LC-MS在中药中的应用综述

液质联用在中药研究中的应用摘要：液质联用(LC-MS)以其灵敏、快速、高效等特点，已经成为中药现代化研究液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)是20世纪90年代发展起来的一门综合性分析技术，是目前广泛应用的分析方法之一，它利用液相色谱的高效分离能力对被分析样品进行分离，再以质谱为检测器提供化合物的结构信息，作为一种高效互补的谱和质谱的优点，使样品的分离、定性和定量成为连续的过程。目前LC-MS已广泛应用于和复方配伍研究的复杂性，决定了LC-MS在中药研究领域中的重要性。关键和核心。以往中药成分研究主要采用传统提取分离方法，从学成分，再用光谱和质谱等分析技术进行鉴定。而LC-MS(尤其是HPLC-MS)避免了这种冗杂的操作步骤，可以在成分达到有效分离的基础上，给出丰富的化学结构信息，不仅可以对已知化合物进行分析，而且可以结合同类已知结构化合物的裂对未知成分进行直接分析，这对中药化学成分的分析鉴定起到了重要的作用3]。李丽等4用高效液相色谱与电喷雾质谱联用技术(HPLC-ESI)分离并检测了防风中一种新色原酮类化合物。在电喷雾质谱正离子模式下，通过获得了化合物的分子离子峰主要的鞣花单宁，并确定它们的结构。QiJ等6应用HPLC-DAD-MS/MS研究了11个麦冬高异黄酮的裂解行为，并从麦冬提取物中鉴定了28个该类别的化合物，其中7个为新化合其中鉴定了17个和19个该类化合物，并从化学成分组成上对2种麦冬进行了区分。聂映等8运用LC/QTOF-MS对炒川楝子中成分进行了色谱分离及鉴定，根据各个色谱峰在质谱中的精确分子质量、碎片信息、质谱裂解规律和色谱保留规律，成功鉴定了11种化合物，并通过实验表明，LC/QTOF-MS技术能有效的分析炒川楝子中黄酮类、四环三萜类、有机酸LC-MS以及LC-MS/MS在皂苷类、生物碱类和萜类等中药化学成分的分离鉴定中已经得到了广泛的应用。LC-MS的操作不需要对样品进行繁琐和复杂的前处理，并具有高效快速、灵敏度高，尤其适于含量少、不易分离得到或在分离过程中容易丢失的组分等优点。指纹图谱是国际公认的控制中药质量最有效的方式之一。LC-MS的应用弥补了紫外检测的不足，还提供了大量的化学成分信息，可实现对各主要流出组分的定性其制剂的鉴别及质量评价提供更加全面、可靠的依据。李文龙9采用HPLC-DAD-ESI-TOF/MS联用技术对龙胆苦苷和马钱子甙酸进行鉴别和含量测定，并在此基础上建立了龙胆药材的二元特征指纹图谱，用于龙胆药含量测定和质量控制。刘怡等10]采用HPLC法对不同产地的苦参药材进行分析，个色谱峰(或峰组)为各产地药材特征共有峰，并利用对照品对照和LC-MS法对其中的6个共有峰进行了成分指认。高新彪等[1用高分辨LC-MS/MS对牡丹皮指纹图谱进行了研究，并对牡丹皮药材20个共有峰中的18个色谱峰进行了定性鉴别。并用该方法测定了10批不同产地的牡丹皮，其相似度均在0.96以上。胡一晨等[12]以AgilentZORBAXECLIPSE分析11批秦艽花药材，并利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行了相似度计算。最后建立了秦艽花液质联用指纹图谱的共有模式，标定了指纹图谱中的23个共有峰，11批药材的相似度均>0.90,并用HPLC-ESI-Q-TOF-MS技术对7个共有峰进行了指认。王丹等[31用83份黄芩样品建立的黄芩HPLC指纹图谱中有29个共有峰，利用对照品和LC-MS技术对黄芩指纹谱中的27个化合物进行了指认和鉴定。并考察了影响指纹图谱化学轮廓的因素，结果表明检测波长对指纹谱的化学轮廓影响很大，变换色谱仪、测定，并建立指纹图谱用于大叶冬青叶子的质量检测和控制，指纹图谱的分子电喷雾电离QTOF-MS获得的基峰色谱图。用这种方法对22种不同来源的大叶冬青进行了测定，所得的相似度分析和主成分分析的结果一致。LC-MS在指纹图谱方面的研究对于中药材质量的检测和控制起到至关重要的作用。随准确。LC-MS技术的推广有利于鉴定一些市场上流通的珍贵药材，以及一些道地药材。