健康人口服羟乙膦酸钠胶囊剂的相对生物利用度试验

1、    健康人口服羟乙膦酸钠胶囊剂的相对生物利用度试验        摘要：目的：研究羟乙膦酸钠胶囊在正常人体内的相对生物利用度。方法：采用钼蓝-乙酸丁酯萃取比色法测定8名志愿者单剂量po 400 mg羟乙膦酸钠胶囊和羟乙膦酸钠片剂后的血药浓度变化情况，计算二者的相对生物利用度。用双单侧t检验法分析两种制剂的生物等效性。结果：两种制剂的消除相半衰期分别为(3.03±1.07)h和(3.46±0.73)h；血药浓度曲线下面积分别为(8.18±1.9

2、9)和(8.14±1.94)ghml-1，其达峰浓度分别为(0.88±0.17)和(1.04±0.32)h，达峰浓度分别为(2.05±0.56)和(1.79±0.60)gml-1。结论：羟乙膦酸钠胶囊与羟乙膦酸钠片剂为生物等效制剂，羟乙膦酸钠胶囊的相对生物利用度为(100.6±10.0)%。关键词：羟乙膦酸钠；生物利用度Relative bioavailability of disodium etidronate capsules in healthy volunteers Shao Qing (Shao Q)Li Shimin (L

3、i SM)Zeng Su (Zeng S)(School of Pharmacy,Zhejiang University,Hangzhou 310031)ABSTRACT：OBJECTIVE：To study the relative bioavailability of disodium etidronate capsules in healthy volunteers.METHODS：The disodium etidronate concentrations in plasma were determined by extraction of molybdate blue-butylac

4、etate and colorimetry following a single oral dose of disodium etidronate capsules and disodium etidronate tablets respectively given to 8 volunteers.RESULTS：The t1/2Ke was (3.03±1.07)h and (3.46±0.73)h,AUC (8.18±1.99) and (8.14±1.94)ghml-1，tmax (0.88±0.17) and (1.04±0.

5、32)h，cmax(2.05±0.56) and (1.79±0.60)gml-1 of disodium etidronate capsules and disodium etidroante tablets,respectively.CONCLUSION：The results of statistical analysis showed that the two formulations were bioequivalent.The relative bioavailability of disodium etidronate capsules was (100.6&

6、#177;10.0)%.KEY WORDS：disodium etidronate,bioavailability羟乙膦酸钠(disodium etidronate)是一新型的防治骨质疏松症的药物。目前，国外报道的血药浓度测试方法多采用同位素标记法12,我们参考S.Bisaz报道的方法2，经改进去除了同位素标记步骤，并采用钼蓝-乙酸丁酯萃取比色法34测定8名健康志愿者口服羟乙膦酸钠胶囊剂和片剂的血药浓度，并计算出有关的药动学参数。同时根据测得的AUC经统计分析，以评价这两种制剂的生物等效性，为该药临床应用的有效性和安全性提供依据。1材料与方法1.1药品与试剂试验药品：羟乙膦酸钠胶囊剂(200

7、mg/粒，浙江海门制药厂提供，批号960724)；对照药品羟乙膦酸钠片剂(200 mg.片-1，成都化学制药厂生产，批号960501)；羟乙膦酸钠标准品(浙江海门制药厂，含量99.52%)。钼锑贮存液：取分析纯浓硫酸90.5 ml，缓缓加入约200 ml水中，搅匀，冷却。另称取钼酸铵25.0 g溶于上述硫酸液中，再加0.45%酒石酸锑钾液100 ml，冷却后用水稀释至500 ml，摇匀，贮于棕色瓶中，冰箱保存。钼锑抗混合显色液：准确量取钼锑贮存液100 ml，加入抗坏血酸0.50 g溶解即可。该显色液保存时间为24 h，宜用前配制。实验中所用试剂均为分析纯。1.2仪器日立2000型紫外分光光度

8、计；80-1型离心机；WH-90A型微型混合器。1.3血浆中羟乙膦酸钠测定方法1.3.1血浆样品的处理与测定精密量取待测血浆样品1.0 ml于10 ml离心管中，加1.0 ml蒸馏水，混匀，加入10%三氯醋酸3.0 ml旋涡混合1 min，于离心机中离心。倾取上清液，加入2.5 mol.L-1氯化钙液50 l，滴加6.25 mol.L-1氢氧化钠液至刚产生白色沉淀，离心，弃去上清液，沉淀加1 mol.L-1盐酸液1.0 ml溶解，再分别加入5%钼酸铵液0.6 ml及1%三乙胺液0.6 ml，混匀，于04静置1 h以上，离心，上清液过滤，取滤液1.0 ml于10 ml离心管中，加入2.5 mol

