叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡的制备及其抗肿瘤活性研究.doc

基金项目：国家自然科学基金青年基金（51103180），天津市应用基础研究计划面上项目（11JCYBJC02400） 作者简介：张琳华，女，副研究员 研究方向：生物材料与药物缓控释 *通讯作者：孙洪范，男，研究员 研究方向：生物材料与药物缓控释Email: , Tel:(022)87892052叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡的制备及其抗肿瘤活性研究张琳华，马桂蕾，宋存先，孙洪范*（中国医学科学院&北京协和医学院生物医学工程研究所，天津市生物医学材料重点实验室，天津 300192）摘要： 目的 制备新型叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡，研究其理化性质、细胞毒性和体内抗肿瘤活性。方法 以两亲性三嵌段共聚物聚己内酯-b-聚乙二醇-b-聚己内酯（PCL-b-PEG-b-PCL）、甲氧基聚乙二醇二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（mPEG2000-DSPE）、偶联叶酸的磷脂DSPE-PEG(2000) Folate共混物为载体材料，通过薄膜-超声分散法制备出叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡并对其进行形态、粒径及其分布、Zeta电位、载药量及包封率、体外释放等表征，用CCK-8法研究了聚合物纳米囊泡对H1299肺癌细胞的细胞毒性，并评价其在BALB/c小鼠EMT-6乳腺癌模型中的抗肿瘤效果。结果 叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡呈球形，具有明显的核-壳结构，粒径均匀。随着紫杉醇投药量的增加，纳米囊泡的粒径增大，包封率降低。载药30%的叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡的平均粒径为311 nm，多分散系数为0.171，Zeta电位为-30.3 mV，包封率为91.16%。体外释放研究表明载紫杉醇聚合物纳米囊泡基本无药物突释现象，具有缓释特性。细胞毒性研究表明当紫杉醇浓度为25gmL-1时，叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡的细胞毒性低于相应浓度的紫杉醇/聚氧乙烯蓖麻油注射剂。体内抗肿瘤活性实验研究表明，叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡对小鼠EMT-6乳腺癌具有明显抑制作用，具有与紫杉醇/聚氧乙烯蓖麻油注射剂相似的抑制肿瘤作用。结论 叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡具有高载药量及包封率、均匀的粒径及分布、缓释特性、低毒和较好的抗肿瘤作用，是一种有潜力的紫杉醇缓控释新剂型用于提高紫杉醇的药效并且降低不良反应。关键词：紫杉醇；聚合物纳米囊泡；聚己内酯-b-聚乙二醇-b-聚己内酯；叶酸靶向；细胞毒性；抗肿瘤活性Preparation, Characterization, In Vitro and In Vivo Studies on Folate-Targeted Biodegradable Polymersomes Loaded with PaclitaxelZHANG Lin-hua, MA Gui-lei, SONG Cun-xian, SUN Hong-fan. (Tianjin Key Laboratory of Biomaterial Research, Institute of Biomedical Engineering, Peking Union Medical College & Chinese Academy of Medical Sciences, Tianjin 300192, China)ABSTRACT: OBJECTIVE To prepare folate-targeted biodegradable polymersomes loaded with paclitaxel, and evaluate its physical and chemical properties, in vitro cell cytotoxicity as well as in vivo antitumor activity. METHODS Folate-targeted biodegradable paclitaxel-loaded polymersomes composed of PCL-b-PEG-b-PCL、mPEG2000-DSPE and DSPE-PEG(2000) Folate were prepared by thin-film hydration and ultrasonic method, and characterized in terms