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文档简介
1实验三唾液淀粉酶活性的观察动物医学院动物生化教研室2掌握酶的催化活性,酶的高效性和特异性了解各种因素(如温度、pH及一些化学物质)对酶活性的影响唾液淀粉酶的制备和活性观察一、实验目的3二、实验原理酶是生物体内具有催化功能的生物大分子,也叫生物催化剂。酶活性:酶的催化能力,用催化化学反应的速度表示酶活性的测定方法:1)定底物2)定时间影响酶活性的因素是多方面的,如温度、pH,激活剂和抑制剂等都会影响酶的催化活性。二、实验原理pH值的影响:能使酶活性达到最高时的pH值,称为该酶的最适pH。温度的影响:在一定温度范围内,随着温度的升高,酶促反应速度增加,直至达到最大值。在一定条件下,能使酶活性达到最高的温度即酶的最适温度。激活剂和抑制剂的影响:
能增高酶活性的物质即称为酶的激活剂,能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的抑制剂。4
本实验以淀粉为底物,淀粉酶作用下得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。用碘液检查酶促淀粉的水解程度,来说明温度、pH及化学物质对酶活力的影响。
淀粉酶
淀粉酶淀粉——————→糊精—————→麦芽糖+少量葡萄糖加碘后;(兰色)(紫红色、暗褐色或红色等)(棕黄色,碘本身颜色)5二、实验原理影响酶活性的因素
1)温度2)pH3)激活剂和抑制剂酶的特性(专一性)
还原糖和斑氏(Benedict)试剂的反应原理
C6H12O6+2Cu(OH)2C5H11O5.COOH+Cu2O+2H2OOH-加热实验原理6三、试剂及器材1.试剂•(1)0.5%(w/v)淀粉溶液•(2)稀碘溶液•(3)不同pH缓冲液(pH5.0、6.8、8.0)•(4)1%(w/v)NaCl溶液•(5)1%(w/v)CuSO4溶液2.器材•比色板、水浴锅、刻度吸管及滴管7四、操作步骤1.温度对酶活力的影响
取3支试管,编号后按下表操作:8试管编号1230.5%淀粉555pH6.8缓冲液0.50.50.5反应条件置冰水浴中置37℃水浴中置沸水浴中稀释唾液111单位:mL在干净的比色板上,于各孔穴中分别滴加2滴碘液。每隔1min从第2支试管中取反应液1滴,与比色板孔穴中的碘液混合,观察颜色的变化。待第2支试管中的反应液与比色板孔穴中的碘液混合后颜色呈棕色时,取出试管,并将在沸水浴中处理的试管用冷水冷却,然后向各试管中滴加碘液1-3滴。摇匀后观察并记录各管颜色,比较各管中淀粉水解的程度,说明温度对酶活性的影响。92.pH值对酶活力的影响取3支试管,按下表编号后进行实验。10四、操作步骤单位:mL试剂1230.5%淀粉222pH5.0缓冲液2——pH6.8缓冲液—2—pH8.0缓冲液——2稀释唾液111摇匀后,将各管置于37℃水浴中处理。(1)每隔1min从pH6.8的试管中取出1滴反应液滴于预先滴加稀碘液的白瓷板上,观察其颜色变化。(2)待颜色呈棕色时,向各管中加稀碘液1-3滴。观察各管颜色,比较各管中淀粉水解的程度,解释pH对酶活性的影响。113.酶反应的特异性取2支试管,按下表编号后进行实验。12四、操作步骤单位:mL试剂120.5%淀粉2—0.5%蔗糖—2稀释唾液11将各管摇匀后,一起放入37℃水浴中保温10min。取出试管,分别加入斑氏试剂1mL,混匀。将各管置于沸水浴中煮沸2-5min。观察并解释结果。134.激活剂与抑制剂对酶活力的影响取3支试管,按下表编号后进行实验。14四、操作步骤单位:mL试剂1230.5%淀粉333pH6.8缓冲液0.50.50.5
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