微生物快速检测采样箱使用说明

微生物快速检测采样箱使用说明一、实验前的准备工作以及操作中的注意事项1.样品稀释均质罐（225ml 聚四氟乙烯塑料罐） 、玻璃器皿等的消毒：清洗洁净后，加入经过煮沸的生理盐水225 ml(至有刻度处)，盖上盖子后放入高压锅或红外线消毒柜（在特殊情况下，可以使用民用红外线消毒柜）中消毒。2.生理盐水的配置与灭菌：取9g 分析纯 NaCl 溶解到1000mL 蒸馏水或纯净水中，取9ml 加入到10mL 洁净试管中，盖上硅橡胶塞或棉纱塞，放入红外线消毒柜中消毒。3.移液器管头的消毒：将管头放入锡箔袋或用锡箔纸包好，放入民用红外线消毒柜中消毒。4.消毒效果观察：按照菌落总数的快速测定方法做空白样品实验，观察器皿消毒效果是否良好。5.操作前的消毒与操作中的无菌概念：5.1在适宜的环境中，点燃酒精灯，营造局部无菌环境的。5.2用75%酒精棉球将手和样品开口处周围抹擦消毒。5.3操作工具如镊子、剪子、长柄勺、小刀等，在酒精灯上用火焰消毒后使用。5.4取样和加样时尽量靠近酒精灯操作。5.5根据不同的检测项目，采用消毒过的器皿，按检测方法说明要求进行取样、稀释、纸片加样和培养，并定时观察结果。6.对于超标或阳性结果的样品，有条件时，应采用国家标准检验方法进行确认。BX-2型 便携式培养箱二、采样（一）采样原则1.代表性原则：采集的样品能真正反映被采样本的总体水平，也就是通过对具体代表性样本的监测能客观推测食品的质量。2. 典型性原则：采集能充分说明达到监测目的典型样本，包括污染或怀疑污染的食品、掺假或怀疑掺假的食品、中毒或怀疑中毒的食品等。3. 适时性原则：因为不少被检物质总是随时间发生变化的，为了保证得到正确结论应尽快检测。4 .适量性原则：样品采集数量应满足检验要求，同时不应造成浪费。5.不污染原则：所采集样品应尽可能保持食品原有的品质及包装型态。所采集的样品不得掺入防腐剂、不得被其他物质或致病因素所污染。6. 无菌原则：对于需要进行微生物项目检测的样品，采样必须符合无菌操作的要求，一件采样器具只能盛装一个样品，防止交叉污染。并注意样品的冷藏运输与保存。7. 程序原则：采样、送检、留样和出具报告均按规定的程序进行，各阶段均应有完整的手续，交接清楚。8.同一原则：采集样品时，检测及留样、复检应为同一份样品，即同一单位、同一品牌、同一规格、同一生产日期、同一批号。（二）采样数量1.根据检测项目来确定采样量，既要满足检测项目要求，又要满足产品确认及复检的需要量。2. 微生物检测用样品采样数量：检样种类 采样数量 备注生肉：250g、光禽一只；熟肉制品如熟禽、肴肉、烧烤肉、肉灌肠、酱卤肉、熏煮火腿250g；肉及肉制品其他熟肉干制品250g。乳及乳制品鲜乳、干酪、消毒灭菌乳、乳粉、稀奶油、奶油、酸奶、全脂炼乳、乳精粉250g(mL)蛋品 每件采样250g。一日或一班生产为一批，每批不少于三个检样。测定菌落总数和大肠菌群：每批按装听过程前、中、后流动取样三次，每次100g，每批合为一个样品。水产食品鱼、虾、鱼丸、虾丸、鱿鱼、即食藻类食品250g。罐头按生产批次抽样，每批每个品种不得少于三罐。冷冻饮品冰棍、雪糕，每批不得少于三件，每件不得少于三支；原装四杯为一件，散装250g；冰淇淋食用冰块：每件样品取250g；饮料桶（瓶）装饮用水，饮用纯净水：原装一瓶（不少于250mL） ；茶饮料，碳酸饮料，含乳饮料，乳酸菌固体饮料，果树汁饮料：原装一瓶（不少于250mL） 。