of morphology, particle size and size distribution, drug loading content, encapsulation efficiency and in vitro release. The cell cytotoxicity of folate-targeted biodegradable paclitaxel-loaded polymersomes in lung carcinoma H1299 cells was observed with CCK-8 assay. The in vivo antitumor activity was evaluated in BALB/c mice bearing the EMT-6 breast tumor models. RESULTS Folate-targeted biodegradable paclitaxel-loaded polymersomes showed spherical core-shell morphology with narrow size distribution. With the increase of drug-fed amount, the sizes of folate-targeted biodegradable paclitaxel-loaded polymersomes increased, while the drug encapsulating efficiency decreased. The folate-targeted biodegradable paclitaxel-loaded polymersomes with drug-loading content of 30% were found as spherical shape with the average particle diameter of 311 nm, polydispersity coefficient of 0.171 and Zeta potential of -30.3 mV. The folate-targeted biodegradable paclitaxel-loaded polymersomes showed a continuous and steady release of PTX without initial burst release. At the paclitaxel concentration of 25gmL-1, the folate-targeted biodegradable paclitaxel-loaded polymersomes displayed much less cell cytotoxicity than paclitaxel injections with Cremophor EL. The in vivo tumor inhibiting activity of folate-targeted biodegradable paclitaxel-loaded polymersomes was similar to that of paclitaxel injections with Cremophor EL in the same paclitaxel concentration. CONCLUSION The folate-targeted biodegradable paclitaxel-loaded polymersomes had high drug-loading content and drug encapsulating efficiency, more uniform size and size distribution, excellent drug sustainable-release behavior, less cytotoxicity, good antitumor activity similar to paclitaxel injections with Cremophor EL. Therefore, folate-targeted biodegradable paclitaxel-loaded polymersomes would be a novel paclitaxel preparation in clinic for the treatment of tumor.KEY WORDS: Paclitaxel; Nano-sized Polymersomes; PCL-b-PEG-b-PCL; Folate targeted; Cell cytotoxicity; Antitumor activity紫杉醇（paclitaxel，PTX）是从红豆杉属植物紫杉的树干和树皮中提取得到的天然抗癌药，临床上主要用于卵巢癌、乳腺癌及非小细胞肺癌的治疗1,2。由于PTX在水中溶解度极低，临床以聚氧乙烯蓖麻油和乙醇溶解后给药，给药后存在严重过敏反应、肾毒性、神经毒性、心脏毒性等不良反应，使其临床应用受到限制3,4。