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文档简介

荧光分光光度法测定药片中维生素B2的含量 授课单位 化学与生命科学学院授课课程名称 仪器分析实验教师 陈志兵 荧光分光光度法测定药片中维生素B2的含量 实验目的 学习荧光分光光度法测定药片中维生素B2的分析原理 掌握荧光分光光度计的操作技术和测定药片中维生素B2的方法 掌握Origin绘图软件的使用方法 实验原理 常温下 处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子 激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级 再以辐射跃迁的形式回到基态 发出比吸收光波长长的光而产生荧光 实验原理 在稀溶液中 荧光强度IF与物质的浓度c有以下的关系 当实验条件一定时 荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系 这是荧光光谱法定量分析的理论依据 a 与紫外 可见分光度法比较 荧光分析法具有更高的灵敏度 b 选择性好 荧光法既能依据发射光谱 又能依据吸收光谱来鉴定物质 c 所需试样量少 操作方法简便 激发光谱 固定测量波长 选最大发射波长 化合物发射的荧光强度与激发光波长的关系曲线 激发光谱曲线的最高处 处于激发态的分子最多 荧光强度最大 激发光谱 发射光谱 固定激发光波长 选最大激发波长 化合物发射的荧光强度与发射光波长关系曲线 固定发射光波长进行激发光波长扫描 找出最大激发光波长 然后固定激发光波长进行荧光发射波长扫描 找出最大荧光发射波长 激发光波长和发射荧光波长的选择是本实验的关键 发射光谱 常用的荧光分析仪器由激发光源 单色器 液槽 检测器和显示记录器五部分构成 如下图所示 荧光分析仪器与分光光度计比较主要差别有两点 a 荧光分析仪器采用垂直测量方式 以消除透射光的影响 b 荧光分析仪器有两个单色器 能够获得单色性较好的激发光并消除其它杂散光干扰 a 光源 在荧光计中常用卤钨灯作光源 荧光分度计常采用高压汞灯或氙弧灯做光源 b 单色器 荧光计的单色器是滤光片 只能用于定量分析 荧光分光光度计采用两个光栅单色器 可获得激发光谱和荧光光谱 c 检测器 荧光计采用光电管作检测器 荧光分光光度计采用光电倍增管作检测器 仪器部件 维生素B2 又叫核黄素 VB2 是橘黄色无臭的针状结晶 其结
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