实验二重要功能微生物的筛选及生物学特性.ppt

1、实验二 重要功能微生物的筛选及生物学特性,重要功能微生物 农业微生物（磷细菌） 环境微生物（重金属抗性细菌） 工业微生物（生物表面活性剂产生菌） 医药微生物（放线菌） 筛选 系列稀释，平板培养，选择性培养基 生物学特性 菌落特征，菌体特征，革兰氏反应，功能大小等,1、磷细菌的筛选,磷细菌(也称溶磷细菌或解磷细菌)：主要是指土壤中的一类溶解磷酸化合物能力较强的细菌的总称，可以分为无机磷细菌和有机磷细菌。 本实验利用无机磷培养基直接从土壤中筛选无机磷细菌，培养出的目的菌菌落周围会产生透明的溶磷圈。,材料和器具,样品：土壤 培养基：无机磷培养基 培养基配方：去离子水1000 ml 、葡萄糖10克、

2、(NH4 )2SO4 0.1克、 KCl 0.2克、 MgCl26H2O 5克、 Ca3(PO4)2 5克、 MgSO47H2O 0.25克；pH7.0，115 灭菌25min。 其他器具：500ml烧杯、 250ml三角瓶、试管、酒精灯、涂布棒、1ml和100l移液枪及枪头、灭菌锅、显微镜、载玻片等。,实验步骤,配制无机磷培养基100ml， 取250ml三角瓶，向其中加入100ml去离子水和几颗小玻璃珠，再取三只试管各加9mL去离子水，将准备好的上述材料在115下灭菌25分钟。灭完菌好待培养基冷却到60左右倒平板6块。 称取土壤样品1g，加入到加有玻璃珠的100ml无菌水中，震荡30分钟，配

3、成10-2菌悬液。 吸取1mL菌液加入到装有9mL无菌水的试管中，震荡均匀，配成10-3菌悬液。如法依次制成10-4 、10-5 的菌悬液。 吸取各稀释度的菌悬液100L加入到冷却的平板中，稀释涂布，倒置放入30恒温培养箱中培养。 待菌体长出，观察细菌菌落形态和溶磷菌溶磷圈。并测量溶磷菌菌落直径和溶磷圈直径，计算比值，定性比较各溶磷菌落溶磷能力。 制片，革兰氏染色，镜检，观察菌体形态等特性。,2、重金属Cu抗性细菌的筛选,样品：土壤 培养基：1/10 LB(1000ml) 酵母膏 0.5g 蛋白胨 1g 氯化钠 1g pH 7.0 琼脂 2%，配制600ml，分装至3个250ml的三角瓶，灭菌

4、待用 无菌水 准备100ml无菌水置于250ml三角瓶中，内加5颗玻璃珠，灭菌待用。 准备3根试管，每根加入9ml无菌水，加塞，灭菌待用。,抗性平板的制备 将灭菌后的1/10LB培养基融化，待温度适宜后，与CuSO4溶液混匀，制成终浓度为2mg/L、5mg/L、10mg/L的含铜筛选平板，待用。 Cu2 : 200ml培养基+40ul CuSO4 Cu5 : 200ml培养基+100ul CuSO4 Cu10 : 200ml培养基+200ul CuSO4 土壤悬液制备，系列稀释，涂布平板培养 选择10-3、10-4、10-5的稀释度，分别吸取100ul土壤稀释液，分别加入Cu2、Cu5、Cu1

5、0抗性平板中，每个稀释度设置三个重复，用涂布棒涂布均匀。(3x3x3=27) 观察抗性平板上长出的菌落，比较三种浓度的抗性平板，将外观形态一致的视为同一种菌以确定抗性范围。 挑取菌落，进行革兰氏染色，并进行镜检，对所观察到的细菌进行形态描述。,3、生物表面活性剂产生菌的筛选,生物表面活性剂 （Biosurfactants)）是一类由微生物合成的、结构不同的表面活性分子，具有一定表/ 界面活性，集亲水基和疏水基结构于一分子内部的两亲化合物。 在工业领域如采油和能源工业、药物和化妆品、食品、环境工程等中的广泛应用。 一些生物表面活性剂具有抗生性和溶解红血球的特性，这些特性被用于建立血平板筛选模型。

6、,样品：土壤 培养基：血平板 无菌水 土壤悬液制备，系列稀释，涂布平板培养 观察血平板上长出的菌落，比较溶血圈的大小。 挑取菌落，进行革兰氏染色，并进行镜检，对所观察到的细菌进行形态描述。,4、放线菌的筛选及其对金黄色葡萄球菌的抑制作用,放线菌产生的抗生素对细菌具有抑制作用，可以将放线菌菌液涂布在混有金黄色葡萄球菌的培养基中培养一段时间，观察放线菌周围产生的抑菌圈。,样品：土壤 培养基：LB培养基，高氏1号培养基 双层平板制备： 将灭菌后的LB培养基融化，待温度适宜后，与金葡菌液混匀，倒入培养皿，制成底层含菌培养基。凝固后，在上层倒入高氏1号。 土壤悬液制备，系列稀释，涂布平板培养 观察平板上长出的菌落，比较抑菌圈的大小。 挑取菌落，进行革兰氏染色，并进行镜检，对所观察到的细菌进行形态描述。,实验结果1.观察菌落并将实验结果记录下