卵巢上皮性肿瘤中NF.doc

卵巢上皮性肿瘤中NF【关键词】 卵巢肿瘤;Expression and correlation of nuclear factorkappa B and survivin in epithelial ovarian tumorWANG ShuHua, XIN XiaoYan, CHEN YaQiong, WANG DeTang, GUO HuiLingDepartment of Obstetrics & Gynecology, Xijing Hospital, Fourth Military Medical University, Xian 710033, China【Abstract】 AIM: To investigate the expression of nuclear factorkappa B (NFB) and survivin in epithelial ovarian tumor and to study their correlation. METHODS: The expression of NFB p65 and survivin in 104 specimens of epithelial ovarian tumor was examined by SABC immunohistochemical staining. RESULTS: The positivity rates of NFB p65 of epithelial ovarian malignant tumors, borderline tumors, benign tumors and normal ovarian tissues were 71%, 44%, 40% and 0% respectively. The NFB p65 protein expression in malignant tumors was significantly higher than that in benign tumors and normal tissues (P0.01). The expression of NFB p65 was positively correlated with the histological grade and clinical stage (P0.05). High expression of NFB p65 was related to the lymph node metastasis of ovarian cancer (P0.05). The positivity rates of survivin in epithelial ovarian malignant tumors and borderline tumors were 65% and 61%, respectively, significantly higher than those in the benign tumors and normal tissues (P0.05). High expression of survivin was related to the clinical stage and lymph node metastasis of ovarian cancer (P0.05). Positive NFB expression was strongly correlated with survivin expression (P0.05). CONCLUSION: NFB and survivin may be useful markers for carcinogenesis and progression of malignant ovarian tumors, with close relation each other.【Keywords】 ovarian epithelial neoplasm; nuclear factorkappa B; Survivin; immunohistochemistry【摘要】 目的: 探讨卵巢上皮性肿瘤中核因子B（NFB）与Survivin的表达及相关性. 方法: 采用免疫组织化学SABC法检测104例卵巢上皮肿瘤中NFB p65和Survivin的表达情况. 结果: 在卵巢上皮性恶性肿瘤、交界性肿瘤、良性肿瘤和正常卵巢组织中,NFB p65的阳性表达率分别为71%, 44%，40%和0%. 