中药滇重楼抗肺腺癌细胞活性成分研究

1、独蒜兰的化学成分研究刘新桥1，高文远1*,王书军1天津大学药物科学与技术学院，天津大学，天津，300072摘 要：目的 研究独蒜兰pleione bulbocodioides假鳞茎中的化学成分。方法 利用正相硅胶柱层析、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、反相制备色谱等手段进行分离纯化，并通过1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS等波谱技术进行结构鉴定。结果 从乙酸乙酯层中分离得到了8 个化合物，分别鉴定为Shanciol F (), 四羟基苯乙酸甲酯(), kayaflavone (), coelonin (), 对羟基苯甲醛(), 对羟基苯甲酸(), bulbocol () ,.

2、gymconopinD(VIII)。结论 化合物、VIII为首次从该属植物中分离得到。关键词：独蒜兰；化学成分；酚类化合物；黄酮类化合物；Chemical constituents from pleione bulbocodioidesliuxinqiao1, Gao Wenyuan1*，Wang Shujun1College of Pharmaceuticals and Biotechnology, Tianjin University, Tianjin, 300072Abstract: Objective To study the chemical constituents from th

3、e rhizoma of pleione bulbocodioides Methods The compounds were isolated by column chromatography with silica gel、 Sephadex LH-20 and ODS-HPLC. The structures were identified by means of NMR and MS analysis (1H-NMR, 13C-NMR, ESI-MS). Results Eight compounds were isolated from the EtOAc extract in the

4、 rhizoma of pleione bulbocodioides. Their structures were identified as Shanciol F (), methyl (4-OH) phenylacetate(), kayaflavone (), coelonin (), 4-hydroxybenzaldehyde (), 4-hydroxybenzoic acid (), bulbocol () ,. gymconopinD(VIII)。 Conclusion Compounds、VIII was isolated from the plants of pleione b

5、ulbocodioides for the first time. Key words: pleione bulbocodioides; chemical constituents; Phenol ic Compounds;flavoloids 独蒜兰pleione bulbocodioides（Franch.）Rolfe为兰科植物独蒜兰的干燥假鳞茎，是中药山慈菇的来源之一，其性甘、微辛，凉，具有清热解毒、化痰散结的功效，主要用于痈肿疔毒、瘰疬痰核，淋巴结结核，蛇虫咬伤等症1。20世纪90年代期间对其化学成分研究的较多，主要以酚类在分为主2,3，本实验主要对其化学成分进行深入研究，并为寻找抗肿

6、瘤活性成分打下一定的基础。目前已从乙酸乙酯层中分离得到了8个化合物，分别鉴定为Shanciol F (), 四羟基苯乙通讯作者 * 高文远，Tel：(022)87401895,E-mail：酸甲酯(), kayaflavone (), coelonin (), 对羟基苯甲醛(), 对羟基苯甲酸(), bulbocol () ,. gymconopinD(VIII)。其中化合物、VIII为首次从该属植物中分离得到。 1 仪器、药材及试剂柱色谱硅胶和薄层硅胶（青岛海洋华工厂）；Sephadex LH-20 (Pharmacia)；NMR用VARIAN INOVA 500MHz核磁共振波谱仪；制备H

7、PLC（日本丰光公司，Pu-1580 intelligent HPLC Pump；RI-1530 intelligent RI detector）；独蒜兰pleione bulbocodioides（Franch.）Rolfe于2005年8月购自安国，经天津大学药物科学与技术学院高文远教授鉴定为独蒜兰pleione bulbocodioides（Franch.）Rolfe的干燥假鳞茎。2 提取与分离取独蒜兰的干燥假鳞茎35 kg，粉碎，用体积分数为95% 和体积分数为60%乙醇分别回流提取2次，每次3 h，合并滤液，减压回收得乙醇浸膏，加入适量水混悬，分别用石油醚、乙酸乙酯和水饱和正丁醇进行萃

8、取，得石油醚萃取物350 g,乙酸乙酯萃取物500 g, 正丁醇萃取物1.5 kg。取乙酸乙酯提取物500 g，加硅胶适量拌样，进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，根据薄层色谱分析，合并组分相同的流分，再经反复硅胶柱层析和Sephadex LH-20、ODS-HPLC反复纯化，得到了化合物（15mg）、（12mg）、（58mg）、（13mg）（17mg）、（13mg）、（9mg）；（11mg）。3. 结构鉴定化合物： 白色粉末，1H NMR(MeOD): 8 7.99 (1H, d, J=8.5Hz, H-5), 6.90 (1H, d, J=1.5 Hz, H-2), 6.80