为消除毒副作用，提高PTX在水中的分散性，设计新的更能被接受的剂型以淘汰含有Cremophor的传统剂型成为当前的研究热点，如微乳、胶束、囊泡、前体药物、包合物、脂质体、纳米粒等5-11。聚合物囊泡（Polymersome）是由合成或天然改性的双亲性聚合物自组装构成、具有类似脂质体双层结构的封闭空腔球体或类球体。相对于表面活性剂、脂质体等小分子囊泡，聚合物囊泡有着分子可设计性好、囊泡强度高、稳定性好、渗透性强等优点 12,13。作为药物载体时,同脂质体一样具有组织相容性和细胞透过性,但不像脂质体容易受氧化或水解,也不易泄漏药物。药物被聚合物囊泡包封后，可以起到增效、减毒、缓释、增加药物稳定性和靶向等作用；表面修饰后，则可赋予囊泡在血液中长循环和靶向等特性14,15。近年来，随着大分子自组装的飞速发展，以聚合物囊泡作为一类新型药物载体的研究得到了广泛的关注。叶酸是一种糖基化磷脂肌醇连接的膜糖蛋白，其受体在许多肿瘤细胞中过度表达，而在绝大多数正常组织中几乎不表达，同时叶酸无毒、免疫原性弱、稳定, 与叶酸受体的结合力强,对肿瘤有高度选择性16-18。因此，将叶酸连接到聚合物囊泡表面，赋予聚合物囊泡对肿瘤细胞的主动靶向性，可提高药物在肿瘤组织中的浓度，减轻不良反应，实现肿瘤的靶向治疗。本研究以两亲性三嵌段共聚物PCL-b-PEG-b-PCL、甲氧基聚乙二醇二硬脂酰磷脂酰乙醇胺mPEG2000-DSPE、偶联叶酸的磷脂DSPE-PEG(2000) Folate为载体材料，通过分子自组装制备出新型叶酸靶向的载紫杉醇聚合物纳米囊泡，并对其特性进行表征，研究其细胞毒性和体内抗肿瘤活性，并与临床应用的紫杉醇/聚氧乙烯蓖麻油注射剂进行比较。1 材料及仪器己内酯单体（-CL）（纯度99%, 美国Aldrich公司）；聚乙二醇8000（纯度99%，美国Sigma公司）；甲氧基聚乙二醇二硬脂酰磷脂酰乙醇胺mPEG2000-DSPE（美国Avanti Polar Lipids 公司）；偶联叶酸的磷脂DSPE-PEG(2000) Folate，（美国Avanti Polar Lipids 公司）；紫杉醇原料药（纯度99%，中国重庆美联制药有限公司）；紫杉醇对照品（含量测定用，中国生物制品检定所）；紫杉醇/聚氧乙烯蓖麻油注射剂(6 mgmL-1 5 mL)（北京四环医药科技股份有限公司）；CCK-8试剂盒（Dojindo公司，日本）。高效液相色谱（美国Waters公司）；VC 501探头超声仪（美国Sonics &Materials公司）；高速冷冻离心机（美国Beckman公司）；Tecnai G 20 S-TWIN型透射电子显微镜（荷兰FEI公司）；Malvern Nano ZS粒度及Zeta电位分析仪（英国Malvern公司）。2 方法2.1 PCL-b-PEG-b-PCL两亲性三嵌段共聚物的合成 在辛酸亚锡催化下，用聚乙二醇8000引发-己内酯（-CL）开环聚合，合成了PCL-b-PEG-b-PCL两亲性三嵌段共聚物。准确称取7.5g-CL和7.5g PEG加入到经硅烷化处理的干燥聚合管中，再将适量辛酸亚锡经注射器加入聚合管。体系进行抽真空-充氮气过程反复3次，真空封管，将其放入150恒温油浴中反应16h。反应结束后，将所得产物溶于少量二氯甲烷，倾入大量甲醇中重沉淀进行纯化，过滤后得到白色产物，在40下真空干燥至恒重即得到纯化后的PCL-b-PEG-b-PCL两亲性三嵌段共聚物。对聚合物进行了FT-IR、1H NMR、GPC表征。2.2 叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡的制备 用薄膜-超声分散法制备叶酸靶向载紫杉醇聚合物纳米囊泡。将PCL-b-PEG-b-PCL、紫杉醇、DSPE-PEG2000、DSPE-PEG(2000) Folate（70:30:3.5:0.35，w%）溶于二氯甲烷中，在茄形瓶中旋转蒸发制成均匀薄膜，抽真空过夜除去残留的有机溶剂。在茄形瓶中加入双蒸水于60水化1h，震荡混匀，冰浴下使用探头超声仪超声10 min，即得载药纳米囊泡分散液，12000 rmin-1离心30 min，收集下层沉淀，冷冻干燥得叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡。采取上述制备方法，在处方中不加DSPE-PEG(2000) Folate制备出mPEG-DSPE修饰的紫杉醇聚合物纳米囊泡。2.3 叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡的表征2.3.1 粒径及其分布、的测定 室温下取叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡混悬液适量，加蒸馏水稀释10倍，置于Malvern Nano ZS粒度及Zeta电位分析仪中测定纳米囊泡的粒径大小及其分布、电位。2.3.2 形态的观察 取少量叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡混悬液滴至铺有碳膜的铜网上，自然晾干后，于透射电子显微镜下观察其形态。2.3.3 包封率和载药量的测定使用HPLC法测定叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡的包封率及载药量。