通过对中药药代动力学的研究可以更科学更系统地阐明中药组方原理，为研究古方、筛效，中药制剂中成分多样，结构较为复杂，而且含量一般都很低，进入在血浆、胆汁、尿液等体液中的含量往往也很低，采用传统的方法如薄层扫描法、紫法等难以检测，而且体液的组成比较复杂，难以从中获得单一成分。而LC-MS技术只需对样品进行简单预处理或衍生化就能快速测定，因此通过液质联用技术了谢过程和途径，对于阐明中药药理作用的机理，了解中药的毒副作用具有重要意义。中药中存在很多活性成分，以往的技术很难为这些成分在体内的代谢提供准确的数据，而液质联用技术的应用为研究其在体内的吸收、分布、代谢、排泄等以高温电喷雾离子源，采用选择反应监测(SRM)方式，扫描质量范围m/z150~500,发现m/z285.1离子响应稳定、灵敏度高、线性关系良好，可用于定量分析。且姜黄素在大鼠6只，按5mg·g¹测定不同时间点大鼠血浆中的五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的浓度，-时间采用DAS1.0软件拟合，计算其药动学参数。通过大鼠灌胃不同剂量的炒白芍提取物后不同时间点采血，用LC-MS法测定血药浓度，拟合药动学模型并计算相关药动学参数。合有机溶剂萃取法提取含药血浆中的成分。质谱采用多反应监测(MRM)方式进行正离子检测，最后确定该方法可用于血浆中7种人参皂苷了成分的药代动力学研究。马雪琴等[19]将SD大鼠随机分为4组，分别灌胃给予枳实总黄酮提取物、柚皮苷、新橙皮苷、柚皮苷-新橙皮苷，利用葡萄糖醛酸酶对血样进行预处理，采用LC-MS/MS法测定血浆中总苷元柚皮素及橙皮素，间接比较4组中柚皮苷和新橙皮苷的药代动力学。实验表明枳实总黄酮提取物中柚皮苷与新橙皮苷存在相互促进吸收的作用，而枳实总采用负离子模式，实验表明通过静脉注射，肝脏、、肾脏和心脏会有较少量远志素会迅速进入脑组织，因此可以说明远志素可以透过中药的优势就在于它的组方配伍，发挥整体治疗的作用。但传统中药大多都是汤剂，口服吸收虽然相对安全，但生物利用度相对较低。随着中药现代化发成片剂、注射剂等。近年来，中药注射剂的安全问题频频发生，因此对中药制剂的药成功应用于黄连解毒汤正常大鼠体内这3个成分的药动学研究，为中药复方药动学研究提供了可以借鉴的分析方法。邵玉凤等l²2|建立了LC-MS/MS的方法同时测定生脉注射液中人参液中的5种成分的含量。郭文婧等23建立液质联用测定大鼠血清中人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁和五味子醇甲的方法，用于研究生脉方中这3种成分配伍前后药动学行为的差异。实验表明配伍给药后，人参皂苷Rg₁的生物利用度有显著提高，而人参皂苷Rb₁、五味子醇关文献数据对照，共鉴定出17个化合物结构，主要结构类型为：酚类、有机酸类、苯酞类及含氮类化合物，同时对大川芎方中主要化学成分的质谱裂解规律进行了分析找大川芎方的物质溯源提供依据，为中药复方成分的鉴定提供一种快速准确的涛等l²5|建立LC-MS法测定大鼠灌胃黄芩汤后血浆中黄酮类和萜类成分，并研究不芩汤在大鼠体内的药代动力学特征。实验证明本方法能用于血浆中利用LC-MS分析中药中组分和生物系统作用的特征，从而筛选和分析有中药血清药物化学是药效物质基础研究和中药科学化研究的新领域27]。XijunWang等前后样品色谱指纹图谱。在茵陈蒿汤样品中检测到了45个峰，对其中30个进行了结构确证；在大鼠给药血清中检测到了21个色谱峰并全部进行了结构确证。对21个色谱峰的来源进行归属显示：19个为原型药物，2个为代谢产物。结果表明复方丹参片会影响洛沙坦在体内的代谢，这为临床这两个药的联合使用提供依据。曹阳等30用雄性SD大鼠为受试对象，随机分成伊立替康注射液单用组及冰片合用组，不同时间点颈静脉及脑海马部位微透析活体采样，采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法测定大结果表明合用冰片会影响大鼠脑内单胺类神经递质含量，从而明显提高了脑内的药物浓度。