药物分析黄酮类化合物整

黄酮类理化性质与颜色反应结构与分类生物活性检识与结构测定概述提取、分离黄酮类06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第1页黄酮类化合物广泛分布于植物界中，而且生理活性各种多样，引发了国内外广泛重视，研究进展很快。黄酮类化合物大多含有颜色，在植物体内大部分与糖结合成苷，一部分以游离形式存在。第一节概述06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第2页表黄酮类化合物存在植物编号植物种类芦丁检出部位拉丁名汉字名1Myricananacheval.矮杨梅叶2Fagopyrumesculenlom.荞麦毛状根、果实3Hoveniaacerbalindl.枳根叶4Euphorbiapukherrima.一品红茎、叶5Saussureainvolucrata.新疆雪莲花6CarthamustinctoriusFlowers.红花花7BupleurumchinenseDC.北柴胡全草06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第3页二、结构分类一、基本结构第二节结构与分类06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第4页一、基本结构定义：

泛指两个含有酚羟基苯环（A-与B-环）经过中央三碳原子相互连接而成一系列化合物。

6C－3C－6C06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第5页二、黄酮类化合物结构分类黄酮及黄酮醇类二氢黄酮与二氢黄酮醇查耳酮类异黄酮和二氢异黄酮类橙酮类双黄酮类06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第6页第三节、理化性质与颜色反应一、性状1二、旋光性2三、荧光3四、溶解性4五、酸碱性5六、显色反应606郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第7页

一、性状多为晶性固体，少数为无定形粉末。颜色：与分子中是否存在交叉共轭体系及助色团类型、数目及取代位置相关。黄酮、黄酮醇及其苷类——灰黄~黄色查耳酮——黄~橙黄色二氢黄酮及醇、异黄酮——不显色或微黄色06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第8页二、旋光性（1）游离各种苷元母核中，除二氢黄酮（醇）、黄烷（醇）有旋光性外，其余无光学活性。（2、3位无双键时，含有旋光性）（2）苷类含有糖分子，均含有旋光性，普通为左旋。06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第9页

三、荧光荧光

C3-OH在紫外光下有强烈

（亮黄色或亮绿色）。

C3-OH成苷后荧光减弱06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第10页

四、溶解性黄酮苷元——难溶或不溶于H2O

易溶MeOH、EtOH等溶剂易溶稀碱液黄酮苷——易溶于水、MeOH、EtOH等溶剂（苷元引入—OH多，则水中溶解度大）06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第11页

五、酸碱性

分子中多Ar-OH——显酸性（可溶于碱性水溶液、吡啶等溶剂中）因为Ar-OH数目、位置不一样，酸性强弱也不一样酸性碱性

-吡喃酮环上1-位氧原子，因有未共用电子对——显微弱碱性——可与强无机酸（H2SO4、HCl）等生成盐。06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第12页六、显色反应1.盐酸-镁粉（或锌粉）反应2.四氢硼钠（钾）反应3.铝盐4.铅盐5.锆盐06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第13页六、显色反应6.镁盐7.氯化锶（SrCl2）8.三氯化铁反应9.硼酸显色反应10.碱性试剂显色反应06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第14页第四节、生物活性Vp样作用：芦丁、橙皮苷等有Vp样作用，能降低血管脆性及异常通透性，可用作防治高血压及动脉硬化辅助治疗剂。

一、对心血管系统作用

二、抗肝脏毒作用

（+）-儿茶素(catergen)也可抗肝脏毒作用，治疗脂肪肝及因半乳糖胺或四氯化碳等引发中毒性肝损伤。三、抗炎

芦丁及其衍生物羟乙基芦丁、二氢槲皮素等具抗炎作用。

四、抗菌及抗病毒作用

如木樨草素、黄芩苷、黄芩素五、解痉作用

异甘草素、大豆素：解除平滑肌痉挛；06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第15页六、雌性激素样作用

大豆素(daidzein)等异黄酮含有雌性激素样作用，可能与它们与己烯雌酚结构类似。

七、去除人体自由基作用

黄酮类化合物多含有酚羟基，易氧化成醌类而提供氢离子，故有显著抗氧特点。另外还有降血脂、血糖，抗动脉粥样硬化及抗癌抗突变等作用。

第四节、生物活性06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第16页第五节、检识与结构测定一、紫外光谱（UV）二、核磁共振—1H-NMR三、核磁共振—13C-NMR四、质谱（MS）06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第17页（一）紫外光谱（UV）

黄酮类化合物结构中交叉共轭体系苯甲酰基系统桂皮酰基系统

(benzoyl)(cinnamoyl)BandIIBandI220~280nm300~400nm06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第18页

带II(240-285nm)（苯甲酰系统）带I(300-400nm)桂皮酰系统类型说明

250-285304-350黄酮类

-OH越多，带I带II越红移

B环3’,4’有-OH基，带II为双峰（主峰伴肩峰）328-357黄酮醇类(3-OR)

