（食品科学专业论文）益生芽孢杆菌的诱变选育及酶学特性.pdf

摘要 本文对益生菌株的筛选与鉴定、诱变选育、酶学特性及益生效果进行了研 究，得出主要结果如下： ( 1 ) 依据酶活和胃肠耐受性，分别从土壤和健康鸡肠道中分离纯化得到纤 维素酶产生菌bl 和蛋白酶产生菌j c l 2 。其中b1 菌株的c m c 酶活和f p a 酶 活分别达到0 2 5 6u m l 和0 2 2 8u m l ，且可以耐受p h l 5 和0 3 的胆盐浓度。 结合b 1 菌株的生理生化特征和1 6 sr d n a 序列分析，鉴定其为蜡样芽孢杆菌 ( b a c i l l u sc e r e u s ) 。菌株j c l 2 的蛋白酶活为5 1 9u m l ，具有良好的胃肠耐受性。 根据生理生化特征，鉴定j c l 2 菌株也为蜡样芽孢杆菌。 ( 2 ) 利用微波一硫酸二乙酯复合诱变bl 、j c l 2 菌株，获得突变株b 1 1 和 j c l 2 8 。b 1 1 菌株的c m c 酶活达到0 。3 7 3u m l ，f p a 酶活达到0 3 4 8u m l ， 分别较出发菌株提高了4 5 7 0 和5 2 6 3 。突变株j c l 2 8 的蛋白酶活达到1 2 0 7 u m l ，较出发菌株提高了l 。3 3 倍。两突变株均具有遗传稳定性，胃肠耐受性 均较强。 ( 3 ) b 1 1 菌株最佳产酶条件为2 0g l 麦芽糖，2 5g l 硫酸铵，p h5 0 ，3 7 下培养3 6h 。j c l 2 8 菌株产蛋白酶的最适发酵条件是：以6 麦芽糖作碳源，3 豆饼粉作氮源，发酵温度3 7 ，起始p h7 0 。该蛋白酶的最适作用温度为6 5 ， 最适p h 为值7 0 ，具有良好的热稳定性和p h 稳定性。1m m o l lf e ”可显著提 高j c l 2 8 菌株的蛋白酶活。体外平板抑菌试验表明突变株b 1 1 和j c l 2 8 对金 黄色葡萄球菌和致病性大肠杆菌的抑菌效果明显。 ( 4 ) b 1 1 和j c l 2 8 菌株经小鼠毒性试验初步证实为安全菌株，对小鼠有不 同的促生长作用，且混合菌株能够显著提高小鼠的生长性能。小鼠饲喂b 1 1 和j c l 2 8 菌株14d 后，测定小鼠肠道内酶活力大小，结果表明，b 1 1 菌株具 有蛋白酶活性，j c l 2 8 菌株具有纤维素酶活性，并且b1 1 和j c l 2 8 菌株混合饲 喂的效果更好。与对照组相比，c m c 酶活、f p a 酶活和蛋白酶活分别提高了 4 8 7 0 、3 0 1 5 和3 0 2 3 。小鼠的胸腺和脾脏指数均有所提高，其中混合饲喂 组小鼠的胸腺指数显著高于其他试验组( p 麦麸 淀粉 c m c n a 。因此，生产菌体纤维素饲料，选择稻草粉或麦麸较为经济实 用。 影响菌株j c l 2 8 产酶水平的主要因素是碳源和氮源。麦芽糖对产酶水平有 较大影响，分析原因可能是麦芽糖的代谢起到维系生长和诱导产酶作用。豆饼 粉是菌株j c l 2 8 产酶的最适氮源，其原因是豆饼粉较其他氮源不仅能提高丰富 的氮源，还能供给较多的b 族维生素和微量元素p4 | 。 4 5 第五章益生菌株效果的检测 5 1 引言 益生菌在生产应用前，首先必须对其进行病理和毒理实验，证明无毒、无 致畸、无致病、无药物残留等副作用【53 1 。在动物饲养方面的应用是目前益生菌 应用最广泛的领域。益生菌作为饲料添加剂，提高饲料转化率，使机体更容易 吸收。经检验为安全等益生菌菌株方能添加于动物饲料中。赵静杰等【9 5 】在断奶 仔猪基础日粮中添加复合酶制剂，发现添加复合酶制剂能显著提高平均日增重， 料重比下降明显，毛利收入增加1o 4 2 ，表明在断奶仔猪日粮中添加复合酶制 剂可以一定程度上改善仔猪的生长性能。王福强等 9 6 1 将产蛋白酶益生菌y 2 2 投喂4 月龄的牙鲆幼鱼3 0d ，结果发现y 2 2 组体质量增长明显；盲囊中蛋白 酶活性达到8 1 5 2u + 3 1 0u ( p 0 0 5 ) ，酶活性增加率为1 0 8 ；肠道产蛋白酶菌 数量最高为6 8 7 0 3 7 ( p 0 0 5 ) ，增加5 2 5 倍。张春杨等【9 7 】用产蛋白酶的益生 菌制备成益生菌剂饲喂肉鸡，能明显促进免疫器官的生长发育，提高免疫器官 指数( 提高脾脏、法氏囊、胸腺指数分别达到18 4 7 、6 4 2 、4 1 4 6 ，p 0 0 5 ) ； 也能促进消化道的生长发育，提高消化道重量指数( 消化道体重10 0 ) 最 高达2 7 5 5 ( p 0 1 表示个体间基本无差异，p 0 0 5 表示个体间差异明显。