（生理学专业论文）硫化氢对缺血豚鼠乳头肌的电生理效应.pdf

中文摘要 硫化氢对缺血豚鼠乳头状肌的电生理效应 摘要 硫化氢( h y d r o g e ns u l f i d e ，h 2 s ) 是继一氧化氮( n i t r i c o x i d e ，n o ) 、一氧化碳( c a r b o nm o n o x i d e ，c 0 ) 之后的第三种 内源性气体信号分子，发挥着重要的生理功能。内源性h 2 s 可以由两种磷酸吡哚醛5 磷酸依赖性酶，即胱硫醚p 合酶 ( c y s t a t h i o n i e p s y t h a s e ，c b s ) 和胱硫醚吖裂解酶 ( c y s t a t h i o n i n e 吖一l y a s e ，c s e ) 催化生产。h 2 s 可通过开放血管 平滑肌细胞a t p 敏感性钾离子通道( k a y p 通道) 和抑制细胞 外钙内流，发挥舒血管效应。a t p 敏感性钾离子通道在心肌 细胞中也有广泛分布，其开放是一种重要的心脏内源性保护 机制。近来有研究表明，h 2 s 可以通过k a t p 通道在心脏中发 挥负性肌力作用，而且可以由心脏组织内源性产生，调节心 脏功能。在硫化氢对心肌细胞电生理的研究中己发现，正常 生理环境中外源性地给予h ：s 可缩短乳头状肌细胞的动作电 位时程，对部分去极化的乳头状肌细胞还可降低动作电位幅 值和超射值，减慢零相最大上升速度。但目前，关于h 2 s 对 于缺血环境下心肌细胞电生理效应的研究和报道较少。本研 究旨在通过应用细胞内微电极技术观察h 2 s 对于缺血不同时 期心肌细胞电生理效应，并探讨其可能的作用机制。 目的：旨在观察h 2 s 对缺血豚鼠乳头肌的电生理效应。 方法：1 利用细胞内玻璃微电极技术，记录模拟缺血环 境中豚鼠乳头状肌细胞的放电。使用我研究室自行设计的心 脏细胞跨膜动作电位采样、处理系统对细胞动作电位各参数 进行采集、记录和分析。2 利用透射电镜技术观察各处理组 中文摘要 模拟缺血环境下心肌细胞超微形态学变化，进一步证明电生 理改变的结构基础。 结果：1 ( 1 ) h 2 s 前处理可浓度依赖性地( 5 0 t m o l l 、 1 0 0p m o l l 、2 0 0p m o l l ) 使乳头状肌细胞动作电位的平台期 ( p p d ) 、复极化5 0 时间( a p d 5 0 ) 、复极化9 0 1 t , 寸间 ( a p d 9 0 ) 、动作电位时程( a p d ) 以及零相最大上升速度( 舣) 在各缺血时间点( 5m i n 、1 0r a i n 、1 5r a i n 、2 0m i n 、2 5r a i n 、 3 0m i n ) 与单纯缺血组有显著性差异。在缺血早期h 2 s 可加 速p p d 、a p d 5 0 、a p d 9 0 、a p d 和狱的减小，缺血后期h 2 s 相反促进了p p d 、a p d 5 0 、a p d 9 0 、a p d 和v m 戕恢复。( 2 ) 缺 血预适应对缺血乳头状肌细胞电生理参数( p p d 、a p d 5 0 、 a p d 9 0 、a p d 及默) 的影响和h 2 s 前处理效应相似。( 3 ) 应 用k a t p 通道阻断剂格列苯脲( g l i ；2 0 m o l l ) ，可部分阻断 h 2 s 对乳头状肌细胞的电生理效应。( 4 ) 胱硫醚一y 裂解酶 ( c y s t a t h i o n i n e 丫1 y a s e ， c s e ) 的不可逆抑制剂 d l p r o p a r g y l g l y c i n e ( p p g ；2 0 0 p m o l l ) ，可抑制缺血早期电生 理参数( p p d 、a p d 5 0 、a p d 9 0 、a p d 及舣) 的减小，并使 得缺血晚期上述参数的改善恶化。2 ( 1 ) 正常豚鼠乳头状 肌细胞在透射电镜下显示肌节排列整齐，细胞核周线粒体和 糖原颗粒含量非常丰富，且线粒体嵴和膜清晰可见。( 2 ) 乳 头状肌细胞给予模拟缺血液后，电镜显示肌节排列紊乱，部 分肌浆网扩张，细胞质有水肿，糖原颗粒数量减少，线粒体 部分嵴和膜融合不清或缺失。( 3 ) 缺血乳头状肌细胞在给 予缺血预适应或给予h 2 s 前处理后，其超微形态结构的改变 均不同程度减轻。( 4 ) 格列苯脲前处理后，h 2 s 保护缺血 乳头状肌细胞形态学损伤的作用减轻。( 5 ) p p g 前处理后， 中文摘要 乳头状肌细胞缺血后电镜显示，乳头肌明显水肿，肌节排列 紊乱，肌节有阻断或消失，线粒体和糖原颗粒数量明显下降， 线粒体大部分嵴和膜融合不清或缺失( 空泡化) 。 结论：外源性h 2 s 前处理可能通过兴奋k a t e 通道促进缺 血早期k + 外流，并且由于对n 矿一k + a t p 酶的保护作用改善 了缺血晚期对k + 的重摄取，进而影响缺血环境下豚鼠乳头状 肌细胞的电生理效应；乳头状肌细胞内源性产生的h 2 s 可能 在心肌缺血损伤时发挥着重要的电生理作用。透射电镜下观 察发现外源性h 2 s 可减轻乳头状肌细胞缺血损伤时的微形态 学改变。而阻断内源性h 2 s 后，可加重心室乳头状肌细胞在 缺血时超微结构的损伤。 关键词：电生理；电生理参数；硫化氢；缺血；动作电 位；透射电镜。 