20134281班分子生物参考资料整理

20134281 班分子生物参考资料整理 一、名词解释 1. 酶偶联受体：主要是生长因子和细胞因子的受体，此类受体介导主要是调 节蛋白质的功能和表达水平，调节细胞分化.P394 2. STAT：转录活化子，与信号转导子共同构成 JAK-STAT 通路，为细胞信息 内传最重要的信号转导通路。受 JAK 磷酸化激活后，入胞核调控相关基因的表 达，改变靶细胞增殖和分化。P395-396 3. NF-B：几乎存在于所有细胞的转导因子，广泛参与机体防御反应，组织 损伤和应激，细胞分化和凋亡以及肿瘤的生长过程。活化后入胞核作用相应的 增强子元件，影响多种因子，受体，蛋白的转录。P397-398 4. Ras： 第一个被发现的低分子量蛋白，参与不同的信号转导通路。P388 5. 表观遗传学： 是没有 DNA 序列变化，可遗传的基因表达 (活性)的改变。 6. 核酸分子杂交：互补的核苷酸序列通过碱基配对形成稳定的杂合双链分子 DNA 分子的过程称为杂交。 7. 探针：带特殊可检测检测标记的核酸片段，它具有特定的序列，能与待测 的核算互补片段结合用于检测核酸样品中的特定基因。P406 8. PCR：以拟扩增的 DNA 分子为模板，以一对与模板互补的寡核苷酸片段为 引物，在 DNA 酶的作用下，依半保留复制延模板链延伸直至完成两条新练得 合成，重复此过程即可使目的 DNA 得到扩增。P407 9. Western blotting：蛋白质印迹，蛋白质在电泳后可从胶中转移并固定到 膜型材料上，再与溶液中相应的蛋白质结合，常用抗体检测特异性蛋白质的存 在，也称为免疫印迹。P407 10. miRNA ：在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码 RNA， 其大小长约 2025 个核苷酸。 11. 基因组 DNA 文库: 以 DNA 片段的方式储存着某一生物的全部 DNA 基因组信 息。P411 12. cDNA 文库： 包含某一组织细胞在一定条件下所表达的全部 mRNA 经逆转 录而合成的 cDNA 序列的克隆全体，以 cDNA 片段的方式储存着该组织细胞的记 忆表达信息。 13. 感受态细胞：细胞膜通透性增加，易于接受外源基因的细菌。 14. 蓝白斑筛选：当载体与宿主细胞同时表达 半乳糖苷酶的 C-端肽链和 肽，宿主细胞才有 半乳糖苷酶活性，使特异的底物 X-gal 变为兰色化 合物，而重组子由于基因插入使 肽基因失活，不能形成 互补，在含 X-gal 的平板上，含阳性重组子的细菌为无色菌落或噬菌斑。 15. 融合型表达：表达出的外源蛋白与质粒载体上的另一蛋白连接在一起，便 与分离和纯化。 16. 瞬时表达；外源基因不整合到宿主细胞染色体上，在细胞中的表达时间较 短，转染的方法相对简单，耗时少，使用快速分析。 17. 稳定表达：外源基因整合到宿主染色体需要筛选，可获得 稳定表达的细 胞株，可复制，可稳定传代，耗时长，不易成功。 18. 包涵体：一些外源基因表达产物在细胞内凝聚成没有生物活性的固体颗粒。 19. 原癌基因：细胞基因组内正常的基因其编码产物通常作为正调控信号促进 细胞的增殖和生长。 20. 抑癌基因：肿瘤抑制基因，是调节细胞正常生长和增值的基因，当这些 基因不能表达，或者它们的产物失去活性，就导致细胞异常生长和增殖，最终 导致细胞癌变，反之，若导入或激活它们则可抑制细胞的恶性表型。 21. 病毒癌基因：存在于病毒中的致癌基因，能使靶细胞发生恶性转化，不编 码病毒结构成分，对病毒无复制作用，但是当受到外界条件激活时，可诱导细 胞恶性转化。 二、问答题 1. 细胞内钙离子浓度升高时，为什么能激活多种蛋白激酶？ 当细胞内钙离子浓度升高时，可以和钙调蛋白 AC 和 CAMP-PDE 等多种信号转导 分子结合，通过别构效应激活这些分子，从而可以进一步激活下游的蛋白激酶， 钙离子也可直接激活蛋白激酶 C。 2. 一种受体为什么有可能同时激活几条信号转导通路？ 有些受体磷酸化后产生多个与其他蛋白相互作用位点，即可激活多个信号转导 分子，即他们有多样组合性。 3. 简述作为信号转导分子在细胞内转导信号的基本方式有哪些？ 1.改变下游信号转导分子的构象 2.改变下游信号转导分子的细胞内定位 3.信号转导分子复合物的形成或解聚 4.改变小分子信使的细胞内浓度或分布 4. 表观遗传学与经典遗传学的不同在哪里？ 经典遗传学认为基因型决定表现性；表观遗传学认为即使基因型一样，其表现 型也存在差异。 5. 双脱氧末端终止法测序的原理？ 答：DNA 的合成反应，只不过反应体系中加了四种双脱氧核糖核酸（ddNTP） 中的一种，在 DNA 链合成过程中 ddNTP 会代替部分 dNTP 作为底物进行 DNA 合成 反应，一但 ddNTP 掺入到合成 DNA 链中，正在延伸的 DNA 链将终止。 6. 核酸分子杂交的原理？ 答：不同来源的核酸分子经变性后成为单链，当缓慢退火时，不同来源的核酸 分子，只要他们之间存在一定的互补序列，就可以重新结合成双链。 