HPLC色谱条件：色谱柱为C18柱( Symetry，150 mm4.6 mm, 5 mm)；流动相为乙腈水(50:50, v/v)；流速为1.0 mLmin-1；紫外检测波长为227 nm；进样量20l。 精密称取紫杉醇纳米囊泡5 mg，溶于5 ml乙腈中，加入蒸馏水定容至10 mL，用HPLC测溶液中紫杉醇的峰面积，结合紫杉醇标准曲线，计算载药量与包封率。载药量(%)=聚合物纳米囊泡中紫杉醇的质量100%聚合物纳米囊泡的质量紫杉醇投药量包封率（%）=聚合物纳米囊泡中紫杉醇量100%2.4 叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡体外释放研究采用双腔扩散池法测定药物体外释放。精确称取叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡2 mg，加入水杨酸钠PBS（1M，pH 7.4）4.5 mL，震摇使其形成纳米囊泡悬液,然后加入双腔扩散池(中间为0.22m孔径的微孔滤膜)一侧即释放池,另一侧为接收池亦加入水杨酸钠溶液4.5 mL,置于37 ，130 rmin-1的恒温摇床中进行释放实验。每隔一定时间,取出接收池的溶液作为释放液,然后补充新鲜的水杨酸钠溶液4.5 mL。用二氯甲烷萃取释放液中的紫杉醇，重复萃取后分离得到的紫杉醇二氯甲烷液中加入流动相4.5 mL，在氮气下挥干二氯甲烷直至溶液澄清，定容。用HPLC法（同上色谱条件）测定紫杉醇含量，计算释放量并绘制累积释放曲线。2.5 叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡的细胞毒性研究2.5.1 细胞培养 H1299常规培养于高糖DMEM完全培养液中(含10胎牛血清，100 U/ml青霉素，100U/ml链霉素)，经0.25胰蛋白酶溶液消化传代，在37、饱和湿度、含5CO2的培养箱中进行培养。2.5.2 CCK-8法测定叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡对H1299细胞毒性细胞存活率（%）=实验组OD值-空白对照组OD值阴性对照组OD值-空白对照组OD值100%取对数生长期H1299细胞以每毫升1.5104个的密度将细胞接种于96孔培养板，每孔200 L，于接种后24h更换培养液，其实验组为紫杉醇/聚氧乙烯蓖麻油注射剂组（25gmL-1）、mPEG-DSPE修饰的紫杉醇载药纳米囊泡组（紫杉醇浓度25gmL-1）、叶酸靶向紫杉醇纳米囊泡组（紫杉醇浓度25gmL-1）、叶酸靶向的空白纳米囊泡组，对照组为阴性对照组（不加药）、空白对照组（无细胞和无药），每组设6个复孔，培养24h、48h、72h、96h、120h后，小心吸弃孔板内的上清液，各孔加入含CCK-8 10L的100L无血清培养液，37、5% CO2培养3 h后于酶标仪450 nm处测光密度值。按下式计算细胞存活率，并绘制细胞生长抑制曲线。2.6 抑瘤试验取对数生长期的EMT-6乳腺癌细胞，配成5106mL - 1单细胞悬液，BALB/c小鼠腋下接种0.2 mL /只。待瘤体直径约58 mm时，将动物随机分为4组在瘤旁注射给药，每组10只。对照组为注射灭菌生理盐水，阳性组为注射紫杉醇/聚氧乙烯蓖麻油注射剂，治疗组1：注射叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡，治疗组2：注射mPEG-DSPE修饰的紫杉醇聚合物纳米囊泡，剂量均为紫杉醇量20 mgkg-1，隔天给药1次，共给药7次。接种肿瘤25天后处死动物，取肿瘤称重，测量瘤块长、短径，根据以下公式计算肿瘤体积、药物制剂对肿瘤的重量抑制率和体积抑瘤率。肿瘤体积（V）=1/2长径短径2重量抑瘤率（%）=（1-实验组平均瘤重对照组平均瘤重）100%体积抑瘤率（%）=（1-实验组平均体积对照组平均体积）100%2.7 统计学方法 所有统计的实验数据以s表示，对比较的样本进行 t 检验, P 0.05具有统计学意义。3 结果与讨论3.1 叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡的表征叶酸靶向紫杉醇纳米囊泡的透射电镜图如图1所示，载药纳米囊泡呈球形，大小均匀，具有明显的核-壳结构。说明两亲性嵌段共聚物在水中自组装成具有核-壳结构的纳米囊泡，载药后，由于紫杉醇依靠疏水作用协同进入，均匀分散在纳米囊泡的核中，形成具有核壳结构的载药纳米囊泡。在制备过程中，加入mPEG2000-DSPE及DSPE-PEG(2000) Folate修饰后，由于其一端的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)亲脂性较强，可以插入到纳米囊泡里面，柔顺的PEG长链留在纳米囊泡表面，与纳米囊泡表面本身携带的PEG共同赋予聚合物囊泡长循环特性，可延长在血液中的循环时间而不被单核吞噬细胞系统(MPS)捕获，通过EPR效应，使载药囊泡被动靶向聚集在肿瘤部位，同时通过叶酸受体介导的方法将药物主动靶向浓集于叶酸受体丰富的肿瘤部位，达到肿瘤靶向治疗的目的19,20。