9、.L-1氯化钙液30 l，滴加6.25 mol.L-1氢氧化钠液至刚产生白色沉淀，离心，弃去上清液，沉淀加0.4 ml高氯酸溶解，于190油浴15 min，冷却，将样品液定量移至50 ml量瓶中，加入6.25 mol.L-1氢氧化钠液0.74 ml及1滴酚酞指示剂，滴加0.2 mol.L-1硫酸液至红色刚刚褪去，加入5%钼锑抗混合显色液4.9 ml及乙酸丁酯0.90 ml，加水定容至50 ml，混匀。具塞，于35水浴保温10 min，取出，振摇1 min，静置1 h以上后，以加0.4ml高氯酸起平行操作所做的试剂空白为样品空白对照，在642 nm波长处测定吸收值。1.3.2血浆标准曲线取空白血

10、浆8份(各1.0 ml)依次加入羟乙膦酸钠标准液，使血浆药物浓度分别为0.06，0.147，0.294，0.588，1.47，2.94，5.88，8.82 g.ml-1，同“血药浓度测定法”项下操作，在642 nm波长处测定吸收值，得标准曲线回归方程为A=0.08915 c+0.063,r=0.9996。1.3.3方法回收率与精密度分别于1.0 ml空白血浆中加入羟乙膦酸钠标准液，使其浓度为0.74，1.47，2.94 g.ml-1，同“血药浓度测定法”项下操作，分别测定方法回收率及日内、日间精密度。方法回收率结果见表1；方法精密度结果见表2。表1方法回收率结果.n=5加入量/g.ml-1检测

11、/g.ml-1回收率/%RSD/%0.740.73999.868.701.471.36692.937.412.942.76093.884.78表2方法精密度结果.n=5浓度/日内日间g.ml-1±sRSD/%±sRSD/%0.740.725±0.068.020.756±0.089.881.471.37±0.107.401.72±0.148.232.942.76±0.134.792.88±0.227.621.3.4试验对象及方法健康男性志愿受试者8名，平均年龄(21.1±0.35)岁，平均身高(170.9&

12、#177;2.85) cm，平均体重(61.6±3.96)kg，经体检心、肝、肾功能均正常，受试前两周内和受试期间均未服用过任何其他药物，实验期间禁烟、酒。晨起空腹单剂量口服羟乙膦酸钠片剂(市售片，200 mg.片-1)和羟乙膦酸钠胶囊剂(试验胶囊剂，200 mg.粒-1)各400 mg，两次服药间隔两周，交叉给药1次。分别于服药后0.33，0.67，1.0，1.5，2.0，4.0，6.0，8.0，12.0和24.0 h静脉取血，血标本收集于枸橼酸钠抗凝试管内，离心分离出血浆；制成血浆样品液，于-20保存备测。 2结果与讨论2.18名志愿受试者交叉口服单剂量羟乙膦酸钠胶囊剂和羟乙膦酸

13、钠片剂后，两者的血药浓度对时间变化见表3。表3健康志愿者单剂量口服400 mg羟乙膦酸钠后血药浓度随时间变化情况.±s,n=8时间/h血药浓度/g.ml-1胶囊片剂0.330.89±0.500.60±0.210.671.72±0.651.23±0.501.001.72±0.551.65±0.621.501.38±0.301.20±0.442.001.05±0.220.97±0.314.000.80±0.190.71±0.186.000.52±0.190.4

14、9±0.188.000.42±0.060.42±0.2012.000.30±0.090.29±0.1324.000.35±0.070.24±0.112.2经3P87程序对经时血药浓度数据进行处理，采用一室模型计算药代动力学参数，cmax和tmax根据实际血药浓度时间数据读出，结果见表4。结果表明：羟乙膦酸钠口服给药后1 h左右达到血药浓度高峰，血药峰浓度分别为2.05和1.79 g.ml-1；消除半衰期分别为3.03和3.46 h；两者的药时曲线下面积分别为(8.18±1.99)和(8.14±1.94)g

15、.h.ml-1。表4健康志愿者单剂量口服400 mg羟乙磷酸钠后药代动力学参数.±s，n=8药代动力学参数胶囊片剂t1/2ke/h3.03±1.073.46±0.73tpeak/h0.88±0.171.04±0.32cmax/g.ml-12.05±0.561.79±0.60AUC/g.h.ml-18.18±1.998.14±1.942.3以羟乙膦酸钠片剂为标准参比制剂，计算单剂量口服羟乙膦酸钠胶囊剂400 mg的人体相对生物利用度为(100.6±10.0)%。2.4统计分析以羟乙膦酸钠片剂为标准

16、参比制剂，将药代动力学参数AUC经对数转换后进行双单侧t检验，分析两种制剂的生物等效性。其t1与t2均大于t10.05，且90%可信限为93.7%107.1%，试验胶囊剂的AUC平均值的90%可信限落在参比制剂的80%12.5%之间，因此羟乙膦酸钠胶囊剂与羟乙膦酸钠片剂为生物等效。 作者单位：邵青(浙江大学药学院分析中心，杭州，310031）李士敏(浙江大学药学院分析中心，杭州，310031）曾苏(浙江大学药学院分析中心，杭州，310031）史美甫（浙江大学附属第一医院)章可铭（浙江大学附属第一医院)参考文献：1William RM,William RK,Wakim JM.Metabolism of disodium ethane-1-hydroxy-1,1-diphosphonate(disodium etidronate) in the rat,rabbit dog and monkey.Taxicol Appli Pharmaco