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文档简介

1、双光子和光谱扫描在激光共聚焦显微镜上的应用经验,浙江大学生命科学学院 仪器与技术服务平台,机型：Zeiss LSM710 nlo,32通道阵列PMT,690-1080nm可调谐飞秒激光器,激光共聚焦显微镜的非常规应用,利用双光子分辨目标荧光和自发荧光 利用光谱扫描鉴定微弱荧光信号的真假 转基因材料快速筛选 嘈杂背景下的细胞计数 非线性效应 光刻和深度扫描 模拟近红外光源,GFP标记水稻根中自发荧光的清除,单光子激发，水稻根带有强烈的黄绿色自发荧光,双光子激发，自发荧光为蓝色,ex 488nm，Lambda mode,ex 820nm , lambda mode,GFP标记水稻根中自发荧光的清除

2、,双光子激发下GFP荧光与自发荧光的波长分离，820nm激发时，仅采集493-542nm区间的信号以保证特异性,Ex 820nm, channel mode,微弱或自发荧光存在下的信号鉴定,Promoter:GFP载体注射烟草叶片（lambda mode成像）,转GFP弱表达,转GFP不表达,镜下目视特征： 绿色信号被强烈红光掩盖 GFP和RFP弱时无法分辨 Lambda合成图特征： GFP：绿色偏蓝 自发荧光：绿色偏黄 叶绿素荧光：红色,光谱特征： GFP： 主发射峰位于约518nm 副发射峰位于约540nm 后者高度约为前者的一半 呈台阶形 自发荧光： 在560nm左右对称分布 叶绿素荧光

3、： 625nm以上强烈信号,GFP,叶绿素,转基因材料的快速筛选,原则：密集预排列待测样,技巧：lambda扫描 色彩判别 荧光峰形检查,GFP蓝绿特征色,GFP台阶形特征峰,518,540,土壤浸出液中外源GFP标记细菌浓度分析,目的：了解土壤中的不同细菌间的竞争关系 方法：等比掺入外源GFP标记菌体，设置多种环境条件 问题：土壤标本背景嘈杂，往往带有各种带荧光的杂质颗粒 解决： 1 固定样品体积 2 lambda成像检测GFP特异荧光 3 最大化pinhole,非线性效应：碳纳米管,498,518,421,原理：某些材料在双光子激发，会发射波长为激发光一半的荧光,利用不同波长的双光子激光照射可能含碳纳米管的靶向药物，lambda扫描发现荧光信号呈现严格的倍频关系,Ex 850,Ex 1000,Ex 1040,光刻和深度扫描,一种人工合成的透明有机晶体，在一定强度的近紫外光下会发生局部变性，从而具有双光子效应 在2个不同Z坐标下做bleach， ex 458nm ex 900nm 做z-stack，显示多层光刻效果，信号随深度增加而衰减,叶表面蜡

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