cw2104金牌超量无内毒素质粒大提试剂盒

1、4006-222-360订购：订购邮箱：o订购：版本号：06/2015GoldHi EndoFree Plasmid Maxi Kit金牌超量无内毒素质粒大提试剂盒目录号：CW2104条件：室温（15-25）。保存条件：室温（15-25）。组分说明Size10 preps2 prepsBuffBuff12125 ml125 ml125 ml30 ml50 ml30 ml21 ml1010102030 ml30 ml30 ml5 ml10 ml10 ml500 l2224Buffer E3BuffBuffSW (concentrate)Endo-Free Buffer EBRNase A (10

2、 mg/ml)PgerEndo-Remover FilterSpin Column CX Collection Tube本产品科研使用，用于临床及其他用途产品简介内毒素是质粒提取中常见的污染物，由于真核细胞对内毒素非常敏感，因此，如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。本试剂盒提供一种简单快捷高效提取无内毒素质粒的新方法，在碱裂解法裂解细胞的基础上，采用独特的硅基质膜吸附技术，高效专一的结合质粒DNA；同时采用特殊的缓冲液系统和除内毒素过滤器，有效去除内毒素、 组DNA、RNA、蛋白等杂质。本试剂盒所得质粒纯度高、提取量大，特别适用于细胞转染，同时也可用于DNA等实验。，PCR，体外转

3、录，内切酶消化试剂盒说明样本量得率洗脱体积实验时间提取方式100-300 ml 菌液200 g-2.6 mg1-3 ml1-1.5 小时柱式自备试剂：无水乙醇、异丙醇。实验前准备及重要注意事项1所有组分可在干燥、室温（15-25）环境稳定保存1年，更长时间保存可置于2-8。加入RNase A的Buff1 置于2-8可稳定保存6个月。2第一次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buff1 中，混匀，置于2-8保存。3第一次使用前应按照试剂瓶的说明在BuffW中加入无水乙醇。4使用前请先检查Buff2 和Buffer E3是否出现结晶或沉淀，结晶或沉淀现象，可在37水浴几分钟，即可恢复澄清。5注

4、意Buff2和Buffer E3含有刺激性物质，请戴手套操作，使用后应立即盖紧盖子。6实验前使用BuffS处理吸附柱，可最大限度的激活硅基质膜，提高质粒得率。7使用BuffS处理过的吸附柱最好立即使用，避免放置时间过长影响使用效果。提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等关。所有离心步骤均可在室温下进行。有1操作步骤1取150 ml（根据培养菌体的浓度选择合适的量，建议最多不超过300 ml）过夜培养的菌液，加入离心管（自备）中，12,000g离心2-3分钟收集细菌，尽量吸弃全部上清。注意：质粒拷贝数较低或10 kb时，可以使用菌液通过二次离心将菌体沉淀收集到同一个离

5、心管中，同时后续所加试剂Buffer P1、P2及E3的量需加倍。所加试剂的量必须能够充解菌体，菌体过多、裂解不充分都会降低质粒的提取效率。2向留有菌体沉淀的离心管中加入12 ml Buff1（请先检查是否已加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮细菌沉淀。注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，使提取量和纯度偏低。3向离心管中加入12 ml Buff2，温和地上下颠倒混匀6-8次，使菌体充解，室温放置3-5分钟。此时溶液应变得粘稠。注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免造成组DNA污染。如果溶液未变得，提示可能菌量过大，裂解不彻底，应减少菌体量。4向离心管中加入12 ml

6、Buffer E3，立即上下颠倒混匀6-8次，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。12,000g离心10分钟，将上清全部倒入除内毒素过滤器（Endo- Remover Filter）中，慢慢推动推柄（P ger）过滤，滤液收集在干净的50 ml离心管（自备）中。注意：Buffer E3 加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。向滤液中加入0.3倍滤液体积的异丙醇(加入异丙醇过多容易导致RNA污染)，上下颠倒混匀。柱平衡：向已装入收集管（Collection Tube）中的吸附柱（Spin Column CX）中加入2 ml Buff收集管中。S，12,000 g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将

7、吸附柱重新放回7将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱（已装入收集管）中。86,000-12,000g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。注意：吸附柱的最大容积为15 ml，所以第7步中所得溶液分4-5次过柱。9向吸附柱中加入10 ml BuffW（请先检查是否已加入无水乙醇），6,000-12,000g离心2分钟，倒掉收集管中的废液。重复步骤9。将吸附柱重新放回收集管中，12,000g离心5分钟，倒掉废液，将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。2注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。为确保下游实验不受

8、残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。12.将吸附柱置于一个新的收集管中，向吸附膜的中间部位加入1-3 ml Endo-Free Buffer EB，室温放置2-5分钟，12,000g离心5分钟，将质粒溶液收集到收集管中。-20保存质粒。注意：1）为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5分钟，12,000g离心5分钟。Endo-Free Buffer EB在65-70水浴预热，适当延长吸附和洗脱的时间，可以增加提取效率。2）洗脱液的值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其值在7.0-8.5范围内（可以用NaOH将水的 值调到此范围），值低于7.0会降低洗脱效率。洗脱缓冲液体积不应少于1 ml，体积过小影响回收效率。相关产品信息3订购：4006-222-360o技术支持：产品分类应用产品名称普通质粒提取常规实验操作（如PCR，酶切，转化等）CW0511 快速质粒小提试剂盒CW0509 酵母质粒提取试剂盒质粒提取常规实验操作（转染常规的传代细胞）CW0500度质粒小提试剂盒CW0502度质粒中提试剂盒CW0503度质粒