固体饮料：原装一瓶和（或）袋（不少于250g） 。茶叶罐装取一瓶（不少于250g）,散装取250g。调味品 原装一瓶（不少于250mL） 。 糕点、蜜饯、糖果 250g/mL。 酒类鲜啤酒、果啤、黄酒等瓶装两瓶为一件。非发酵豆制品及面筋、发酵豆制品非发酵豆制品及面筋:定性包装取一袋（不少于250g） ；发酵豆制品: 原装一瓶（不少于250g） 。粮谷及果蔬类食品定型包装取一袋（不少于250g）, 散装取250g。包括膨化食品、油炸小食品、淀粉类食品等:方便面定型包装取一袋和(或)碗（不少于250g） 。速冻预包装米面食品定型包装取一袋（不少于250g） ；散装取250g。酱腌菜 定型包装取一袋（不少于250g） 。 果冻、麦片 不少于250g 3.急性食物中毒样品采样数量：样品种类采样数量粪便 5g10g呕吐物 50g(mL)100g(mL)血液 3mL尿液 30mL50mL固体食品200g500g，最少不得少于50g液体食品200mL500 mL，最少不得少于50mL （三）采样用具采样用具本着适用、够用为准的原则。可参考备置以下物品：勺子、镊子、剪子、刀子、铲子、开罐器、尖嘴钳、吸管、吸球、量筒（杯） ，微生物检测采样需要备置消毒棉签、无菌棉拭子、采便管、运送培养基、一次性注射器、无菌采样容器、无菌采样袋、乳胶手套、规格板、酒精灯及酒精、75%酒精棉球、灭菌生理盐水、消毒纱布、 记号笔、不干胶标签、皮筋、火柴手电筒及样品冷藏运输设备（四）采样方法1. 随机性采样：均衡地，不加选择地从全部批次的各部分，按规定数量采样。采用随机性采样方式时，必须克服主观倾向性。2. 针对性采样：根据已掌握的情况有针对性地选择。如怀疑某种食物可能是食物中毒的原因食品，或者感官上已初步判定出该食品存在卫生质量问题，而进行有针对性的选择采集样品。3. 理化样品采样方法：见理化检测采样箱说明。4. 微生物样品采样方法4.1 微生物样品种类可分为大样、中样、小样三种。大样系指一整批，中样是从样品各部分取得的混合样品，小样系指检测用的检样。4.2 微生物采样必须遵循无菌操作原则。预先准备好的消毒采样工具和容器必须在采样时方可打开，采样时最好两人操作，一人负责取样，另一人协助打开采样瓶、包装和封口；尽量从未开封的包装内取样。4.3 采样前，操作人员先用 75%酒精棉球消毒手，再用 75%酒精棉球将采样开口处周围抹擦消毒，然后将容器打开。4.4 袋装、瓶装、罐装食品等包装食品，应采完整的未开封的样品。散装固体、半固体、粉末状样本，可用灭菌小勺或小匙进行采样；如果样品很大，则需用无菌采样器取样；固体粉末样品，应边取边混合；冷冻食品应保持冷冻状态采样。4.5 瓶装液体样本采样前，应先用灭菌玻璃棒搅拌均匀，有活塞的用 75%酒精棉球将采样开口处周围抹擦消毒，然后打开塞，先将内容物倒出一些后，再用灭菌样本容器接取样本，在酒精灯火焰上端高温区封口。散装液体样品通过振摇混匀用灭菌玻璃吸管采样，样本取出后，将其装入灭菌样本容器，在酒精灯上用火焰消毒后加盖密封。4.6 对生产工具、设备、食具表面的采样可采取刮涂法；涂抹法；滤纸贴附法；洗脱法。餐（饮）具消毒卫生状况采样检测可按 GB 14934-1994 卫生标准执行。5.急性食物中毒样品采样方法：5.1 样品采集的种类和项目应根据病人的症状，结合流行病学调查确定，力求及时、具有代表性和针对性。