o 0 5 p 0 1 表示个体间基本无差异，p 0 0 5 表示个体间 差异明显。 表5 2 芽孢杆菌对小鼠肠道酶活的影响( m e a n 4 - s d ，n = 1 0 ) t a b l e5 - 2e f f e c to fb a c i l l u se x t e n d e r so nt h ee n z y m ea c t i v i t yo ft h em o u s e 注：表不p 0 0 5 ，表不p 0 0 1 由表5 2 可知，b 1 1 菌株对小鼠肠道内的纤维素酶活表现出一定的促进效 果，j c l 2 8 菌株对蛋白酶活表现出一定的促进效果。且b 1 1 和j c l 2 8 菌株混合 饲喂，纤维素酶活和蛋白酶活提高幅度最大，与对照组相比，小鼠c m c 酶活、 f p a 酶活和蛋白酶活分别提高了4 8 7 0 、3 0 15 和3 0 2 3 。此外，b 1 1 菌株 还具有蛋白酶活性，j c l 2 8 菌株具有纤维素酶活性，且并非单纯的加减作用， 推测原因可能是两种菌存在协同效应，b 1 1 菌株丰富的代谢产物刺激j c l 2 8 菌 株生长，j c l 2 8 菌株生长耗氧创造适宜b 1 1 菌株生长的环境，从而两菌种均大 量生长，酶活较高。 5 4 4 胸腺和脾脏指数 菌株b 1 1 、j c l 2 8 及混合芽孢杆菌对小鼠胸腺和脾脏指数的影响如表5 3 所示。 表5 3 芽孢杆菌对小鼠胸腺和脾脏指数的影响( m e a n = t = s d ，n = 1 0 ) t a b l e5 3e f f e c t so f b a c i l l u se x t e n d e r so nt h y m u sa n ds p l e e ni n d i c e si nm i c e 注：宰表示p 0 0 5 ，表不p 0 0 1 结果显示，与对照组相比，菌株b 1 1 组脾脏指数、胸腺指数几乎没有差异； 菌株j c l 2 8 组脾脏指数、胸腺指数有所提高( p o 0 5 ) ；混合菌株的胸腺指数好 脾脏指数都得到显著提高。 5 5 结论 ( 1 ) 本研究筛选的b 1 。1 和j c l 2 8 菌株经小鼠毒性试验初步证实为安全菌 株。 ( 2 ) 菌株b 1 1 、j c l 2 8 对小鼠有不同的促生长作用，且混合菌株能够显著 提高小鼠的生长性能。 ( 3 ) 小鼠饲喂b 1 1 和j c l 2 8 菌株1 4d 后，测定小鼠肠道内酶活力大小， 结果证实，b 1 1 菌株具有蛋白酶活性，j c l 2 8 菌株具有纤维素酶活性，并且b 1 1 和j c l 2 8 菌株混合饲喂酶活最高，与对照组相比，c m c 酶活、f p a 酶活和蛋 白酶活分别提高了4 8 7 0 、3 0 1 5 和3 0 2 3 。 ( 4 ) 与对照组相比，菌株b 1 1 组、j c l 2 8 组、复合芽孢杆菌组小鼠的胸腺 和脾脏指数均有所升高，其中复合芽孢杆菌组小鼠的胸腺指数显著高于其他试 验组( p o 0 1 ) 。 5 6 讨论 确定每株益生菌菌株的安全性是很重要的【”】。为了加强任何潜在的毒性影 响，我们使用断奶小鼠用于研究。依据对内脏的肉眼病理学检查在试验条件下 脾脏和胸腺的重量比率，结果表明，无论是菌株本身还是其代谢物，对试验动 物的健康状态都没有明显的副作用。这说明我们选育的菌株b 1 1 和j c l 2 8 及复 合益生菌制剂能够推广到动物饲料中。 对于益生菌制剂促生长的机理，一般认为与益生菌能够分泌各种消化酶， 防止有害物质积累，保持肠道微生态平衡都有一定关系f l o 引。本研究结果论证 每天给每只试验动物饲喂10 8c f u 益生菌细胞，可显著提高小鼠的体重。组间 饲料和水的摄取并没有什么不同，但是日增重增加，说明消化能力得到提高。 因此可以说明生长性能与益生菌的效应有关。 在小鼠基础饲料中添加复合益生菌制剂能够促生长性能，提高饲料利用率 和肠道内酶活力 1 0 l 】。本研究结果证实这一结果。数据显示，复合益生茵制剂 组蛋白酶和纤维素酶的活性明显高于对照组。这个结果表明复合益生菌制剂能 4 9 够显著提高小鼠的消化能力。同时，添加益生菌组的小鼠脾脏指数、胸腺指数 有所提高，复合益生菌组效果显著。 从研究结果来看，蜡样芽孢杆菌b 1 1 、蜡样芽孢杆菌j c l 2 8 对动物是安全 的，不是致病菌，且对小鼠的生长性能具有有利作用。 