352-385黄酮醇类(3-OH)

245-270270-295300-400异黄酮类二氢黄酮（醇）B环上有-OH,OCH3对带I影响不大

220-270340-390或340-390(Ia)300-320(Ib)查耳酮类查耳酮2’-OH使带I红移影响最大370-430(3-4个小峰)橙酮类

06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第19页

1.A环质子2.B环质子

3.C环质子4.糖端基碳上质子

5.乙酰氧基上质子

6.甲氧基上质子（二）1H-NMR06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第20页（二）1H-NMR黄酮、黄酮醇、异黄酮二氢黄酮、二氢黄酮醇1.A环质子7-羟基黄酮类6.70~7.00d6.30~6.40d7.90~8.20d7.70~7.90d6.70~7.10dd6.40~6.50dd06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第21页（三）13C-NMR1.骨架类型判断2.取代图式确实定方法3.氧糖苷中连接位置4.双糖苷及低聚糖苷中苷键及糖连接次序13C-NMR在黄酮类化合物结构分析中应用06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第22页（三）13C-NMR

1.骨架类型判断依据中央三个碳信号位置、裂分等，推断其骨架类型。06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第23页（四）MS

大多黄酮苷元在电子轰击质谱（EI-MS）中，可取得分子离子峰（基峰）。（除——极性强、难气化及对热不稳定化合物可制备成甲基化或三甲基硅烷化衍生物）现在可应用FD-MS（场解析电离）、FAB-MS（快速原子轰击电离）、ESI-MS（电喷雾电离）等软电离质谱技术，可防止制备衍生物。质谱在黄酮类结构测定中应用06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第24页（四）MS路径-II黄酮类化合物两种基本裂解路径路径-I（RDA裂解）06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第25页（四）MS黄酮类——路径I或II——碎片深入减-CO——离子黄酮醇——路径II（主要）——减-CO——离子

两种基本裂解路径是相互竞争，相互制约。路径-I与路径-II得到碎片离子丰度互成反比。即若一个路径碎片离子丰度强，则另一个路径碎片离子丰度就弱。06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第26页第六节、提取、分离方法——溶剂萃取方法——碱提酸沉方法——离子交换A极性C解离性B酸性D方法——炭粉吸附法(主要适合用于苷类成份精制)一、提取06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第27页

一、提取1.溶剂萃取法06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第28页

一、提取1.溶剂萃取法06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第29页

一、提取2.碱提取酸沉淀法比如：芦丁提取06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第30页

一、提取3.离子交换树脂法注意：应用此法主要目标是除杂质。06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第31页

一、提取4.炭粉吸附法06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第32页二、分离方法——吸附、分配色谱方法——pH梯度萃取方法——金属盐络合A极性C特殊结构B酸性06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第33页

二、分离1.柱色谱法（1）硅胶柱色谱

出柱先后次序：

①若母核结构相同，而-OH取代数目不一样，则-OH多后出柱②易形成份子内氢键-OH，其极性变小先出柱如：邻二-OH>间二-OH（Rf值）③普通出柱次序：苷元>单糖苷>双糖苷>多糖苷06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第34页

二、分离1.柱色谱法（2）氧化铝柱色谱

通常情况下，要求在分子结构中无酸性基团，或Ar-OH被甲基化。

（3）纤维粉柱色谱

其分离原理同纸层色谱。06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第35页二、分离1.柱色谱法（4）聚酰胺柱色谱

聚酰胺（Polyamide）是由酰胺聚合而成一类高分子物质。商品名——绵纶、尼龙。原理：——氢键吸附学说聚酰胺分子内有很多酰胺键，可与酚类、酸类、醌类、硝基化合物等形成氢键，因而对这些物质产生了吸附作用。06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第36页二、分离1.柱色谱法（4）聚酰胺柱色谱聚酰胺吸附物质原理以下列图：06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第37页二、分离1.柱色谱法（5）葡聚糖凝胶柱色谱葡聚糖凝胶（Sephadexgel）用于黄酮类化合物分离，主要有两种型号：

Sephadex-G型SephadexLH-20型（羟丙基葡聚糖凝胶）06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第38页二、分离1.柱色谱法（5）葡聚糖凝胶柱色谱

作用机理：分离游离黄酮时——吸附作用

（取决于游离Ar-OH数目，

Ar-OH少则先出柱）分离黄酮苷是——分子筛起主导作用

（分子量大先出柱）06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第39页二、分离2.pH梯度萃取法

适合用于酸性强弱不一样黄酮苷元分离。06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第40页二、分离3.铅盐沉淀法

依据分子中一些特定官能团进行分离。06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第41页第七节、实例芦丁！作用与用途1、抗炎作用：大鼠腹腔注射，对植入羊毛球发炎过程有显著抑制作用。本品硫酸酯钠(Sod.rutinsulfate)对大鼠热浮肿有很强抗炎作用。