恶性肿瘤中NFB p65的表达明显高于良性肿瘤(P0.05). NFB p65的表达与病理分级和临床分期有关(P0.05).恶性卵巢肿瘤中NFB p65的高表达与淋巴结转移相关(P0.05). Survivin在上皮性卵巢恶性肿瘤及交界性肿瘤中的表达率分别为65%和61%，显著高于良性肿瘤和正常卵巢组织的表达率(P均0.05),Survivin表达与临床分期和淋巴结转移密切相关(P0.05). NFB表达与Survivin表达密切相关(P0.05). 结论: NFB与Survivin是卵巢上皮性恶性肿瘤发生与转移的有效指标, 两者密切相关.【关键词】 卵巢肿瘤; NFB；Survivin; 免疫组织化学0引言核因子B（nuclear factor kappa binding，NFB）是一种广泛存在于真核细胞内的转录因子，其通过与多种细胞增殖、凋亡等相关基因启动子部位的B序列结合，调控靶基因转录，从而在恶性肿瘤的发生发展中发挥重要作用1. Survivin是近年发现的凋亡抑制蛋白IAP家族的新成员，是迄今为止发现的作用最强的凋亡抑制基因. 我们应用免疫组织化学方法检测了NFB与Survivin在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达，以探讨两者在卵巢上皮性肿瘤发生发展中的作用及相互关系.1材料和方法1.1材料200210/200406西京医院病理科保存的卵巢上皮良性、交界性和恶性肿瘤的蜡块标本104例. 所有标本均经40 g/L多聚甲醛固定, 石蜡包埋, 4 m连续切片.其中，上皮性良性肿瘤35(浆液性囊腺瘤22, 黏液性囊腺瘤13)例, 年龄2068(38.64.5）岁；上皮性交界性肿瘤18(交界性浆液性囊腺瘤13, 交界性黏液性囊腺瘤5)例, 年龄2960(43.77.4)岁；上皮性恶性肿瘤51（浆液性囊腺癌41,黏液性囊腺癌6,子宫内膜样癌4）例, 年龄2769(54.210.3)岁, 术前均未经化疗或放疗. 选择同期因子宫肌瘤而切除的10例正常卵巢组织作为对照. 按国际妇产科联盟(FIGO)标准分期. ,期18例; ,期33例. 病理级12例;级18例;级21例. 有淋巴结转移22例. 兔抗人NFB p65 mAb, 兔抗人Survivin多克隆抗体为（美国Santa Cruz Biotechnology Inc ）,SABC试剂盒和DAB显色试剂盒（武汉博士德生物有限公司）.1.2方法采用免疫组化SABC法. NFB抗体工作浓度为1100,Survivin抗体工作浓度为150，以试剂盒中所附已知的阳性染色切片作为阳性对照,以PBS代替一抗作为阴性对照. 将阳性细胞按其数量及显色强度分为3级:表达弱阳性,即阳性细胞数60%,多数细胞呈黄至棕黄色染色; 表达中度阳性(), 即阳性细胞数及显色强度介于弱阳性与强阳性之间. 凡显色强度与对照无明显差别者为阴性.统计学处理: 应用SPSS 10.0统计学软件,组间率的比较采用2检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析.2结果2.1卵巢上皮性肿瘤NFB p65及Survivin的表达NFB p65蛋白阳性物质呈棕黄色颗粒,主要位于卵巢上皮性肿瘤细胞的胞质中(Fig 1).卵巢上皮性恶性肿瘤NFB p65蛋白阳性表达率明显高于良性肿瘤(2=7.979，P0.0125),上皮性交界性肿瘤、良性肿瘤中NFB p65蛋白表达无明显差异（2=0.097，P0.05, Tab 1）.在正常卵巢组织中NFB p65蛋白无表达.Survivin蛋白阳性物质呈棕黄色颗粒,表达于肿瘤细胞的胞质中(Fig 2).Survivin图1NFB p65在卵巢浆液性腺癌中的表达略蛋白在卵巢上皮性恶性肿瘤中表达率明显高于其在良性肿瘤组织中的表达（2=16.674，P0.0125)，Survivin在交界性肿瘤中的表达率明显高于良性肿瘤中的表达（2=8.958，P0.0125);Survivin在正常卵巢组织中呈阴性表达.表1卵巢上皮性肿瘤中NFB p65及Survivin的表达略图2Survivin在卵巢浆液性腺癌中的表达略2.2NFB p65及Survivin表达与临床病理特征的关系NFB p65的表达阳性率在不同病理分级间有显著差异（2=7.712, P=0.028, Tab 2）.