超声波提取小叶榕总黄酮及鉴别(一)

1、超声波提取小叶榕总黄酮及鉴别(一)    【摘要】 目的为充分利用小叶榕植物资源，避免资源的浪费，探讨小叶榕总黄酮的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从小叶榕中提取总黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量。结果测得供试品溶液中总黄酮的含量C=0.391 6 mg/ml，回收率为100.16%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是一条提取小叶榕总黄酮类物质的有效途径。 【关键词】 超声波提取；小叶榕；总黄酮；鉴别Abstract：ObjectiveTo develop a method for the

2、 extraction and identification of total flavanone of Xiaoyerong.MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from Xiaoyerong with ultrasonic wave. Spectrophotometry was used to determine the flavanone of Xiaoyerong .ResultsThe content of the total flavanone of Xiaoyerong was C=0.39

3、17mg/ml and the rate of recovery was 100.16%.Conclusion This method is a purely physical process and has not any pollution .It is an ideal way to extract the flavanone of Xiaoyerong.Key words：Ultrasonic wave treatment； Xiaoyerong； Total flavanone； Identification小叶榕为桑科植物榕树Ficus microcarpa L.f.的干燥叶，又名

4、细叶椿、细叶榕、垂叶榕，属桑科椿属常绿大乔木，高2025m，生气根12。全年可采收，斩取叶和幼枝，除去树枝，取净叶片，晒干。小叶榕多生长于村边或山林中，分布于广西、广东、福建、台湾、浙江南部、云南、贵州。印度、缅甸、马来西亚也有。小叶榕既可作风景树、行道树，树皮纤维可制鱼网和人造棉，又具有药用价值。小叶榕的茎、皮、果、叶、胶汁等均可入药，具有祛风清热、活血解毒、散淤理湿等功效。民间多用于治疗关节风湿痛、跌打损伤、小便不通、风火牙痛、急性痢疾及肠炎、疥癣、痔疮等病症。其叶、皮、果等提取的浸膏是治疗咳嗽、感冒类中成药的主要原料。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织

5、浆的毒质等研究已有报道34，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响4，但超声技术应用于提取小叶榕中黄酮类物质的研究尚未见报道。本文报道用超声波提取小叶榕总黄酮及鉴别。1 仪器与试剂1.1 仪器HS10260D型超声波清洗器(超声工作频率40 kHz，天津市恒奥科技发展有限公司)；UV-2450型紫外-可见分光光度计(日本岛津)；ZF7C型三用紫外分析仪(上海康华生化仪器制造有限公司)；2×

6、Z-1旋片式真空泵（浙江黄岩求精真空泵厂）；AUY220型电子天平(日本岛津)。1.2 试剂甲醇AR；乙醇AR；镁粉AR；盐酸AR；芦丁(Rutin)对照品（中国药品生物制品检定所）；新鲜小叶榕采自贵州省兴义市沧江乡。2 方法与结果2.1 总黄酮成分提取取新鲜小叶榕，烘干(55)，粉碎(过三号筛)。取55干燥至恒重的小叶榕粉末(过三号筛)约0.2 g，精密称定，置100 ml量瓶中，加70%乙醇90 ml，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)45 min，放冷，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，得供试品溶液。2.2 测定方法依据以芦丁为对照品测定小叶榕中总黄酮的含量，用盐酸-镁粉显色

7、法，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。2.3 定量实验总黄酮的含量测定2.3.1 对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品适量，加甲醇制成每毫升中含芦丁0.230 8 mg的溶液，即得。2.3.2 波长的选择精密量取芦丁对照品溶液（0.230 8 mg/ml）和供试品溶液各1.0 ml，分别置加有镁粉100 mg的具塞刻度试管中，将试管置冷水浴（15左右）中缓缓滴加浓盐酸3.0 ml，摇匀，加70乙醇至6 ml，摇匀，置沸水浴中保温35 min，取出，迅速冷却至室温，用70乙醇补充至原体积，以相应试剂为空白，在400700 nm波长范围内扫描测定吸收光谱。采用盐酸-镁粉显色法对总黄酮进行显色并进行全