英文摘要 e f f e c t so fh y d r o g e ns u l f i d e o ne l e c t r o p h y s i o l o g yo fi s c h e m i cc a r d i o m y o c y t e s a b s t r a c t h y d r o g e ns u l f i d e ( h z s ) h a sb e e np r o v e dt o b et h et h i r d e n d o g e n o u ss i g n a l i n gg a s o t r a n s m i t t e r , b e s i d e sn i t r i co x i d e ( n o ) a n dc a r b o n m o n o x i d e ( c o ) ，a n d s h o w st h e i m p o r t a n t p h y s i o l o g i c a lf u n c t i o n s e n d o g e n o u sh e sc a nb eg e n e r a t e df r o m l c y s t e i n ec a t a l y z e db yt w op y r i d o x a l 一5 - p h o s p h a t e d e p e n d e n t e n z y m e s ，c y s t a t h i o n i e p s y n t h a s e( c bs ) a n d c y s t a t h i o n i n e - 丫一l y a s e ( c s e ) h 2 s i s d i r e c t l yp r o d u c e d i n m y o c a r d i a lt i s s u e s ，a r t e r i a la n dv e n o u st i s s u e sb yc s e i ti sn o w c l e a rt h a th 2 sh a st h ev a s o r e l a x t a n tf u n c t i o n s i nv a s c u l a r s m o o t hm u s c l ec e l l s ( v s m c s ) ，t h eo p e n i n go fa t p - s e n s i t i v e p o t a s s i u mc h a n n e l s ( k a t pc h a n n e l s ) a n d t h ee n t r a n c eo f e x t r a c e l l u l a rc a l c i u mw e r er e p o r t e dt ob ei n v o l v e di n h 2 s a c t i o n s k a t pc h a n n e l sw i d e l yd i s t r i b u t ei nh e a r tc e l l s i ti s k n o w nt h a tt h eo p e n i n go fk a t pc h a n n e l si nm y o c a r d i u mi sa n i m p o r t a n te n d o g e n o u sc a r d i o p r o t e c t i v em e c h a n i s m r e c e n t l y , h 2 sh a sb e e nf o u n dt op l a yan e g a t i v ei n o t r o p i cr o l ei nt h eh e a r t a n dc o u l db ee n d o g e n o u s l yp r o d u c e db yt h ec a r d i a ct i s s u e sa sa p h y s i o l o g i c a lc a r d i a cf u n c t i o nr e g u l a t o r ，w h i c hi sm e d i a t e db y k a 朋c h a n n e lp a t h w a y i n t h en o r m a l p a p i l l a r y m u s c l e s e x o g e n o u sh 2 sc a nd e c r e a s et h ed u r a t i o no fa c t i o np o t e n t i a l ( a p d ) i nac o n c e n t r a t i o n - d e p e n d e n tm a n n e r , a n di np a r t i a l l y d e p o l a r i z e dp a p i l l a r y m u s c l e sh z sc a na l s od e c r e a s et h e 4 英文摘要 a m p l i t u d eo fa c t i o np o t e n t i a l ( a p a ) ，o v e r s h o o t ( 0 s ) a n d m a x i m a lv e l o c i t yo fd e p o l a r i z a t i o na t0 ( a x ) b e s i d et h ea p d t h o u g ht h ec a r d i o p r o t e c t i o no fh 2 so ni s c h e m i ah e a r th a db e e n r e p o r t e d ，t h ee l e c t r o p h y s i o l o g i c a le f f e c t so fh 2 so ni s c h e m i c c a r d i o m y o c y t e sw e r en o tc l e a r t h ep u r p o s eo ft h i ss t u d yi st o i n v e s t i g a t et h ee f f e c t so fh z so ne l e c t r o p h y s i o l o g yo fi s c h e m i c c a r d i o m y c y t e s a n di t s u n d e r l y i n g m e c h a n i s m s b yu s i n g i n t r a c e l l u l a rm i c r o e l e c t r o d et e c h n i q