伴有淋巴结转移的卵巢癌组织中NFB p65的阳性表达率明显高于无转移者(2=4.638, P=0.031). ,期卵巢癌NFB p65的表达阳性率也明显高于,期(2=5.680, P=0.017). Survivin蛋白的表达与临床分期密切相关(2=5.001, P=0.025), 其表达阳性率在不同病理分级间无显著差异（2=2.451, P=0.294）,伴有淋巴结转移的卵巢癌组织中Survivin的表达明显高于无转移者(2=7.946, P=0.005).本资料中除浆液性囊腺癌外,其他类型病例数少, 所以未进行病理类型间的统计学分析.表2NFB p65及Survivin的表达与上皮性卵巢恶性肿瘤临床病理特征的关系略2.3NFB p65及Survivin表达的相关性在36例恶性卵巢上皮性肿瘤NFB阳性表达组中,Survivin阳性率67%;15例NFB阴性病例中,Survivin蛋白阳性表达率为33%,差异有显著性(2=4.796, P0.05). Spearman等级相关分析表明两者有相关性(r=0.307, P0.05).3讨论NFB是首先从B细胞核提取物中发现的一种重要的转录因子2，常以p50/p65异源二聚体的形式存在.在静息状态下，NFB与其抑制因子（IB）结合被锚定于细胞质内.在外来因素诱导下IB降解，继而NFB活化进入细胞核内与特定靶基因结合，参与调控细胞激酶、生长因子、趋化因子、细胞黏附因子及早期反应基因的转录.但同时IB被降解后迅速再合成，并与NFB结合，使NFB从结合的靶基因位点上脱离，重新转位于细胞质，从而实现NFB活化和失活的循环3,4.近年研究发现NFB与肿瘤的发生和发展有密切的关系，并且在肿瘤的抗凋亡机制中起着关键的作用.在多种恶性肿瘤中，包括白血病、甲状腺癌、乳腺癌及肝癌中都可以检测到NFB的异常表达或活化5,6.陈保东等 7 研究表明NFB p65是与星形细胞肿瘤相关的癌蛋白，其通过上调cyclin D1, PCNA的表达，致使肿瘤细胞过度增殖，从而导致肿瘤发生. 在对前列腺癌的研究中发现NFB的活化对细胞抵抗凋亡是必需的，抑制其活化可以明显减少裸鼠肿瘤的发生率及降低肿瘤浸润、转移8. 我们发现在上皮性卵巢恶性肿瘤中NFB p65的表达明显高于良性肿瘤，在正常卵巢组织中未见其表达，提示NFB p65参与了上皮性卵巢恶性肿瘤的发生过程.研究中还发现卵巢癌组织中NFB p65表达情况与淋巴结转移呈正相关, 提示其促进卵巢癌细胞发生转移.有研究表明NFB的过度活化可以使细胞间黏附分子(ICAM1)转录增加,使癌细胞能在淋巴结或其他脏器中黏附、生长、增殖. 另一方面ICAM1的过度活化可以竞争性抑制主要组织相溶性复合物1（MHC1）类抗原对游离癌细胞的免疫识别作用，从而使癌细胞逃避免疫监视，更容易发生侵袭和转移9. 在不同的细胞分化等级和临床分期间，上皮性卵巢癌组织中NFB p65的表达有明显差异.这与国内外文献报道结果相似.因此，对于NFB的检测可能有助于判断卵巢癌的恶性程度.Survivin是近年来分离的哺乳动物凋亡抑制蛋白,它以细胞周期依赖的方式表达在G2/M期，其组织分布特征具有选择性，主要分布于胚胎及未分化成熟的组织，在多数肿瘤组织中呈高表达.近年研究认为,Survivin主要通过两种途径抑制凋亡:通过与纺锤体的微管蛋白特异性的结合,直接抑制了半胱氨酸蛋白酶Caspase3和Caspase7的活性;通过促进CDK4释放p21,p21与线粒体Caspase3结合,抑制其活性,阻止细胞凋亡.我们发现,Survivin在卵巢上皮性恶性肿瘤中表达上调,提示其可能通过抑制细胞的凋亡,在卵巢上皮性恶性肿瘤的发生中起一定的作用.并且表达水平与临床分期和淋巴结转移相关,提示其可作为判断病情的指标.已有Lscasse等 10发现, NFB可能通过转录抗凋亡抑制基因,如Survivin,bcl2等来发挥抑制肝癌细胞凋亡的作用. 我们的研究发现两者具有显著相关性，但这种相关性与二者的协调性还有待于进一步研究.【参考文献】1 Karin M, Cao Y, Greten FR, et al. 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NFB expression in the astrocytic tumors and its relation to tumor proliferationJ . J Fourth Mil Med Univ，2003; 23（7）：651-6