2、维生素P样作用，含有维持血管抵抗力、降低其通透性、降低脆性等作用，对脂肪浸润肝有祛脂作用，与谷胱甘酞适用祛脂效果更显著。3、抗病毒作用：200μg/ml浓度时，对水疱性口炎病毒有最大抑制作用。

4、抑制醛糖还原酶作用：10-5M浓度时抑制率为95%。这作用有利于糖尿病型白内障治疗。

5、毒性：小鼠静脉注射LD50950mg/kg。

6、临床：用于防治脑溢血、高血压、视网膜出血、紫瘢和急性出血性肾炎。治疗慢性气管炎，有效率84.8%和98%。本品衍生物三羟乙芸香甙(troxerutin)，即维路通，临床用于治疗烧伤、关节炎及各种血管疾病，国外已经有商品出售。国内亦已研究成功，治脑血管病有效率87.8%，治视网膜水肿和出血有效率88%。06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第42页第七节、实例芦丁！06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第43页第七节、实例【药品名称】银杏叶片，依康宁【成

分】银杏叶提取物【性

状】本品为薄膜衣片，除去包衣后显浅棕黄色至棕褐色，味微苦。【功效主治】

活血化瘀通络，用于瘀血阻络引发胸痹心痛、中风、半身不遂，舌强语謇；冠心病稳定型心绞痛、脑梗死见上述证候者。【使用方法用量】

口服，一次2片，一日3次：或遵医嘱。【规

格】

每片含总黄酮醇苷9.6mg，萜类内酯2.4mg。【贮

藏】

密封。【包

装】

铝塑包装，每板12片，每盒2板；每板12片，每盒3板。【有效期】

2年。【适应症】活血化瘀通络。用于瘀血阻络引发胸痹心痛、中风、半身不遂、舌强语謇；冠心病稳定型心绞痛、脑梗死见上述证候者。银杏叶片！06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第44页第七节、实例【临床应用】

1.小儿呼吸道感染

2.急性菌痢

3.病毒性肝炎

4.疖疔、外痈、蜂窝组织炎、深部脓肿

5.急性胰腺炎黄芩！06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第45页第七节、实例[物理性状]：二水合物为黄色针状结晶（稀乙醇），在95-97°C成为无水物，熔点314°C（分解）。1g溶于290ml无水乙醇，23ml沸乙醇，溶于冰醋酸，碱性水溶液呈黄色，几乎不溶于水，乙醇溶液味很苦。[植物起源]：壳斗科植物伊比利亚栎Quercusiberica皮和叶，小檗科植物红八角莲Dysosmaveitchii(Hemsl.etWils.)Fu，金丝桃科植物红旱莲（湖南连翘）HypericumascyronL.全草，夹竹桃科植物红麻ApocynumlancifoliumRus.叶。[作用与用途]：本品含有很好祛痰、止咳作用，并有一定平喘作用。另外还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、降低毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉，增加冠脉血流量等作用。用于治疗慢性支气管炎。对冠心病及高血压患者也有辅助治疗作用。小鼠口服LD50为160mg/kg。槲皮素！06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第46页第七节、实例槲皮素！06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第47页黄酮类化合物与DNA传感器基于黄酮类化合物与DNA相互作DNA电化学传感器研究胡冷芝

用电化学方法研究了槲皮素与鲑鱼精DNA相互作用,确定了配合物与:DNA作用方式为静电作用。以槲皮素为杂交指示剂,利用共价键正当制备了DNA修饰玻碳电极并制成了DNA电化学传感器,能有效识别与探针ssDNA互补ssDNA片断,含有良好选择性和灵敏性,检测靶ssDNA线性范围为4.90×10-8～2.43×10-7mol·L-1,检测限为1.32×10-8mol·L-1。

用带有羧基多壁碳纳米管(MWCNTs-COOH)修饰玻碳电极,将5’端氨基修饰核苷酸经过羧基共价固定在碳纳米管上,电活性(2R-2H)Mn作为杂交指示剂,制备了一个新奇、灵敏DNA电化学传感器。该传感器检测靶ssDNA线性范围为1.60×10-9～4.80×10-8mol·L-1,检测限为1.0×10-9mol·L-1。06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第48页黄酮类化合物与DNA传感器

经过试验结果比较能够得到槲皮素合铺配合物与DNA相互作用能力大于槲皮素本身与DNA相互作用能力，即与稀土元素配合后，槲皮素药效会更强。黄酮类化合物及其配合物与DNA相互作用研究卓琳

06郑梅霞药物分析黄酮类化合物整第49页黄酮类化合物与DNA传感器

槲皮素对抗坏血酸含有很好催化氧化效果。在pH4.0缓冲溶液中加入一定浓度抗坏血酸，会观察到显著催化现象，氧化峰逐步增大，还原峰逐步减小。在3.1×10-5