胃癌发生发展中可溶型Ｆａｓ／ＦａｓＬ的表达及其意义.doc

胃癌发生发展中可溶型的表达及其意义 【摘要】探讨基因蛋白在胃癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组化、特定组织蛋白提取及印迹杂交技术，对例正常胃黏膜，例癌前病变和例胃癌组织中的表达情况加以分析。结果：正常胃黏膜、癌前病变、胃癌组织的阳性率分别为5、5、7；的阳性率分别为20、7、6。印迹杂交显示：胃癌细胞产生的蛋白以分子量的可溶型（）为主，伴少量的膜型（）。结论：在正常胃黏膜和癌前病变、胃癌组织中的表达强度差异有显著性（）；在胃癌组织和正常胃黏膜、癌前病变中的表达强度差异有显著性（）。 【关键词】胃癌基因表达免疫逃逸细胞凋亡 ：，：，：，5，57，20，76，：，（）：，（），（） ；胃癌是发病率较高的恶性肿瘤之一，发病机制尚不十分清楚。（）是肿瘤坏死因子（）一神经生长因子（）受体超家族成员，它通过与其配件（，）相互作用，调控细胞的生存和凋亡。研究表明：系统的异常表达，不仅参与胃癌过程中细胞凋亡异常的调节，而且与胃上皮细胞癌变及免疫逃逸有关。本文通过检测正常胃黏膜、癌前病变、胃癌组织的表达，探讨其在胃癌发生、发展中的作用。 材料和方法 组织来源例正常胃黏膜、例癌前病变和例胃癌组织（人正常胃黏膜和胃癌手术切除）标本选自本室与中国医科大学附属第一医院肿瘤外科共建瘤库。标本在术后内获取，液氮速冻后，保存。 主要试剂兔抗人、抗体（，）购自北京中山生物技术公司；增强化学荧光蛋白检测（）试剂盒系英国公司产品；试剂盒为美国公司产品。 方法 冰冻组织切片将冰冻切片机（型）的操作箱用乙醇擦洗数次，以灭活蛋白酶；温度降至左右，然后按常规方法做以上组织的冰冻切片。 免疫组织化学染色将上述切片做染色，组织病理学观察，选择病变典型的切片用冷丙酮固定，保存，用于免疫组织化学染色。抗抗体的工作浓度均为。以食道鳞状上皮为阳性对照。免疫组织化学染色的步骤按文献所述方法进行。 特定组织的蛋白提取冰冻组织的连续切片，染色，组织病理学观察。若有多种组织存在，则按本研究室建立的特定组织选择法进行蛋白提取。选择切片总体积约，立即用加样器吸头将其移至含，超声破碎，加热，离心，取上清，用紫外分光光度计进行蛋白浓度然后调整浓度至，保存备用。 蛋白分析取蛋白样本，在中电泳分离，蛋白按常规行电转移，恒流，过夜。固相支持物为硝酸纤维素膜。脱脂奶粉（，），封闭，以稀释度为的、抗体与膜上靶蛋白孵育。辣根过氧化物酶偶联的猪抗兔抗体（，）作用后，用荧光显色系统曝光显色。 统计学分析数据进行检验。 结果 免疫组织化学染色的结果显示：在正常胃黏膜、癌前病变、胃癌组织的阳性率分别为5、5、7，在正常胃黏膜的表达显著高于癌前病变和胃癌组织（）；在正常胃黏膜、癌前病变、胃癌组织阳性率分别为20、7、6，在胃癌组织中的表达显著高于正常胃黏膜和癌前病变（）。的表达部位基本以细胞为主，表现为细胞浆呈棕黄色染色颗粒。印迹杂交显示：胃癌细胞产生的蛋白以分子量的可溶型（）为主，伴少量的模型（），见表1。表1Fas和Fasl在不同组织中的表达情况 讨论 恶性肿瘤的发生发展是一个多阶段的过程，一般表现为正常上皮、不典型增生、原位癌、浸润癌，同时肿瘤的发生是多基因变异积累的过程。近年研究发现，细胞凋亡的抑制在肿瘤的发生发展过程中起着重要作用。由系统及其细胞内信号传导分子构成了细胞凋亡的重要通路，在此通路上任一环节的缺失都可导致癌细胞逃逸细胞凋亡，从而实现无限增殖。本组实验结果表明：癌前病变、胃癌组织细胞阳性表达率显著低于正常胃黏膜，提示胃癌细胞下调；癌前病变、胃癌组织细胞阳性表达率显著高于正常胃黏膜，提示胃癌细胞上调。因此证实了胃癌组织细胞中存在系统平衡失调，导致系统介导的细胞凋亡途径发生异常，可能是胃黏膜癌变过程中细胞凋亡抑制的重要机制之一。另外，印迹杂交显示：胃癌细胞产生的蛋白以分子量的可溶型（）为主，伴少量的膜型（）。胃癌细胞中缺乏膜型的表达意味着将不能与或其重组体相结合触发凋亡。这提示：胃癌细胞可能通过大量分泌来封闭细胞外基质中以及免疫活性细胞表达的，以阻止后者与自身含膜内死亡区域（，）的接触，从而使胃癌细胞获得免疫逃逸能力，使胃癌细胞得以持续增殖。在胃癌发生发展各阶段中均有表达，但在表达程度上存在一定差异，即癌前病变、胃癌组织阳性表达率显著低于正常胃黏膜，表明表达异常可能在胃癌发生过程中起一定作用。在癌前病变和胃癌组织黏膜间的表达差异无显著性，说明的出现很可能是各类胃癌及癌前病变的重要生物学特性之一。对的表达、功能及其可调性的分子机制的研究对胃癌的早期诊断和预后判断及基因治疗等方面具有重要意义。 【参考文献】 ，： ，： ，： 岩，刘宁，刘佳，等冰冻组