9、(1H, dd, J=8.5 Hz, J=1.5Hz, H-6), 6.74 (1H, d, J=8.5 Hz, H-5), 6.62(1H,br.s,H-6), 6.61 (1H, d, J=2.5Hz, H-8), 6.54(1H,s,H-3), 5.64(1H, d, J=3.0Hz, H-11), 3.85(1H, m, H-13), 3.84(3H, overlap,4-OMe), 3.80(3H, s,3-OMe), 3.60(1H, dd, J=11.0 Hz, J=9.0Hz, H-13), 3.46(1H, m, H-12), 2.58-2.68 (4H, m, H-9 an

10、d H-10)。13C NMR(MeOD): 8: 159.4 (C-4), 158.2(C-2), 155.0 (C-7), 147.8 (C-3), 146.0 (C-4), 139.1 (C-8a), 136.4 (C-5a), 134.5 (C-10a, 129.0 (C-5), 125.0 (C-1), 117.9 (C-6), 116.8 (C-1), 115.5 (C-4a),115.0 (C-5), 113.8 (C-8), 112.5 ( C-6), 108.9 (C-2), 92.7(C-3), 87.5 (C-11), 63.8 (C-13), 55.2 ( 3-OMe)

11、, 55.0 ( 4-OMe), 53.5 (C-12), 29.7 (C-10), 26.7 (C-9).以上数据与文献3对照基本一致，确定化合物为Shanciol F。化合物：淡黄色油状物，1H NMR ( CDCl3): 7.12 (2H,d, J=8.5 Hz, H-2, H-6),6.75 (2H , d, J=8.5 Hz, H-3, H-5), 3.80 (3H, s ), 3.60 (2H,s ).13C-NMR ( CDCl3): 173.20 (Ar-CH2-COOH), 155.16 (C-4), 130.68 (C-2, C-6), 126.01 (C-1), 115.

12、78 (C-3, C-5), 52.40 (OCH3), 40.51(Ar-CH2-COOMe). ，以上数据与文献4对照基本一致，确定化合物为四羟基苯乙酸甲酯化合物：淡黄色色粉末 1H NMR (DMSO-d6) 13.22 (1H, s, OH-5), 12.92 (1H, s, OH-5), 10.82 (1H, s, OH-7), 8.19 (1H, J =8.5 Hz, H-6), 8.07 (1H,d, J =2 Hz, H-2), 7.62 (2H, d, J =9.0 Hz, H-2, H-6), 7.36(1H, d, J =9.0 Hz, H-5), 6.95 (1H, s

13、, H-3), 6.93 (2H, d, H-3, H-5 ), 6.92 (1H, overlap, H-3), 6.68 (1H, s, H-6),6.48 (1H, br.s, H-8), 6.19 (1H,br.s, H-6), 3.84 (3H, s, OMe-7), 3.78 (3H, s, OMe-4), 3.75 (3H, s, OMe-4); 13C NMR (DMSO-d6) 182.33 (C-4), 181.77 (C-4), 164.19 (C-7), 163.47 (C-2), 163.24 (C-2), 162.62 (C-7), 162.31 (C-4), 16

14、1.46, 161.42 (C-5, C-5), 160.32(C-4), 157.39 (C-8a), 153.46 (C-8a), 130.82 (C-2),128.35 (C-6), 127.91 (C-2), 122.71, 122.63 (C-1, C-1),121.19 (C-3), 114.54 (C-3), 111.78 (C-5), 104.61 (C-8), 104.11 (C-4a), 103.77 (C-4a), 103.77, 103.21 (C-3,C-3), 98.88 (C-6), 95.57 (C-6), 94.11 (C-8), 56.50, 55.96,

15、55.50 (3* -OMe); 以上数据与文献报道5对照基本一致，确定化合物为kayaflavone。化合物：淡黄色油状物，1H NMR(MeOD): 8 7.99 (1H, d, J=9.2Hz, H-5), 6.61 (2H,m, H-6,H-8), 6.38 (1H, d, J=2.4 Hz, H-3), 6.29 (1H, d, J=2.4 Hz, H-I), 3.80 (3H, s,4-OMe), 2.61 (4H, s, H2-9 and H2-10). 13C NMR(MeOD): 8:157.7 (C-4), 156.1 (C-2), 154.6 (C-7), 140.4 (