7. 探针标记的方法有哪些？ 酶促标记法，切口平移法，随机引物合成法，末端标记法 8. 简述 PCR 反应的基本步骤 1.变性：将反应体系加热到 94，使模板 DNA 完全变性形成单链，同时引物自身以及引物 之间存在的局部双链也得以清除。 2.退火：将温度下降至适合温度（一般较 Tm 低 5） ，使引物与模板 DNA 结合。 3.延伸：将温度降至 72，DNA 聚合酶以 dNTP 为底物催化 DNA 的合成反应。 9. PCR 引物设计的基本原则有哪些？ 1.引物长度： 15-30bp，常用为 20 bp 左右。 2.引物扩增跨度： 以 200-500 bp 为宜，特定条件下可扩增长至 10kb 的片段。 3.引物碱基：G+C 含量以 40-60%为宜，G+C 太少扩增效果不佳，G+C 过多易出现非特异条 带。ATGC 最好随机分布，避免 5 个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 4.避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是 3端的互补，否则会形成引 物二聚体，产生非特异的扩增条带。 5.引物 3端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基 不配对而导致 PCR 失败。 6.引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切 分析或分子克隆很有好处。 （常用！） 7.引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。引物量： 每条引物 的浓度 0.11umol 或 10100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高 会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。 10. 获得目的基因的主要方法？ 1直接从染色体 DNA 中分离 2化学合成 3 PCR 或 RT-PCR 体外扩增目的基因 4从基因组文库中筛选 5向目的基因所有者或其所在的实验室索取 11. 表达载体与克隆载体的区别？ 克隆载体：通常仅含有有一个松弛型复制子、一个多克隆位点和一个筛选标记，以便被克 隆和筛选的 DNA 序列能够大量增殖。 .而表达载体除了上述因子外，还需要有强的启动子、核糖体结合位点、转录起始信号、转 录终止信号、翻译起始密码子、翻译终止密码子等一系列调控序列！ 12. 结合基因工程技术谈谈重组人胰岛素的研发原理与步骤？（本题答案不完整） AB 链合成：从人工合成的人胰岛素 A 链和 B 链分别于半乳糖苷酯基连接，形成融合基因分 别在大肠杆菌中表达 A 链和 B 链，然后通过化学氧化作用通过二硫链连接起来。 反转录：通过胰岛素蛋白 CDNA 合成，表达产物是胰岛素原经工具酶切除 C-肽得人胰岛素。 13. 如何利用载体图谱信息指导 DNA 重组体的构建并达到特定的目的（如外源 基因的大量扩增或蛋白的表达等）？ 1、有一个至多个限制酶切割位点，供外源 DNA 片段（基因）插入其中。 2、能够在受体细胞内复制，使目的基因得以扩增。 3、有特殊的标记基因 ，以便目的基因的检测与鉴定。 4、易获得。 5、对受体细胞无害。 14. 真核表达系统的优势？ 1.真核生物具有转录后加工系统，可识别并删除基因中的内含子剪切加工成熟 2.具有完善的翻译后加工系统，可进行糖基化，乙酰化等修饰使蛋白形成天然结构型，因 而真核表达系统产生的蛋白更接近天然状态，有利于其生物功能活性的研究。 3.某些真核细胞可将基因表达产物分泌到细胞培养液中培养简化钝化工艺，降低生产成本。 4.真核生物表达的机制十分复杂，有助于我们深入了解基因调控机制。 15. 原癌基因激活的主要机制？ 1获得启动子与增强子：插入到细胞原癌基因附近或内部, 启动下游邻近基因的转录和影 响附近结构基因的转录水平，使原癌基因过度表达或由不表达变为表达，从而导致细胞发 生癌变。 2染色体易位：在染色体易位的过程中发生了某些基因的易位和重排，使原来无活性的原 癌基因移至强的启动子或增强子附近而被活化，原癌基因表达增强，导致肿瘤的发生。 3。基因扩增：使基因拷贝数升高几十甚至上千倍，发生扩增的机制目前尚不清楚。基因扩 增可致编码产物过量表达，细胞发生转化。 4。点突变：单个碱基的替换， 从而改变了表达蛋白的氨基酸组成，造成蛋白质结构的变 异 5。癌基因的甲基化程度降低 16. 为什么说 p53 是“基因卫士”？ 监测 DNA 损伤，抑制细胞周期，抑制解链酶活性，参与 DNA 的复制和修复，参 与细胞程序性凋亡，在细胞增殖和生长中起到重要作用 17. 如何从基因角度来认识恶性肿瘤的发生与发展？ 一方面当原癌基因的结构或调控区发生变异，基因产物增多或活性增强时，使 细胞过度增殖，从而形成恶性肿瘤。 另一方面当基因不在