第六章结论与展望 6 1 结论 本文通过对产酶益生芽孢杆菌的选育及其对小鼠生长性能、肠道酶活和免 疫指数的影响，得出以下结论： ( 1 ) 菌株的筛选 分别从土壤和健康鸡肠道中分离纯化得到3 2 株产纤维素酶的菌株和2 8 株蛋 白酶产生菌。结合酶活和胃肠耐受性试验结果，筛选出纤维素酶活较高且可以 耐受p h l 5 和0 3 的胆盐浓度的菌株b 1 和蛋白酶活较高且胃肠耐受性较好的菌 株j c l 2 。结合b 1 菌株的生理生化特征和1 6 sr d n a 序列分析，鉴定其为蜡样芽孢 杆菌( b a c i l l u sc e r e u s ) 。根据生理生化特征，鉴定菌株j c l 2 也为蜡样芽孢杆菌。 ( 2 ) 菌株的诱变选育 利用微波硫酸二乙酯复合诱变b 1 菌株，获得纤维素酶活较高的突变株 b 1 1 ，其c m c 酶活达到0 3 7 3u m l ，f p a 酶活达到0 3 4 8u m l ，分别较出发 菌株提高了4 5 7 0 和5 2 6 3 ，且具有遗传稳定性。利用微波一硫酸二乙酯复合 诱变j c l 2 菌株，获得蛋白酶活最高的突变株j c l 2 8 ，其酶活达到1 2 0 7u m l ， 较出发菌株提高了1 3 3 倍，且具有遗传稳定性。此外，复合诱变不仅能提高菌 株的酶活，还能刺激菌株的生长。胃肠耐受性试验结果表明突变株b 1 1 和j c l 2 8 对低p h 和高胆盐的耐受性均较强。 ( 3 ) 菌株的酶学特性 b 1 1 菌株最佳产酶条件为2 0g l 麦芽糖，2 5g l 硫酸铵，p h5 0 ，3 7 下培养3 6h 。菌株j c l 2 8 产蛋白酶的最适发酵条件是：以6 麦芽糖作碳源，3 豆饼粉作氮源，发酵温度3 7 ，起始p h7 0 。该蛋白酶的最适作用温度为 6 5 ，最适p h 为值7 o ，具有良好的热稳定性和p h 稳定性。1m m o l lf e 2 + 可 显著提高j c l 2 8 菌株的蛋白酶活。体外平板抑菌试验表明突变株b 1 1 和j c l 2 8 对金黄色葡萄球菌和致病性大肠杆菌的抑菌效果明显。 ( 4 ) 益生菌株效果的检测 本文筛选的b 1 1 和j c l 2 8 菌株经小鼠毒性试验初步证实为安全菌株，对 小鼠有不同的促生长作用，且混合菌株能够显著提高小鼠的生长性能。小鼠饲 喂b 1 1 和j c l 2 8 菌株1 4d 后，测定小鼠肠道内酶活力大小，结果证实，b 1 1 菌株具有蛋白酶活性，j c l 2 8 菌株具有纤维素酶活性，并且b 1 1 和j c l 2 8 菌株 混合饲喂饲喂的效果更好。与对照组相比，c m c 酶活、f p a 酶活和蛋白酶活分 别提高了4 8 7 0 、3 0 1 5 和3 0 2 3 。且小鼠的胸腺和脾脏指数均有所升高， 其中混合饲喂组小鼠的胸腺指数显著高于其他试验组( p 0 0 1 ) 。 6 2 创新点 ( 1 ) 建立了“以纤维素酶活和蛋白酶活的高低及耐胃肠道环境为依据，筛 选产纤维素酶和产蛋白酶的益生芽孢杆菌 的新的模式筛选，动物试验结果证 实这种筛选模式是可行的。 ( 2 ) 国内首次对产酶益生芽孢杆菌进行研究，并且利用微波硫酸二乙酯复 合诱变来选育具有高酶活的突变株。 6 3 展望 通过对产酶益生芽孢杆菌特性研究，虽然得出了一些有意义的结论，为动 物产酶益生茵制剂的开发和应用提供参考依据，但要应用于家畜家禽饲料中还 有很多工作需要进行，比如： ( 1 ) 菌株在肠道的粘附、定植研究。只有先粘附、定植接下来才能发挥益 生功能，且体内环境要比体外复杂的多。要迸一步模拟动物肠道环境及运动形 式，研究益生菌株对不良环境的耐受力。 ( 2 ) 对菌株b 1 1 和j c l 2 8 的产酶能力有待于进一步提高，可以运用遗传工 程、基因工程等手段将原有菌株中的基因转移到益生芽孢杆菌中，使其高效表 达。 ( 3 ) 菌株b 1 1 和j c l 2 8 对家畜和家禽的益生效果有待进一步检验。拟将产纤 维素酶的b1 1 菌株添加到反刍动物饲料中，将产蛋白酶的j c l 2 8 菌株添加到家 禽饲料中以检验其效果。 