16、C-10a), 139.1 (C-8a), 128.6 (C-5),124.8 (C-4b), 115.4 (C-4a), 113.6 ( C-8), 112.2 (C-6), 106.9 (C-I), 97.9 (C-3), 54.5 ( 4-OMe),30.4 (C-10), 29.8 (C-9). 以上数据与文献6对照基本一致，确定化合物为coelonin。化合物：白色粉末。1H NMR(MeOD)：9.74(1H, s,H-7)，7.77(2H，d,J=8.5 Hz，H-2,6)，6.82(2H，d,J=8.5 Hz，H-3,5)， l3 C NMR(MeOD)：130.4(C-1)，

17、133。6(C-2，6)，116.9(C-3，5)，165.3(C-4)，192.9(C-7)。以上数据与文献7对照基本一致，确定化合物为对羟基苯甲醛。化合物：白色簇晶（MEOH）。1H NMR(MeOD)：7.88(2H，d,J=8.0Hz，H-2,6)，6.82(2H，d,J=8.0 Hz，H-3,5)， l3 C NMR(MeOD)：123.1(C-1)，133。1(C-2，6)，116.1(C-3，5)，163.4(C-4)，170.4(C-7)。以上数据与文献8对照基本一致，确定化合物为对羟基苯甲酸。化合物：淡黄色油状物，ESI MS: m/z=364M+,1H-NMR(CDCl3)

18、: 7.17 (1H,t, J=8.0 Hz, H-5),6.96(2H,d, J=8.5 Hz , H-2, H-6), 6.73(1H,dd,J=8.0Hz,J=2.5Hz,H-4), 6.70(1H,overlap, H-6), 6.68 (2H,d, J=8.5Hz, H-3, H-5), 6.61(1H,br.s,H-2), 6.34(1H,d,J=2.5Hz,H-4), 6.30(1H,d, J=2.5 Hz , H-6), 3.91(2H,s,CH2),3.77 (3H, s, 3-OMe), 3.75 (3H,s,3-OMe)，2.78 (2H,m,CH2CH2)，2.65 (

19、2H,m,CH2CH2) ，13C NMR(CDCl3) 159. 58. (C-3),159.00(C-3) 154.75 (C-5), 153.38(C-4), 143.45(C-1), 142.70(C-1), 133.83(C-1),129.31 (C-5), 129.09 (C-2,C-6), 120.77 (C-2), 119.74 (C-6), 115.04 (C-3, C-5), 114.09 (C- 2), 111.29 (C-4), 108.07(C-6), 96.99(C-4), 55.67(OMe-3), 55.16 (OMe-3), 37.33(C-7), 35.06

20、 (C-7), 29.75 (-CH2-);以上数据与文献2对照基本一致，确定化合物为bulbocol。化合物VIII：淡黄色油状物ESI MS: m/z=364M+,1H-NMR( CDCl3): 7.11 (1H,t, J=8.5 Hz, H-5),6.95(2H,d, J=8.5 Hz , H-2, H-6), 6.69(1H,brdd,ca.3,8,H-4), 6.64(1H,brdd,H-6), 6.63(2H,d, J=8.5Hz, H-3, H-5), 6.49(1H,br.s,H-2), 6.34(1H,d,J=2.0Hz,H-4), 6.29(1H,d, J=2.0 Hz ,

21、 H-6), 3.86(2H,s,CH2),3.78 (3H, s, 3-OMe), 3.76 (3H,s,5-OMe)，2.79 (2H,m,CH2CH2)，2.65 (2H,m,CH2CH2)，13C NMR(CDCl3) 158.85. (C-3),158.83(C-5) 155.50 (C-3), 153.34(C-4), 143.78(C-1), 142.37(C-1), 133.95(C-1),129.50 (C-5), 129.16 (C-2,C-6), 120.84 (C-6), 119.85 (C-2), 115.33 (C-2), 115.09 (C-3, C-5), 11

22、2.82 (C-4), 105.82(C-6), 96.47(C-4), 55.68(OMe-3), 55.27 (OMe-5), 37.20(C-7), 35.17 (C-7), 29.80 (-CH2-);以上数据与文献9对照基本一致，确定化合物VIII为gymconopinD。 参考文献：1.中国药典（一部）S.2005版：232.Li Bai,Noriko Maxukawa,Masae,Yamaki, Shuzo Takagi. A polyphenol and two bibenzyls and from pleione bulbocodioides. phytochemistry. 1998,47(8),1637-16403 Li Bai,Noriko Maxukawa,Masae,Yamaki, Shuzo Takagi. Four stilbenoids from pleione bulbocodioides. phytochemistry. 1998,48(2), 327-3314 Luc.A.C.Pieters. Arnold J. Vlietinck Det