u e a i m ：t os t u d yt h ee l e c t r o p h y s i o l o g i c a le f f e c t so f h y d r o g e n s u l f i d e ( h 2 s ) o ni s c h e m i cg u i n e ap i gp a p i l l a r ym u s c l e s m e t h o d s ：1 p a r a m e t e r so fa c t i o np o t e n t i a l s ( a p s ) o ft h e i s c h e m i cg u i n e a p i gp a p i l l a r ym u s c l e sw e r er e c o r d e du s i n g i n t r a c e l l u l a rm i c r o e l e c t r o d e sa n da n a l y z e dw i t ht h es y s t e mo f s a m p l i n g a n d p r o c e s s i n g c a r d i a ct r a n s m e m b r a n e p o t e n t i a l d e s i g n e db yo u rd e p a r t m e n t 2 t h eu l t r a s t r u c t u r eo fp a p i l l a r y m u s c l ec e l l so b s e r v e db yt r a n s m i s s i o ne l e c t r o nm i c r o s c o p et o p r o v e t h e e l e c t r o p h y s i o l o g i c a l s c h a n g e s o fs t r u c t u r e b a c k g r o u n dd u et od i f f e r e n tt r e a t m e n t s r e s u l t s ：1 ( 1 ) h 2 sp r e t r e a t m e n t ( 5 0g m o l l 、10 0g m o l l 、 2 0 0 g m o l l ) c h a n g e d t h e p l a t e a up e r i o dd u r a t i o n ( p p d ) ， d u r a t i o no fa c t i o np o t e n t i a l ( a p d ) ，5 0 o fa p d ( a p d 5 0 ) ，9 0 a p d ( a p d 9 0 ) ，a n dm a x i m a lr a t eo fd e p o l a r i z a t i o na tp h a s e0 ( a ) 【) o f i s c h e m i c g u i n e ap i g p a p i l l a r y m u s c l e si na c o n c e n t r a t i o n - d e p e n d e n tm a n n e r h z sp r e t r e a t m e n tp r o m o t e d s h o r t e n i n go fa p d ，a p d s o ，a p d 9 0 ，p p da n dv m 戤a tt h ee a r l y p h a s eo fi s c h e m i a ，a n di m p r o v i n go fa p d ，a p d 5 0 ，a p d 9 0 ，p p d 5 英文摘要 a n dv m a xa tt h el a t ep h a s eo fi s c h e m i a ，t h e r ei sas i g n i f i c a n t c h a n g m e n tc o m p a i r e dw i t hi s c h e m i a ( 2 ) t h ep a r a m e t e r s o f p p d 、a p d 5 0 、a p d 9 0 、a p da n d 。xh a ds i m i l a rc h a n g e sr e d u c e d b ye x o g e n o u sh 2 sp r e t r e a t m e n ta f t e ri s c h e m i cp r e c o n d i t i o n i n g ( 3 ) p r e t r e a t m e n tw i t hk a a vc h a n n e lb l o c k e rg l i b e n c l a m i d e ( g l i ； 2 0l a m o l l ) c o u l dp a r t i a l l yb l o c kt h ee f f e c t so fh 2 sp r e t r e a t m e n t ( 10 0g m o l l ) ( 4 ) t h es h o r t e n i n go fp a r a m e t e r sp p d 、a p d s o 、 a p d 9 0 、a p da n dv m a ) ( w e r ew e a k e n e da tt h ee a r l yp h a s eo f i s c h e m i aa n dt h ei m p r o v i n go ft h e s ep a r a m e t e r sw e r ed e c r e a s e d a tt h el a t ep h a s eo fi s c h e m i ab yd l p r o p a r g y l g l y c i n e ( p p ga n i n r e v e r s i b l ei n h i