5 2 参考文献 1 】f u l l e rr ar e v i e wp r o b i o t i c si nm a na n da n i m a l s j ja p p lb a c t e r i o l ，19 8 9 ， 6 6 ：3 6 5 3 7 8 h a v e n a a rr ，s p a n h a a ks p r o b i o t i c sf r o ma ni m m u n o l o g i c a lp o i n to fv i e w j c u r r e n to p i n i o ni nb i o t e c h n o l o g y ，19 9 4 ，5 ( 3 ) ：3 2 0 - 3 2 5 h a m i l t o n m i l l e rjmt t h er o l eo fp r o b i o t i c si nt h et r e a t m e n ta n d p r e v e n t i o n o fh e l i c o b a c t e rp y l o r ii n f e c t i o n j i n t e r n a t i o n a lj o u r n a lo f a n t i m i c r o b i a la g e n t s ，2 0 0 3 ，2 2 ( 4 ) ：36 0 36 6 s t a n t o nc ，r o s spr ，f i t z g e r a l dfg ，d o u w ev a ns i n d e r e n f e r m e n t e d f u n c t i o n a lf o o d sb a s e do np r o b i o t i c sa n dt h e i rb i o g e n i cm e t a b o l i t e s j c u r r e n t o p i n i o ni nb i o t e c h n o l o g y ，2 0 0 5 ，16 ( 2 ) ：19 8 2 0 3 a n a d d na ，m a r t i n e z l a r r a n a g amr ，m a r t i n e zma p r o b i o t i c sf o ra n i m a l n u t r i t i o ni nt h ee u r o p e a nu n i o n r e g u l a t i o na n ds a f e t ya s s e s s m e n t j r e g u l a t o r yt o x i c o l o g ya n dp h a r m a c o l o g y ，2 0 0 6 ，4 5 ( 1 ) ：9 1 9 5 f r e i r ejpb ，d i a srim ，p fa 1 t h ee f f e c to fg e n o t y p ea n dd i e t a r yf i b r el e v e l o nt h ec a e c a lb a c t e r i a le n z y m ea c t i v i t yo fy o u n gp i g l e t s ：d i g e s t i v e c o n s e q u e n c e s j a n i m a lf e e ds c i e n c ea n dt e c h n o l o g y ，2 0 0 3 ，1 0 6 ：l1 9 1 3 0 赵新全，曹俊虎家畜微量元素补饲的研究及进展 j 陕西师范大学学报 ( 自然科学版) ，2 0 0 6 ，3 4 ( 9 ) ：9 0 9 6 b a r b o s atm ，l e v ysb t h ei m p a c to fa n t i b i o t i cu s eo nr e s i s t a n c e d e v e l o p m e n ta n dp e r s i s t e n c e j d r u gr e s i s tu p d a t e s ，2 0 0 0 ，3 ：3 0 3 3 1 1 g l e c k m e nra ，c z a c h o rjs a n t i b i o t i cs i d ee f f e c t s s e mr e s pc r i tc a r e j ， 2 0 0 0 ，2 1 ：5 3 6 0 10 1 c o l l i nel ，t e r e s arz ，m i c h a e laf ，e ta 1 t h ei n c i d e n c eo fa n t i m i c r o b ia l a l l e r g i e si nh o s p i t a l i z e dp a t i e n t s ：i m p l i c a t i o n sr e g a r d i n gp r e s