用Malvern Nano ZS粒度及Zeta电位分析仪对制备出的叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡进行粒径及其分布、Zeta电位测定。载药30%的叶酸靶向紫杉醇纳米囊泡的平均粒径为311 nm，多分散系数为0.171，Zeta电位为-30.3 mV。Zeta电位与纳米囊泡体系的稳定性密切相关，本研究制备的叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡具有较高的Zeta电位，由于电子排斥力不容易发生聚集，纳米囊泡能稳定地分散于溶液中，属于热力学稳定体系。 图1 叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡的透射电镜图（载药量30%）Figure.1 Transmission electron micrograph ( TEM ) of folate targeted PTX-loaded polymersome with drug-loaded amount of 30%.图2 叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡粒径及其分布图（载药量30%）Figure.2 Size and size distribution of folate targeted PTX-loaded polymersome with drug loaded amount of 30%. 不同投药量对叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡的制备影响如表1所示，结果发现，随着投药量的增加载药纳米囊泡粒径增大，包封率有所降低，紫杉醇投药量达到50时，实际载药量比理论载药量显著降低，30投药质量量所得纳米囊泡的平均粒径为311.0 nm，包封率达到91.16%，以上数据说明，在制备叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡时，紫杉醇投药量以不超过30%为宜，以免成本过高。表1 投药量对叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡的影响Tab.1 Influence of PTX fed amount on the preparation of folate targeted PTX-loaded polymersomePTX fed amount / %DLC/ %EE / %Size / nm10.098.7995.11259.720.1217.5092.98286.830.0126.0891.16311.050.2430.2160.12401.13.2 叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡的体外释放由于紫杉醇在水中溶解度极低,为了达到释放的漏槽条件,需选择一定的释放介质。有机溶剂和表面活性剂可作为释放介质,但是其对释放动力学和稳定性的潜在影响的研究不充分并常常被忽视。本实验选择水杨酸钠溶液作为叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡的体外释放介质,使其在较小体积释放液中就能达到漏槽条件21。载药量为30%的叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡体外释放曲线见图3，由图可知，在体外释放过程成基本没有突释现象，说明聚合物纳米囊泡表面几乎没有吸附药物，药物都被包裹在囊泡内部。在前5天，紫杉醇的累积百分释放量与时间呈良好的线性关系，为零级释放动力学模型（R0.994），零级释放能确保药物随时间释放的量保持稳定，从而最大限度减少潜在的峰/谷波动及副作用，并最大限度地延长药物浓度处于治疗窗（有效性）的时间。随后，药物释放减缓，释放28天后，累积百分释放量约为98.7%，紫杉醇基本释放完全。叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡具有良好的药物缓释作用。图3 叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡的体外释放曲线 (n=3)Fig.3 In vitro release profile of folate targeted PTX-loaded polymersome (n=3)3.3 叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡的细胞毒性研究本研究用CCK-8法研究了临床应用的紫杉醇/聚氧乙烯蓖麻油注射剂、mPEG-DSPE修饰的载紫杉醇聚合物纳米囊泡、叶酸靶向紫杉醇聚合物纳米囊泡及空白纳米囊泡对H1299肺癌细胞的细胞毒性。紫杉醇在人体血浆中可存在的浓度范围是0.025gmL-1至25gmL-1 9，本研究中细胞培养液中紫杉醇浓度为25gmL-1，为紫杉醇在人体血浆中可存在的最大浓度。