8、波长扫描。结果发观，用盐酸-镁粉显色后，芦丁对照品、供试品的最大吸收波长基本一致，均为（510±5）nm，重复性好，同时空白溶液显色前后及芦丁对照品、样品显色前在该波长处均无明显吸收，故选择盐酸-镁粉显色法，在510 nm波长处测定小叶榕总黄酮含量。2.3.3 标准曲线的制备精密量取对照品溶液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml，分别置加有镁粉100 mg的具塞刻度试管中，将试管置冷水浴（15左右）中缓缓滴加浓盐酸3.0 ml，摇匀，加70乙醇至6 ml，摇匀，置沸水浴中保温35 min，取出，迅速冷却至室温，用70乙醇补充至原体积，以相应试剂为空白，在510 nm波长处测定

9、吸光度（见表1）。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=0.048 1+1.169 6C，r=0.999 5（n=3）。表1 紫外-可见分光光度计测定吸光度结果（略）2.3.4 提取物含量的测定精密量取样品溶液1.0ml，置加有镁粉100 mg的具塞刻度试管中，按标准曲线的制备方法测定其吸光度A=0.506，根据回归方程：A=0.048 1+1.169 6C，计算出供试品溶液中总黄酮的含量C=0.391 6 mg/ml，小叶榕供试品中含总黄酮以芦丁（C27H30O16）计为19.58%。2.3.5 回收率实验5精密量取供试品溶液1.0 ml，加入芦丁对照品溶液1.0 m

10、l（0.230 8 mg/ml），同前供试品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为100.16%。2.4 定性实验总黄酮的鉴别2.4.1 纸层析取供试品溶液、对照品溶液各2 l分别点在同一滤纸上，以正丁醇-醋酸-水(415)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。2.4.2 盐酸-镁粉反应 取供试品溶液1ml置加有镁粉适量的试管中，加浓盐酸数滴，在泡沫处呈紫红色。2.4.3 三氯化铝反应取供试品溶液点在滤纸上，滴加1%三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，置紫外光灯(365

11、 nm)下呈黄色荧光斑点。2.4.4 紫外光下呈色反应取供试品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，置紫外光灯(365 nm)下呈灰褐色并有荧光斑点。2.4.5 浓氨水反应取供试品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方薰30s，立即置紫外光灯(365 nm)下检视，呈极明显的黄褐色荧光斑点。2.4.6 乙酸镁反应取供试品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，置紫外光灯(365 nm)下检视，呈黄色斑点。3 讨论 实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为100.16%，本实验所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的6。该方法

12、采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取小叶榕总黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄(醇)、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等7。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗

13、辐射等作用813。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以天然低毒的特点备受青睐，而黄酮类化合物以广谱的药理作用引人瞩目。小叶榕分布广泛。本实验结果表明，小叶榕中含有较为丰富的黄酮。因此，小叶榕具有广泛的开发和利用价值，值得综合利用并加强资源开发。【参考文献】1张秀实,吴钲益,曹子余. 中国植物志M. 北京:科学出版社,1998:112. 2中国科学院昆明植物研究所.云南植物志M. 北京:科学出版社,1995：597.3刘详义. 超声波提取元宝枫叶总黄酮方法研究J.云南化工,2003,30（1）:27.4谢明杰,宋 明,邹翠霞,等. 超声波提取大豆异黄酮J. 大豆科学,2004,23(1):75.5国家药典委员会.中国药典,I部S.北京:化学工业出版社,2005:附录115 .6农世永,林丹英,尤婷婷,等. 超声波提取马尾松总黄酮及鉴别J.时珍国医国药,2007,18（8）:1913.7夏杏洲,张 辉,魏传晚.榕树叶中黄酮类化合物的提取条件研究J.食品研究与开发,2002,23(5)：35.8姜国芳,谢宗波,乐长高.银杏叶黄酮类化合物的研究进展J. 时珍国医国药,2004,15（5）:306.9曹纬国,刘志勤,邵 云,等. 黄酮类化合物药理作用研究进展J