c r i b i n gp a t t e r n s e m e r g i n gb a c t e r i a lr e s i s t a n c e j a r c hi n t e r nm e d ，2 0 0 0 ，1 6 0 ：2 819 - 2 8 2 2 11 】l e v ysb t h ea n t i b i o t i cp a r a d o x ：h o wt h em i s u s eo fa n t i b i o t i c sd e s t r o y s t h e i rc u r a t i v ep o w e r s m 2 n de d n e wy o r k ，p e r s e u s ，2 0 0 2 ，9 8 1 0 3 12 】 j o n e sft u s eo fd i r e c t f e dm i c r o b i a l sn o tn e w ，w a yt h e yw o r ks t i l ln o t c l e a r 【j f e e d s t u f f , 1 9 9 1 ，2 8 ：3 l - 3 4 1 3 】d a v i dhl ，s e i i c h i r ol l i f eo nt h es a l v a g ep a t h ：t h ed e o x y n u c l e o s i d e k i n a s e so fl a c t o b a c i l l u sa c i d o p h i l u sr 一2 6 j 】p r o g r e s si nn u c l e i ca c i d r e s e a r c ha n dm o l e c u l a rb i o l o g y ，19 9 7 ，5 9 ：2 0 5 2 5 5 14 k o u r k o u t a sy ，x o l i a sv ，k a l l i s m ，e ta 1 l a c t o b a c i l l u sc a s e i c e l l i m m o b i l i z a t i o no nf r u i tp i e c e sf o rp r o b i o t i ea d d i t i v e ，f e r m e n t e dm i l ka n d l a c t i ca c i dp r o d u c t i o n j p r o c e s sb i o c h e m i s t r y ，2 0 0 5 ，4 0 ( 1 ) ：411 - 416 5 3 刁 列 卅 习 印 刀 阳 列 r l r l r l r l r l r l r l r l 【1 5 】p e d r o s odm ，i a r i ast ，g a m b a b a l l sa n dk i b b ep r e p a r a t i o n si na 3 0 ：3 4 7 3 5 5 16 17 18 】 19 2 0 2 1 2 2 2 3 2 4 2 5 2 6 2 7 rc ，e fa 1 c r i t i c a lc o n t r o lp o i n t sf o rm e a t h o s p i t o a lk i t c h e n j r e vm i r c o b i o l ，19 9 9 ， 潘康成，王振华，杨金龙奶牛用微生物添加剂的应用研究进展 j 】2 0 0 4 ， 1 8 ：1 8 1 9 刘质彬益生索在蛋鸡生产中的应用效果 j 饲料工业，2 0 0 2 ，2 3 ( 1 4 ) ： 7 9 k u n gl ，k r e c kem ，t u n grs ，h e s s i o nao ，s h e p e r dac ，c o h e nma ， s w a i nhe ，l e e d l ejaz e f f e c t so fal i v ey e a s tc u l t u r ea n de n z y m e so n i n v i t r or u m i n a lf e r m e n t a t i o na n dm i l kp r o d u c t i o no fd a i r yc o w j 歹d a i r ys c i ， 19 9 7 ，7 ：2 0 4 5 2 0 51 l a u r e n tv ，g e e r tr ，p a t r i c