b i t o ro fc s e ；2 0 0l a m o l l ) 2 ( 1 ) t h e u l t r a s t r u c t u r eo fn o r m a l g u i n e ap i gp a p i l l a r y m u s c l ec e l l s h o w i n g t h es a r c o m e r ea n dl i g h td a r kb a n d w e r ec l e a r ， m i t o c h o n d r i aa n d g l y c o g e n o s o m e w e r e a b u n d a n t ， a n d m i t o c h o n d r i a lc r i s t a ea n dm e m b r a n ew e r ec l e a r ( 2 ) t h et e m s h o w i n gt h es a r c o m e r ew a si nab a da p p o s i t i o n ，s a r c o p l a s m i c r e t i c u l u md i l a t e d ，c y t o p l a s m i cw a se d e m a ，g l y c o g e n o s o m e d e c r e a s e d ， m i t o c h o n d r i a lc r i s t a ea n dm e m b r a n ew e r e a n a s t o m o s i so ra b s e n c e ( 3 ) t h ed a m a g eo f u l t r a s t r u c t u r eg i v e n i s c h e m i ai n s u l tr e l i e v e db yi s c h e m i cp r e c o n d i t i o n i n go rh 2 s p r e t r e a t m e n t ( 4 ) g l i b e n c l a m i d ec o u l db l o c kt h ep r o t e c te f f e c t o fp a p i l l a r ym u s c l eu l t r a s t r u c t u r ed u et oh 2 sp r e t r e a t m e n t ( 5 ) t h eu l t r a s t r u c t u r e so b s e r v a t i o n o ft h ei s c h e m i cp a p i l l a r y m u s c l ec e l la f t e rp p gp r e t e a t m e n t p a p i l l a r ym u s c l ew a ss e v e r e e d e m a ；s a r c o m e r e s w e r ei nb a d a r r a n g e m e n t ，c o n t a i n i n g b r e a k a g e o ra b o l i t i o n t h e q u a n t i t y o fm i t o c h o n d r i a a n d 6 g l y c o g e n o s o m ed e c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y m i t o c h o n d r i ac r i s t a e a n dm e m b r a n ei n a g r e a tm e a s u r ew e r ea n a s t o m o s i s o r v a c u o l i z a t i o n c o n c l u s i o n ：a l lt h e s er e s u l t ss u g g e s tt h a te f f e c t so f h ，so n p a p i l l a r ym u s c l e sa r ed u et oa ni n c r e a s ei np o t a s s i u me m u x t h r o u g ho p e n i n gt h ek a a vc h a n n e lsa tt h e e a r l yp h a s eo f 1 s c h e m i a ，a n da c c e l e r a t i o ni n p o t a s s i u mr e u p t a k et h r o u g h 1 r e p r o v i n gt h en a + 一k + - a t p a s ea tt h el a t e p h a s eo fi s c h e m i a e n d o g e n o u sh 2 sm a y a c t a s i m p o r t a n tr e g u l a t o r i i l e l e c t r o p h y s i o l o g i c a lc h a r a c t e r si ni s c h e m i cp a p i l l a r ym u s c l e s t h eo b s e r v a t i o no fp a p i l l a r ym u s c l ec e l l s u l t r a s t r u c t u r es h o w e d t h a t e x o g e n o u sh 2 s c o u l d d e c r e a s et h e d a m a g eo fj s c h e m jc g u i n e ap i gp a p i l l a r ym u s c l e s t h ea b s e n c eo fe n d o g e n