CCK-8法比较各组对H1299肺癌细胞的生长抑制曲线如图4，由图可见，加入紫杉醇/聚氧乙烯蓖麻油注射剂的细胞存活率在细胞培养24h时大幅下降，72h后细胞生长几乎完全被抑制。空白叶酸靶向的聚合物纳米囊泡对细胞没有毒性，细胞存活率一直保持近100%。mPEG-DSPE修饰及叶酸靶向载紫杉醇纳米囊泡的细胞存活率均随培养时间的延长而下降，与mPEG-DSPE修饰的载紫杉醇纳米囊泡相比，叶酸靶向紫杉醇纳米囊泡对细胞毒性更强，在培养96h后，细胞存活率为19.73%，而mPEG-DSPE修饰的纳米囊泡细胞存活率为30.08%。与紫杉醇/聚氧乙烯蓖麻油注射剂细胞存活率变化相比，mPEG-DSPE修饰及叶酸靶向载紫杉醇纳米囊泡的细胞存活率在各时间点均高于紫杉醇/聚氧乙烯蓖麻油注射剂组，这可能是由于紫杉醇注射剂直接作用于细胞，对细胞的杀伤力较大，而紫杉醇包载在纳米囊泡中后从纳米囊泡中释放出来受到载体的影响，需要一定的时间，在同一作用时间点，培养液中的药物含量小于紫杉醇/聚氧乙烯蓖麻油注射剂。图4 紫杉醇注射剂、mPEG-DSPE修饰的载紫杉醇聚合物纳米囊泡、叶酸靶向载紫杉醇聚合物纳米囊泡（紫杉醇浓度25gmL-1）、叶酸靶向空白聚合物纳米囊泡（聚合物浓度10 mg/mL）在不同作用时间对H1299肺癌细胞生长抑制曲线（n=6，s）。Fig.4 H1299 cell viability after 24h, 48h, 72h and 96h treatment by Taxol, mPEG-DSPE modified PTX-Polymersome, Folate targeted PTX-Polymersome at the paclitaxel concentration of 25g/mL, respectively, and folate drug-free polymersome at polymers concentration of 10 mg/mL. 3.4 紫杉醇聚合物纳米囊泡对荷EMT-6乳腺癌BALB/c小鼠抑瘤作用在体内抗肿瘤活性实验中，以生理盐水为对照，比较了mPEG-DSPE修饰载紫杉醇纳米囊泡、叶酸靶向载紫杉醇纳米囊泡和紫杉醇/聚氧乙烯蓖麻油注射液对荷EMT-6乳腺癌小鼠的抑瘤作用，结果见表2。生理盐水组的荷瘤小鼠肿瘤增长最快，重量和体积最大；紫杉醇/聚氧乙烯蓖麻油注射液组、mPEG-DSPE修饰载紫杉醇纳米囊泡组、叶酸靶向载紫杉醇纳米囊泡组对肿瘤均有抑制作用，给药后肿瘤的重量和体积均明显低于对照组(P0.05)，说明叶酸靶向载紫杉醇纳米囊泡对BALB/c小鼠EMT6乳腺癌的生长具有与紫杉醇注射液相似的抑制作用。与mPEG-DSPE修饰载紫杉醇纳米囊泡组相比，叶酸靶向载紫杉醇纳米囊泡组对肿瘤抑制作用较强(P0.05)。表2. 叶酸靶向载紫杉醇纳米囊泡对荷EMT-6乳腺癌BALB/c小鼠抑瘤效果（n=10，s）Tab.2 Anti-tumor activity of folate targeted PTX-loaded polymersome on BALB/c mice bearing EMT6 mammary tumors (n=10，s)GroupAnimal amountBegin/endWeight of animal/gWeight of tumor/gInhibiting rate of tumor weight/%Volume of tumor/mm3Inhibiting rate of tumor volume/%BeginEndControl group10/820.101.6321.231.771.3560.21 1238.71347.74Paclitaxel injection10/819.811.4217.841.350.440.11*67.55378.5394.63*69.44mPEG-DSPE modified PTX-Polymersome10/819.751.5920.231.680.740.16*45.74639.42144.17*48.38Folate targeted PTX-Polymersome10/919.611.4719.901.560.480.13*64.60423.93114.88*65.78*P 0.05 vs control group4 结论本研究成功地以两亲性三嵌段共聚物PCL-b-PEG-b-PCL、mPEG2000-DSPE及DSPE-PEG(2000) Folate为载体材料，通过分子自组装制备出新型叶酸靶向载紫杉醇聚合物纳米囊泡。实验结果表明，叶酸靶向载紫杉醇聚合物纳米囊泡的细胞毒性低于相应浓度的紫杉醇/聚氧乙烯蓖麻油注射剂，但对荷EMT-6乳腺癌BALB/c小鼠的肿瘤生长具有与紫杉醇/聚氧乙烯蓖麻油注射剂类似的抑制作用。与mPEG-DSPE修饰的载紫杉醇纳米囊泡相比，叶酸靶向的载紫杉醇纳米囊泡对细胞毒性更强、对荷EMT-6乳腺癌BALB/c小鼠肿瘤抑瘤作用更强，表明运用肿瘤细胞表面有大量叶酸受体这一特性，通过叶酸靶向作用将纳米囊泡导入肿瘤细胞内能有效提高抑制肿瘤的能力。REFERENCES1 SINGLA A K, GARG A, AGGARWAL D. 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