ks ，e ta 1 p r o b i o t i c sb a c t e r i aa sb i o l o g i c a lc o n t r o l a g e n t si na q u a c u l t u r e j m i e r o b i o lm o lb i o lr ，2 0 0 0 ，6 4 ：6 5 5 6 7 1 n i c h o l s o nwj ，m u n a k a t an ，h o r m e c kg ，e ta 1 r e s i s t a n c eo fb a c i l l u s e n d o s p o r e s t oe x t r e m et e r r e s t i a la n de x t r a t e r r e s t r i a l e n v i r o n m e n t s j m i c r o b i o lm o lb i o lr ，2 0 0 0 ，6 4 ：5 4 8 - 5 7 2 k o t i r a n t aa ，l o u n a t m a ak ，h a a p a s a l om e p i d e m i o l o g ya n dp a t h o g e n e s i so f b a c i l l u sc e r e u si n f e c t i o n s j m i c r o b e sa n di n f e c t i o n ，2 0 0 0 ，2 ( 2 ) ：l8 9 1 9 8 a b r i o u w lh ，m a q u e d am ，g a l v e za ，e ta 1 i n h i b i t i o no fb a c t e r i a lg r o w t h ， e n t e r o t o x i np r o d u c t i o n ，a n ds p o r eo u t g r o w t hi ns t r a i n so fba c i l l u sc e r e u sb y b a c t e r i o c i na s - 4 8 j a p p le n v i r o nm i c r o b i o l ，2 0 0 2 ，6 8 ( 3 ) ：14 7 3 - 14 7 7 z h o uj s ，s h uq a c u t eo r a lt o x i c i t ya n db a c t e r i a lt r a n s l o c a t i o ns t u d i e so n p o t e n t i a l l yp r o t i o t i cs t r a i no fl a c t i ca c i db a c t e r i a j f o o dc h e mt o x i c o l ， 2 0 0 0 ，3 8 ( 2 ) ：1 5 3 - 1 6 1 u r d a c im ，b r e s s o t l i e rc ，p h i i i p p ep b a c i l l u sc l a u s i ip r o b i o t i cs t r a i n s ： a n t i m i c r o b i a la n di m m u n o m o d u l a t o r ya c t i v i t i e s j jc l i ng a s t r o ，2 0 0 4 ，38 ： 8 6 9 0 t a k a h a s h im ，t a g u c h ih ，y a m a g u c h ih ，e ta 1 t h ee f f e c to fp r o b i o t i e t r e a t m e n tw i t hc l o s t r i d i u mb u t y r i c u mo ne n t e r o h e m o r r h a g i ce s c h e r i c h i ac o l i 0 15 7 ：h 7i n f e c t i o ni n m i c e 【j f e m si m m u n o l o g y a n dm e d i c a l m i c r o b i o l o g y ，2 0 0 4 ，41 ( 3 ) ：2l9 - 2 2 6 s i l v afb ，m o n t e i r oacs ，d e ls a r t