安宫牛黄丸对脓毒症大鼠血浆内毒素水平的影响

1、安宫牛黄丸对脓毒症大鼠血浆内毒素程度的影响【摘要】目的讨论安宫牛黄丸对盲肠结扎穿孔LP法所致脓毒症大鼠血浆内毒素程度的影响。方法取雄性SD大鼠90只，随机分为5组，分别为空白对照组、模型对照组、安宫牛黄丸低剂量组、中剂量组、高剂量组。各组动物于手术前禁食12h，采用盲肠结扎穿孔法LP复制脓毒症模型，中药组每只大鼠分别于术前0.5h和术后6h按1.0，2.0，3.0g/kg的剂量灌胃安宫牛黄丸，空白对照组和模型组动物灌胃饮用水。于术后24h，动物腹腔采血以终点显色鲎试验法测定血浆内毒素程度，另外取动物肺脏匀浆测定肺组织髓过氧化物酶P含量。结果模型组血浆内毒素程度明显高于空白对照组，而安宫牛黄丸低

2、、中剂量组内毒素程度均显著低于模型组P0.01。模型组肺组织P含量明显高于空白对照组，而安宫牛黄丸低、中剂量组肺组织P含量均显著低于模型组P0.05和P0.01。结论安宫牛黄丸具有降低脓毒症大鼠血浆内毒素程度和肺脏P含量的作用，提示安宫牛黄丸对脓毒症具有一定的干预作用，为进一步讨论安宫牛黄丸治疗脓毒症的作用机理提供了药效学基矗【关键词】安宫牛黄丸；脓毒症；盲肠结札穿孔；内毒素；髓过氧化酶；鲎试验脓毒症Sepsis是严重创烧伤、休克、外科大手术后常见的并发症，是由各种致病性微生物包括细菌、病毒、真菌等侵入人体而引起的具有损伤性引起多器官损伤的剧烈全身炎症反响，其本质上是一个失控的全身自我破坏性炎

3、症反响过程1。脓毒症旧称败血症属于中医温热病范畴，是由于火毒炽盛、正气亏虚，正不胜邪、邪毒内陷，客入营血所致，热毒伏于血脉，弥漫三焦，内及脏腑，直犯神明，而本钱玻安宫牛黄丸出自我国清代著名温病学家吴鞠通著作?温病条辨?，方由牛黄、犀角、黄连、黄芩、栀子、郁金、麝香、珍珠、朱砂、雄黄、冰片等11味中药组成，具有清热解毒、芳香辟秽、开窍通闭之成效，对温病有独特的疗效，是中医治疗温热病的温舶三宝之一，也是中医危重病症急救要药。本实验根据安宫牛黄丸的主治成效，通过观察安宫牛黄丸对脓毒症大鼠血浆内毒素程度和肺组织髓过氧化酶P含量的影响，以提醒安宫牛黄丸对脓毒症的干预作用，为进一步讨论安宫牛黄丸治疗脓毒症

4、的作用机理提供一定基矗1材料与方法1.1动物模型的制备安康雄性SD大鼠，体质量180220g。在ihteran2报道方法的根底上进展改进，复制腹腔感染型脓毒血症。术前禁食12h，用10水合氯醛按15l/kg的剂量，腹腔注射麻醉大鼠，常规消毒腹部，在下腹部正中央切口，长约2，翻开腹腔寻找盲肠，小心别离其远端与大肠的系膜，盲肠内如有粪便，那么把粪便小心挤向相连的大肠，寻找盲肠与小肠及大肠交界处，用灭菌4号丝线环形结扎，结扎完毕后应仔细检查，保持肠道通路正常。在与肠系膜相对的盲端肠壁浆膜面用9号针头穿刺两次，两个针孔相距约3，第1针孔距盲端约3，同时在第2针孔处放置一条宽2的橡胶引流片，防止伤口愈合