5.2 采样种类：一般包括病人的呕吐物、洗胃液、血液、尿液、肛拭子（大便） 、可疑餐次的剩余食品、食品容器和加工用具表面涂抹物等，可能条件下还应采集厨师和直接接触食品人员的手拭、肛拭等。5.3 采样人数：一般规模较大的疑似中毒事件（中毒人员大于 100 人）至少采集 1020 名具有典型临床症状的病人生物性样品，小规模的疑似中毒（中毒人员小于 30 人）可采集病人生物性样品 35 份。5.4 样品采集方法：5.4.1 可疑食物：对可疑餐次的剩余食物、可疑原料及半成品，进行有针对性的选择性采样。5.4.2 可疑食物制售环节：对制售用具、工具、容器等可能直接污染可疑食物的物品，采用棉拭涂抹法采样。5.4.3 患者呕吐物、粪便、洗胃液：最好在服用抗菌素之前采集新鲜的呕吐物（50g200g） ，粪便（50g100g)必要时可采集洗胃液（50200mL）或涂抹被吐泻物污染的物品于运送培养基中。5.4.4 患者血、尿样：对疑似细菌性食物中毒的，应采集患者急性期（3 天内）和恢复期（两周左右）的肘静脉血 23mL，同时采健康人的血样作对照。对疑似化学性食物中毒的，要注意收集患者尿样。5.4.5 食品加工人员带菌检查：对患有呼吸道感染和皮肤病的从业人员，对其手、咽、鼻病灶皮肤进行涂抹采样。怀疑肠道传染病的可采取肛拭取样。（五）采样记录1.现场采样记录 ：采样记录应采用固定格式采样文本，内容应包括：采样目的、被采样单位名称、采样地点、样本名称、编号、被采样产品产地、商标、数量、生产日期、批号或编号、样本状态、被采样产品数量、包装类型及规格、感官所见(有包装的食品包装有无破损、变形、受污染、无包装的食品外观有无发霉变质、生虫、污染等、采样方式、采样现场环境条件(包括温度、湿度及一般卫生状况)、采样日期、 采样单位(盖章)或采样人(签字)、 被采样单位负责人签字。采样记录一式两份，一份交被采样单位，一份由采样单位保存。2.样本签封和编号：采样完毕整理好现场后，将采好的样本分别盛装在容器或牢固的包装内，在容器盖接处或包装上进行签封，明确标记品名、来源、数量、采样地点、采样人、采样日期等内容。如样本品种较少，应在每件样本上进行编号，注意编号应与采样记录上的样本名称或编号相符。（六）样品运输及保存1.采样结束后应尽快将样品检验或送往留样室，需要复检的应送往实验室。2.疑似急性细菌性食物中毒样品应无菌采样后立即送检，一般不超过四小时；气温高时应将备检样品置冷藏设备内冷藏运送，不得加入防腐剂。3.需要冷藏的食品，应采用冷藏设备在 05冷藏运输和保存，不具备冷藏条件时，食品可放在常温冷暗处，样品保存一般不超过 36h。 （微生物项目常温不得超过 4h）4.采集的冷冻和易腐食品，应置冰箱或在包装容器内加适量的冷却剂或冷冻剂保存和运送，为保证途中样品不升温或不融化，必要时可于途中补加冷却剂或冷冻剂。5.食品标签标明存放、运输条件的食品，采集的样品存放、运输条件要与之相符，如酸奶标识说明要冷藏，样品的运送及复检样品的保存都要做到冷藏。6.需做微生物检测的样品，保存和运送的原则是应保证样品中微生物状态不发生变化。微生物检测用的样本及不能冷藏保存的样本原则上不复检、不留样。采用快速检测方法检测出的超标样品，应随即采用国标方法进行确认。检测不合格的样品，要及时通知被采样单位和生产企业。处理样品时，禁止将有毒有害液体样本直接倒入下水道。7.采集的样品注意应在保质期内，尽量抽取保质期于 3 个月以上的产品（保质期限不足 3个月的除外） 。