orp e ta 1 p r o r e g i o no f a c a n t h o s c e l i d e so b t e c t u sc y s t e i n ep r o t e i n a s e ：an o v e lp e p t i d ew i t he n h a n c e d s e l e c t i v i t yt o w a r d e n d o g e n o u se n z y m e s j p e p t i d e s ，2 0 0 7 ，2 8 ( 6 ) ：5 5 4 1 5 5 4 7 v e g a - o r e l l a n aom ，f r a c a l o s s idm ，s u g a ijk d o u r a d o ( s a l m i n u s b r a s i l i e n s i s ) l a r v i c u l t u r e ：w e a n i n ga n do n t o g e n e t i cd e v e l o p m e n to fd i g e s t i v e p r o t e i n a s e s 【j 】- a q u a c u l t u r e ，2 0 0 6 ，2 5 2 ( 3 ) ：4 8 4 4 9 3 2 8 】封晔，来航线，郑真高产纤维素酶菌株的筛选及其产酶条件研究 j 】 西北农林科技大学学报( 自然科学版) ，2 0 0 7 ，3 5 ( 1 0 1 ：1 3 3 1 3 8 2 9 s e l l eph ，r a v i n d r a nv m i c r o b i a lp h y t a s ei np o u l t r yn u t r i t i o n j a n i m a l f e e ds c i e n c ea n dt e c h n o l o g y ，2 0 0 7 ，3 5 ：1 - 4 1 3 0 】杨晓斌，谢拥葵，韦燕鹏，等益生菌纳豆芽孢杆菌的筛选 j 】。广州食 品工业科技，2 0 0 3 ，1 9 ：9 1 3 31 】b e n y a c o u bj ，c z a m e r c k i - m a u l d e ngl ，c a v a d i n ic ，e ta 1 s u p p l e m e n t a t i o no f f o o d w i t he n t e r o c o c c u sf a e c i u m ( s f 6 8 ) s t i m u l a t e si m m u n ef u n c t i o n si n y o u n gd o g s j 】n u t r ，2 0 0 3 ，1 3 3 ( 4 ) ：11 5 8 1 1 6 2 3 2 w a g n e rrd ，w a m e rt ，r o b e r t sl ，e t a 1 c o l o n i z a t i o no fc o n g e n i t a l l y i m m u n o d e f i c i e nm i c ew i t hp r o b i o t i eb a c t e r i a j i n f e c ti m m u n ，19 9 7 ，6 5 ( 8 ) ： 3 3 4 5 3 3 5 1 3 3 h i m a n e njp b i o l o g i c a la c t i v i t i e so fl i p o t e c h i ca c i da n dp e p t i d o g l y c a n - t e i c h o i ca c i do fb a c i l l u ss u b t i l i s16 8 ( m a r b u r g ) j jg e nm i c r o b i o ，1 9 9 3 ， l3 9 ：2 6 5 9 2 6 6 2 3 4 潘康成，何明清，刘克琳，等地衣芽孢杆菌对家兔细胞免疫功能的影 响 j 四川农业大学学报，1 9 9 7 ，1 5 ( 2 ) ：3 6 8 3 7 1 3 5 】靳振江纤维素酶降解纤维素的研究进展 j 】广西农业科学，2 0 0 7 ，3 8 ( 2 ) ： 1 2 7 1 3 0 3 6 s v e n s s o na ，n i c k l a s s o ne ，h a r r a ht ，e ta 1 b a c t e r i