没有表达。我们应用流式细胞仪检测了PMA离子霉素刺激后T细胞CD69的表达情况，发现PF可显著抑制由PMA离子霉素诱导的T细胞活化，亦与剂量相关，尤其是在高剂量组，抑制作用强于CSA（P005）。NK细胞具有广谱的抗肿瘤作用，尤其对淋巴瘤、白血病最为有效。另外，NK细胞还可以杀伤病毒感染的靶细胞，并且对某些胞内感染的细菌、真菌及寄生虫也有杀伤作用。我们应用乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞对肿瘤细胞K562的杀伤活性，研究证实，PF不影响NK细胞对肿瘤的杀伤，甚至在某些剂量组，还可促进NK细胞对肿瘤的杀伤，但CSA却明显降低NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。上述体外试验结果表明，对T细胞而言，PF可以产生与CSA相当的免疫抑制作用；但与CSA不同，它不影响甚或促进NK细胞对肿瘤的杀伤。本研究建立了一种制备PF的新方法，并首次证实PF体外应用对T细胞有强大的免疫抑制作用，可抑制由丝裂原及异基因抗原诱导的T细胞增殖及活化，同时不影响甚或促进NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。这些结果表明，PF在抑制GVHD的同时，或许可以较好地保留移植物抗肿瘤效应（GVT），是一种较理想的、有应用潜能的抗GVHD制剂。今后，我们将进一步研究PF在动物体内应用对机体免疫系统功能的影响。【参考文献】1LIUF，LUDPPURIFICATIONOFPLACENTAELUTEDGAMMAGLOBULINSANDTHEIRSTRONGEFFECTAGAINSTGRAFTVERSUSHOSTREACTIONSINVITROANDINVIVOINTJHEMATOL,2005821621682CULOUSCOUJM,REMACLEBONNETMM,POMMIERG,ETALIMMUNOSUPPRESSIVEPROPERTIESOFHUMANPLACENTASTUDYOFSUPERNATANTSFROMSHORTTERMSYNCUTIOTROPHOBLASTCULTURESJREPRODIMMUNOL,1986933473SILVERRK,TURBOVJM,BEAIRDJA，ETALSOLUBLEFACTORPRODUCEDBYISOLATEDFIRSTTRIMESTERCHORIONICVILLIDIRECTLYINHIBITPROLIFERATIONOFTCELLSAMJOBSTETGYNECOL,1990163191419194SANYALMK,BRANICJ,BISCHOFP,ETALIMMUNOREGULATORYACTIVITYINSUPERNATANTSFROMCULTURESOFNORMALHUMANTROPHOBLASTCELLSOFTHEFIRSTTRIMESTERAMJOBSTETGYNECOL,1989,1614464535刘月新，王勋楚，段茂芳等一种新的免疫调节剂中国免疫学杂志,1985151536梁积恒，张丽生，张力图等胎盘免疫调节因子治疗恶性肿瘤313例的临床研究广西医学,199921137黄宁玲，齐准，马宁等胎盘肽为主治疗儿童支气管哮喘12例医学理论与实践,199581191208焦文举，张甫，戴巍等胎盘肽治疗乙型慢性活动型肝炎疗效观察哈尔滨医药,19961615179元晓茗，黄春林，赵月菊等胎盘肽治疗变应性鼻炎临床观察中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志，20031111812010任建梅，吴骏，王玉珍胎盘因子的研制包头医学，199721192011黄楚华，殷学伦超滤法制备胎盘肽的初步研究中国生化药物杂志,19911513313412张晓楠，曹云新，程司坤等用于测定小分子多肽的两种电泳方法的比较生物工程进展,200117747613石继红，赵永同，王俊楼等SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小分子多肽第四军医大学学报,20002176176314马布仁，李素华，谢轶勋等胎盘免疫活性的实验研究解放学医学杂志,19881333533715李恩善，董邦金，杨琨等胎盘免疫调节因子理化性质及生物学活性的实验研究上海免疫学杂志,19931320520616VOGELSANGGB,HESSADGRAFTVERSUSHOSTDISEASENEWDIRECTIONSFORAPERSISTENTPROBLEMBLOOD，1994842061206717RUTELLAS,RUMIC,LUCIAM