5、，轻轻将肠子放回原处，关闭腹腔，逐层缝合。术后即刻皮下注射生理盐水，补充手术过程中体液的丧失，剂量1l/100g体质量。1.2动物分组与给药安康雄性SD大鼠90只，体质量180220g，购至广东省医学实验动物中心。将动物随机分为5组，分别为空白对照组n=10、模型对照组n=20、安宫牛黄丸低剂量组n=20、安宫牛黄丸中剂量组n=20和安宫牛黄丸高剂量组n=20。给药组每只大鼠分别于术前0.5h和术后6h按1.0，2.0，3.0g/kg的剂量灌胃安宫牛黄丸，空白对照组和模型组动物灌胃等量饮用水。1.3标本的采集和处理无菌状态下腹主动脉采血，用肝素钠抗凝，3000r/in离心15in，取血浆于-2

6、0保存。无菌状态下，取肺组织200g，参加1.8l生理盐水在冰浴下匀浆，3000r/in离心15in，取上清液。1.4指标检测方法血浆内毒素检测采用鲎试剂合成基质偶氮显色法试剂盒购于厦门市鲎试剂实验厂；肺组织P活力检测采用酶学分光光度法测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所。1.5统计学处理应用SPSS11.5统计软件包进展统计分析，数据以s表示，采用t检验和方差分析。2结果2.1安宫牛黄丸对大鼠血浆内毒素含量的影响与空白对照组比拟，脓毒血症模型组动物血浆内毒素含量显著高于空白组P0.01。而安宫牛黄丸低剂量组和中剂量组血浆内毒素含量显著低于模型组P0.01，安宫牛黄丸高剂量组虽然也有降低血浆内

7、毒素含量的趋势，但与模型对照组比拟没有显著性差异P0.05。结果见表1。表1安宫牛黄丸对大鼠血浆内毒素含量的影响(略2.2安宫牛黄丸对大鼠肺组织P活力的影响与空白对照组比拟，脓毒血症模型组动物肺组织P活力显著高于空白对照组P0.05。而安宫牛黄丸低剂量组和中剂量组肺组织P活力显著低于模型组P0.05和P0.01，安宫牛黄丸高剂量组虽然也有降低肺组织P活力的趋势，但与模型组比拟没有显著性差异P0.05。结果见表2。表2安宫牛黄丸对大鼠肺组织P活力的影响(略3讨论脓毒血症是指各种致病微生物或其毒素存在于血液或组织中，是机体对感染的一种全身性炎症反响SIRS，是严重感染、重度创伤、大手术后、重型急性

8、胰腺炎和休克等常见的并发症，进一步开展可导致感染性休克、急性呼吸窘迫综合征ARDS和多器官功能障碍综合征DS3。转贴于论文联盟.ll.内毒素是革兰氏阴性菌的细胞壁的主要成分。研究说明，内毒素是脓毒症的主要触发剂4。目前研究认为，细菌因子在脓毒症的致病过程中起了非常重要的作用，SIRS是脓毒症的重要生理病理变化5。内毒素其主要化学成分为脂多糖LPS是革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分。内毒素的生物学效应主要表现为介导作用，它可在细菌繁殖过程中或菌体破裂后分泌出来，巨噬细胞、内皮细胞、单核细胞、平滑肌细胞和嗜中性细胞是内毒素的靶细胞，在被激活后释放内源性介质如细胞因子等。细胞因子在细胞内的主要功能是改变

9、基因表达，其方式有4种：激活“沉默基因、上调基因表达、下调基因表达和关闭基因表达，从而调节炎性反响。LPS激活巨噬细胞，释放3种介质即蛋白质、反响性氧基和脂质。蛋白质包括TNF-，INF-，IL-1，IL-6，IL-8，IL-12等。LPS的生物效应能被TNF-所模拟，可认为TNF-是内毒素血症的主要细胞因子。在低浓度时，TNF-具有防御感染的作用，是白细胞和内皮细胞活性和功能的调节者。高浓度时，如在SIRS和脓毒血症病人，起有害作用可引起脓毒症性休克。TNF-受体的表达非常广泛，几乎出现于所有的细胞上。IL-1和1L-6也可由TNF-诱导产生，是强有力的内源性致热源。内毒素引起的+2、H-和