随着技术的发展，越来越多的行业使用LC-MS等现代仪器。随着中药现代化的推进，中药领域各方面的研究和发展都或多或少的用到液质联用技术。中药作为现个重要领域，目前研究的主要内容包括从中药中寻找药效物质，这是中药研究的基础，另一重要内容就是对传统中药进行现代科学的阐述。液质联用技术经过十多年的发展，以其灵敏、快速、高效的特点，在对含量低、不易分离得到或缺乏特征紫外吸收的物质的分示了独特的优势，成为现代中药研究中非常重要的一种方[1]吴定慧，陈关键.液质联用技术在中药研究中的应用概述[J].实用中医药杂志，2012,28[2]潘晓丽液质联用技术在中药中的应用[A].中华中医药学会第九届中药鉴定学术会议论[4]李丽，宗晓菲，张慧荣，等.应用液质联用技术分析鉴定防风中一种新色原酮类成分[J].[5]PiwowarskiJP,KissAK.C-glucosidiPharmacopoeia):ChromatographicProfileandStructureDetermination[J].Phytochemical[6]QiJ,XuDR,ZhouYF,etal.NewfeaturesonthefragmentationpatternsofhomoisofinOphiopogonjaponicusbyhigh-performanceliquidchromatography/diode-arraydetection/electrosprayionizationwithmulti-stagetandemmassspectrometry[J].RapidCom[7]LinYN,ZhuDN,QiJ,etal.CharacterizationofhomoregionsofOphiopogonjaponicusandrelatedantioxidantactivity[J].JournalofPharmaceuticaandBiomedicalAnalysis,2010,52(5):757-7[8]聂映，李志裕，姚卫峰.基于液相色谱飞行时间质谱的炒川楝子化学成分分析[J].安徽[9]李文龙.高效毛细管电泳及液质联用技术在中药质量控制过程中的应用[D].青岛：国家[10]刘怡，孟江，陈磊.苦参黄酮类成分HPLC指纹图谱研究[J].中药新药与临床药理，2013,[11]高新彪，孙磊，乔善义，等.牡丹皮HPLC指纹图谱研究[J].中草药，2013,44(7):900-904[12]胡一晨，吉琅，廖晴，等.秦艽花液质联用的指纹图谱研究[J].中国实验方剂学杂志，[13]王丹，张秋燕，徐风，等.中药黄芩HPLC指纹图谱的化学轮廓及其影响因素的研究[J].[14]FanCL,DengJW,YangYY.etal.Multi-ingredientsdeterminationandftime-of-flightmassspectrometry[J].JournalofPharmaceuticalandBiomedicalAnalysis,2013,84:[15]罗文汇，孙冬梅，高华宏，等.LC-MS/MS法测定血浆中姜黄素的血药浓度[J].中国药[16]李惠连，季德，毛春芹，等.LC-MS测定大鼠血浆中五味子的3个木脂素成分及其药动[17]鲍天冬，张英丰，李玉洁，等.LC-MS研究炒白芍提取物中芍药苷在大鼠体内的药代动[18]林力，刘建勋，张颖，等.LC-MS/MS法同时测定犬血浆中7种人参皂苷类成分及其在人参提取物药代动力学研究中的应用[J].世界科学技术—中医药现代化，2012,14(3):[19]马雪琴，李辰，袁林华，等.枳实总黄酮提取物中柚皮苷和新橙皮苷的大鼠药代动力学[20]MaB,LiXT,LiJ,etal.QuantitativeanalysisoftenuifotissueusingLC-MS/MS:Applicationtopharmacokineticandtissuedistributionstudy[J].Journalofpharmaceuticalandbiom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