留样和需要确证的样品，按产品说明书要求存放，期限为检测结果出示后三个月。对餐饮业要求凉菜 48h 留样。8.样本保存要保持样本原有状态，样本应尽量从原包装中采集，不要从已开启的包装内采集。从散装或大包装内采集的样本如果是干燥的，应保存在干燥清洁的容器内，不要同有异味的样本一同保存。9.根据检验样本的性状及检验的目的不同而选择不同的容器保存样本，一个容器装量不可过多，尤其液态样本不可超过容量的 80%，以防冻结时容器破裂。装入样本后必须加盖，然后用胶布或封箱胶带固封，如是液态样本，在胶布或封箱胶带外还须用融化的石蜡加封，以防液体外泄。如果选用塑料袋，则应用两层袋，分别封口，防止液体流出。10.特殊样本要在现场进行处理，如作霉菌检验的样本，要保持湿润，可放在 1%甲醛溶液中保存，也可储存在 5%乙醇溶液或稀乙酸溶液里。（七）现场采样质量控制1.所有采样用具、容器及现场测定项目的各种设备，必须保持清洁，处于正常工作状态。应防止采集的样本污染和变质。需复检、留样的样本不得作现场测定 ，样品容器必须专瓶专用。分析有机化合物的样本，应使用有机溶剂荡洗过的尼龙塞或铝箔衬里。注意手和手套不得与样品瓶内壁或瓶塞接触，样本容器和过滤设备等须置于清洁环境内，远离灰尘、烟雾。样本根据推荐的方法加保存剂，按需要避光保存，或存放在暗处或冰箱保存。2.质量控制是现场质量保证的基本组成部分。除采用标准化的现场采样步骤外，还须在现场做空白样和平行样，以测试保存剂的纯度；检查采样过程中采样容器或其它设备的污染情况；采集平行样，检查采样的再现性。3.在查明某一工序的卫生状况时，可在这一工序处理前和处理后各取一份样本作对照。如对手工包装工序，可采包装前和包装后的样本，还可直接用灭菌棉拭子抹擦操作工人的手指，进行细菌培养，证明污染程度。（八）附录附录 1.常用采样方法：1、三层五点法：按堆形和面积大小采用分区设点，或按食品堆高度采用分层采样、分区设点，每区面积不超过 50m2，各设中心四角共五点；区数在两个以上的两区界线上的两个点为共有点。将样品分为上、中、下三层，在各层的四角和中间各取等量样本混合后，再取检验所需样本。2、刮涂法：在酒精灯火焰下燃烧灭菌的小刀（放凉）,把表面干燥的污物刮下装入干燥的灭菌容器中送检。3、涂抹法：用灭菌棉拭子，沾湿灭菌生理盐水抹擦表面一定面积后， 放入灭菌生理盐水管 。4、滤纸贴附法：用灭菌生理盐水沾湿经预先消毒的大肠菌群纸片，然后贴附于采样的表面，2 个纸片为 1 件。经 1min 后用灭菌镊子取出纸片置于无菌塑料袋内。5、筷子洗脱法：以 5 只为一件样品，用毛细吸管吸取无菌生理盐水湿润纸片后，立即将筷子进口端（约 5cm）抹拭纸片，每件样品抹拭两张，洗脱入装有 50mL 灭菌生理盐水试管中。附录 2. 食品采样容器和器具：采样容器根据检验项目，选用硼硅玻璃瓶或聚乙（丙）烯塑料瓶，必须能够用塞或盖紧紧密封。玻璃瓶要容易洗涤；聚乙烯瓶塑料瓶不易破碎和冻坏，便于运送；所有盛样容器必须有和样品一致的标记。盛样品的容器应消毒处理，但不得用消毒剂处理容器。微生物样本容器要求耐高压1.选择容器原则 ：1.1 容器不能是新的污染源；1.2 容器壁不应吸收或吸附某些待测组分；1.3 容器不应与待测组分发生反应。2 容器的清洗: 新的采样瓶，应经硝酸浸泡；测有机氯农药的玻璃瓶，则应经铬酸清洁液浸泡，以破坏原来沾污的有机氯。在用酸浸泡之前，先用常水刷洗，尽可能预先除去原来沾污的物质。用铬酸