10、N能进步巨噬细胞和中性白细胞的杀菌才能，但也引起过度的炎性反响。内皮细胞来源的N是强有力的血管扩张剂，当产生过量时会导致休克的发生和开展。巨噬细胞受LPS刺激时，多种脂类介质释放出来。例如：血小板激活因子PAF、PGE2、白三烯4等，这些脂类介质参与了ARDS的形成，而后者经常伴有脓毒症的发生6。在本实验中，脓毒血症模型组大鼠血浆内毒素的含量与空白对照组比拟显著增高P0.01，这有利于证实内毒素可能是脓毒血症的触发剂。而安宫牛黄丸低剂量、中剂量组与模型组比拟，其血浆内毒素含量显著降低P0.01，这说明安宫牛黄丸可以减少脓毒血症动物内毒素的释放，为进一步讨论安宫牛黄丸治疗脓毒血症的机制奠定了一定

11、的基矗髓过氧化物酶7，8P是中性粒细胞PN特有的复原酶，它主要存在于PN的嗜天青颗粒中，且每个细胞所含酶的量是恒定的，约占细胞干重5，故可以通过组织P活性来定量测定PN的数目，肺组织中P活性上下可定量反映PN扣押与聚集的程度。导致实验性脓毒症大鼠肺组织中便有PN浸润，应与肺脏特殊的解剖学和生理学特点有关，因为肺脏不仅是一个重要的代谢器官，同时又是全身静脉血液的滤过器官，各组织脏器所产生并释放到血液中的代谢产物、活性物质都要从肺脏经过，且肺脏毛细血管分支较少，血管长，灌注压低，血流缓慢，流经肺毛细血管活化的PN易与内皮细胞接触并粘附，在粘附后不易被缓慢的血流冲走，因此PN易于聚集于肺脏。而肺组织

12、活化的中性粒细胞经脱颗粒作用，释放弹性蛋白酶、髓过氧化物酶和金属酶等多种蛋白酶，分解胞外纤维与基质，可导致肺组织损伤9。因此髓过氧化物酶活性的上下在一定程度上可以反映肺组织的损伤程度，从实验结果显示，安宫牛黄丸低、中剂量可以降低肺组织髓过氧化物酶的活性，在一定程度上减轻脓毒症对肺组织的损伤。本实验结果显示，安宫牛黄丸可以降低脓毒症大鼠血浆内毒素程度，同时可以降低脓毒症肺组织中P的活性，这说明安宫牛黄丸对脓毒症大鼠具有一定的干预作用，为进一步讨论安宫牛黄丸治疗脓毒症的作用机理提供了一定的基矗【参考文献】1Levy,FinkP,arshallJ,etal.2001S/ESI/AP/ATS/SISi

13、nternatinalSepsisDefinitinsnfereneJ.ritareed，2022，31:1250.2ihteranKA.Sepsisandseptishk:arevieflabratryethdsandaprpsalJ.SurgRes，1980，29:189.3任成山.脓毒症的发病机制J.中国急救医学，2022，25(10):748.4HEithanTH,BrueK,Dabid,etal.Pst-injuryultiplerganfailure;therlefthegutJ.shk,2001,15:1.5JnesGR.ThesysteatiinflaatryrespnsesyndreasapreditrfbateriaandutefrsepsisJ.QJed,1997,89:515.6Adrie.TheinflaatrybalaneinhuansepsisJ.Intensareed,2000,26:364.7王明海，张又胜，赵国海.等.实验性大鼠重症急性胰腺炎早期肺组织DA、P的变化J.皖南医学院学报，2022，