微生物的实验室培养(选修1).ppt

课题1 微生物的实验室培养,微生物的类群,原生生物：,原核生物:,真菌:,病毒:,如酵母菌、霉菌,单细胞的动植物 如草履虫、单细胞藻类等,微生物一般个体微小，包含了除植物界和动物界以外的所有生物,无细胞结构,真核细胞,细菌、蓝藻等,原核细胞,课程标准 进行微生物的分离和培养。 课标解读 1.知道培养基的基础知识，进行无菌技术的操作。 2.进行微生物培养。,1培养基 (1)培养基概念 按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质。,培养基的成分及无菌操作技术,营养物质,生长繁殖,(2)培养基种类 包括 培养基和 培养基等。 (3)培养基的化学成分 一般都含有 、 、 和 四类营养成分。还需要满足微生物生长对 、 及 等的要求。,固体,液体,水,碳源,氮源,无机盐,pH,特殊营养物质,氧气,2无菌技术 (1)无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括以下四个方面 对实验操作的 、操作者的 ，进行清洁和 ； 将用于微生物培养的器皿、 和 等进行 ； 为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行； 实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 相接触。,空间,衣着和手,消毒,接种用具,培养基,灭菌,酒精灯火焰,周围的物品,(2)消毒和灭菌 消毒：消毒是指使用 方法仅杀死物体表面或内部一部分 的微生物， (包括；不包括)芽孢和孢子，常用的方法有 消毒法、 消毒法、 消毒法。 灭菌：灭菌是指使用 杀死物体内外 ， (包括，不包括)芽孢和孢子，常用的方法有 灭菌、 灭菌和 灭菌。,较为温和的物理或化学,对人体有害,不包括,煮沸,巴氏,化学药剂,强烈的理化因素,所有的,微生物,包括,灼烧,高压蒸汽,干热,思维激活1 用酒精擦拭实验者手臂属消毒还是灭菌？70%与95%的酒精，哪一种效果更好？为什么？ 提示 酒精擦拭属化学消毒，酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果最好。原因是：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。,1碳源、氮源及生长因子的来源与功能归纳,特别提示 (1)微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。 (2)对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机物既是碳源，又是氮源、能源。 (3)大凡对生长因子不能合成或合成能力有限的微生物，其培养基中均需额外添加生长因子，而许多微生物能自行合成生长因子，其培养基中不需再添加。,2.培养基类型划分,【巩固1】 下列培养基配方中能作为选择培养基、鉴别培养基的依次是 ( )。,A. B C D 解析 高浓度的食盐可以抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可以将金黄色葡萄球菌分离出来，有高浓度食盐的培养基为选择培养基。在培养基中加入伊红和美蓝，可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌，有伊红和美蓝的培养基为鉴别培养基。 答案 D,3.无菌技术 (1)消毒和灭菌的区别,(2)无菌技术主要操作要求 实验前应对操作空间、操作人员消毒，对所用器具和培养基灭菌。 实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作，另外要避免已灭菌处理材料再次污染。,2请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 (1)培养细菌用的培养基与培养皿。 (2)玻璃试管、烧瓶和吸管。 (3)实验操作者的双手。 解析 消毒和灭菌是无菌技术的两项基本技术，实践中需要根据无菌操作的对象合理地选择使用。原则是既要考虑使用的效果，又要考虑无菌操作对象的承受能力。 答案 (1)、(2)需要灭菌；(3)需要消毒。,【例2】 培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是 ( )。 化学消毒 灼烧灭菌 干热灭菌 紫外线灭菌 高压蒸汽灭菌 巴氏消毒法 A B C D,无菌操作技术,思维导图：,深度剖析 培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。 答案 A,1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤： 称量 倒平板。,培养基的制备与大肠杆菌的纯化技术,计算,溶化,灭菌,(2)倒平板的过程： 在火焰旁右手拿锥形瓶，左手 。 右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过 。 左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，左手立刻 。 待平板冷却凝固后，将平板 放置，使皿盖在下、皿底在上。,拔出棉塞,火焰,盖上皿盖,倒过来,倒平板操作讨论题 1培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答案 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答案 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,3平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答案 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 4在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答案 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。,2纯化大肠杆菌 (1)微生物接种的最常用方法是 和 。 (2)平板划线法：通过 在琼脂固体培养基表面 的操作，将聚集的菌种 。 (3)稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的 ，然后将不同稀释度的菌液分别 ，进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得 。,平板划线法,稀释涂布平板法,接种环,连续,划线,逐步稀释分散到培养基的表面,梯度稀释,涂布到琼脂固体培养基的表面,单个细菌形成的菌落,2微生物分离与纯化技术 (1)原理 微生物的分离与纯化就是将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在固体培养基上，样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个菌落。将单个菌落接种到斜面培养基上，经培养后，即可得到一个微生物的纯种。,(2)方法步骤 微生物的分离包括样品稀释、划线或涂布及培养三个步骤 梯度稀释操作(如图1) 图1 微生物分离操作流程图,划线或涂布 平板划线分离法：在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取大肠杆菌培养液在平板上划线，常用的划线方法有平行划线和连续划线两种。平行划线时，每转一个角度烧一次接种环。划线完毕后，盖上培养皿盖，做好标记。 图2 划线示意图,培养 将划线或涂布接种的平板倒置于培养箱或温室中37 培养1624 h，即可长出单菌落(图4),【巩固2】 下列有关平板划线操作的叙述不正确的是 ( )。 A第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 B每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种 C在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液 D划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者,解析 平板划线操作中，接种环取菌种前灼烧的目的是避免接种环上可能存在的微生物污染培养物，以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留的菌种。划线结束仍需灼烧接种环，是为了能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。 答案 C,特别提醒 (1)进行划线时最后一区和第一区不可接触。 (2)平板划线各次灼烧接种环的目的。 平板划线操作第一次划线及每次划线之前都需灼烧灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧目的不同。 (3)灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。,【例3】 如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为12345。下列操作方法正确的是 ( )。 A操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌 B划线操作须在火焰上进行 C在5区域中才可以得到所需菌落 D在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌,微生物纯化培养,深度剖析 本题考查平板划线的操作方法。在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰边进行。在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。 答案 D,归纳提升(1)倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物。 (2)平板倒置原因：平板皿盖上会凝结水珠，培养基表面的温度也较高，平板倒置后，既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 (3)两种纯化方法的比