人血涂片的制作.ppt

人血涂片的制作 河北大学细胞生物学实验室 血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方 法，临床上应用极为广泛，制备厚薄适宜，分布均 匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要基本技 术之一。 涂片法制片是生物显微制片的基本方法之一。 可分5个步骤进行 n消毒 n取血 n推片 n染色 n观察 步骤 消毒与取血 消毒 先按摩取血部位，使血流通畅；再用酒精 消毒采血针和取血部位（如指尖）。 取血 待酒精干后，刺破皮肤，使血自然流出， 勿挤。取干净载片，让血滴在离载片一端中4 5毫米处，注意手指持握载片的边缘，勿触 及其表面。不能使载片接触取血部位的皮肤。 推片 取一块边缘光 滑的载片做推片。 将其一端置于血滴 前方，向后移动到 接触血滴，使血液 均匀分散在推片与 载片的接触处。然 后使推片与载片呈 3040角，向另 一端平稳地推出， 如右图所示。涂片 推好后，迅速在空 气中摇，使之自然 干燥。 染色 用特种玻璃铅笔在血膜两侧画两条线， 防止染液外溢。再将瑞氏染液(伊红-亚甲基 蓝)滴在血膜上，至染液淹没全部血膜，染 半分钟。加等量蒸馏水(或缓冲液)与染液混 合再染5分钟。最后用蒸馏水把染液冲掉， 用吸水纸吸干，自然干燥后，即可观察。 观察 红细胞 淡红色，无核的圆形细胞，因红细胞为双凹形，故边 缘部分染色较深，中心较浅，直径7-8微米。 颗粒白细胞 嗜中性颗粒白细胞：体积略大于红细胞，细胞核被染成 紫色分叶状，可分1-5叶。直径10-12微米。 嗜酸性颗粒白细胞：略大于嗜中性白细胞，细胞核染成 紫色，通常为2叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染 成鲜红色。直径10-15微米。 嗜碱性颗粒白细胞：体积略小于嗜酸性白细胞，细胞质 中有大小不等被染成紫色的颗粒，颗粒数目较嗜酸性 白细胞的颗粒少，核1-2叶，染成淡蓝色。直径10-11 微米。 无颗粒白细胞 淋巴细胞：可观察到中、小型两种。小淋巴细胞与红 细胞大小相似，圆形，核致密，染成深紫色。周围 仅一薄层嗜碱性染成淡蓝的细胞质。中淋巴细胞较 大，核圆形。直径6-8微米。 单核细胞：体积最大，细胞圆形。胞质染成灰蓝色。 核呈肾形或马蹄形，染色略浅于淋巴细胞的核。直 径14-20微米。 血小板 血小板为不规则小体，直径2 - 3微米。其周围部分浅 蓝色，中央有细小的紫红色颗粒，聚集成群。 注意事项 n玻片的清洗：新玻片常有游离碱质,因此应用清洗液 或10%盐酸浸泡24h,然后再彻底清洗。用过的玻片可 放入适量肥皂水或合成洗涤剂的清水中煮沸20min,再 用热水将肥皂和血膜洗去,用自来水反复冲洗,必要时 再置95%乙醇中浸泡1h,然后擦干或烤干备用。 n使用玻片时只能手持玻片边缘,切勿触及玻片表面,以 保持玻片清洁,干燥,中性、无油腻。 n一张良好的血片,要求厚薄适宜,头体尾分明,分布均 匀,边缘整齐, 两侧留有空隙。血片制好后最好立即 固定染色,以免细胞溶解和发生退行性变。 n血膜未干透,细胞尚未牢固附在玻片上,在染色过程中 容易脱落, 因此血膜必需充分干燥。 注意事项 n细胞染色对氢离子浓度十分敏感,在染色过程中玻片 必须化学清洁,配制瑞氏染液必须用优质甲醇,稀释染 液必须用缓冲液,冲洗用水应近中性, 否则各种细胞 染色反应异常,致使细胞的识别困难,甚至造成错误。 n染色时间与染液浓度,室温高低,细胞多少有关。染液 越淡,室温越低, 细胞越多,所需染色时间越长或应适 当增加染液量,因此染色时间应视具体情况而定。特 别是更换新染料时必须