o u sh ，s c o u j d a g g r a v a t et h e d a m a g e o f p a p i l l a r ym u s c l ec e l l ，s u l t r a s t r u c t u r ew h e nt h ep a p i l l a r ym u s c l ei n s u l t e di s c h e m i a k e y w o r d s ：e l e c t r o p h y s i o l o g y ；h y d r o g e n ；i s c h e m i a ：a c t i o n p o t e n t i a l ；p a p i l l a r ym u s c l e s ；t r a n s m i s s i o ne l e c t r o nm i c r o s c o p e = 一 一 英文缩写 英文缩写 ( e n g l i s ha b b r e v i a t i o n s ) a c t i o np o t e n t i a l动作电位 a p a a m p l i t u d eo f a p 动作电位幅值 a p dd u r a t i o no f a p动作电位时程 a p d s o d u r a t i o no f5 0 r e p o l a r i z a t i o n a p d 9 0 d u r a t i o no f9 0 r e p o l a r i z a t i o n c s e c y s t a t h i o n i n e 一丫- l y a s e g l i b e n c l a m i d e h 2 sh y d r o g e ns u l f i d e k a v pc h a n n e l a t p - s e n s i t i v ep o t a s s i u m 0 so v e r s h o o t 动作电位复极化 5 0 时间 动作电位复极化 9 0 时间 胱硫醚一丫一裂解酶 格列苯脲 硫化氢 a t p 敏感性钾离 子通道 超射值 8 英文缩写 t ss o l u t i o n t y r o d e ss o l u t i o n p p d 台式液 p l a t e a up e r i o dd u r a t i o n平台期 p p g d l - p r o p a r g y l g l y c i n e v m a ) 【 m a x i m a lr a t eo f0p h a s e d e p o la r i z a t i o n 一种胱硫醚- 丫一裂 解酶的不可逆抑 制剂 0 相最大上升速 度 t e mt r a n s m i s s i o ne l e c t r o n透射电镜 m l c r o s c o p e 9 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师( 或指导小组) 的指导下，由本人独立完 成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大 学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。 凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医 科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北 医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。 魏拟翮虢帮。鬟龋名 ；- i ：i t 医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果， 除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经 发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本 人独立撰写，文责自负。 研究生签名： 劫步酬 导师签章：蓊字、移 潮年只j 弓e t 研究论文 一 e f f e c t so f h y d r o g e ns u l f i d e o ne l e c t r o p h y s i o l o g yo fi s c h e m i cc a r d i o m y o c y t e s i n t r o d u c t i o n h y d r o g e ns u l f i d e ( h 2 s ) w a so n l yr e c o g n i z e da sak i n do f t o x i cg a si nc o n t a m i n a t e de n v i r o n m e n t a lw i t ha s t r o n go d o ro f r o t t e ne g g sf o ral o n gt i m e ，a n di t s m a j o re f f e c t sw e r et h e i n t o x i c a t i o no fc e n t r a ln e r v o u ss y s t e ma n dt h ei n h i b i t i o no f t h e r e s p i r a t o r ys y s t e m 【l - 3 1 a l t h o u g ht o x i ca th i g hd o s e s ，t h e r ea r e i n c r e a s i n gl i n e so fe v i d e n c et op r o v et h a th 2 sm i g h tb et h et h i r d e n d o g e n o u ss i g n a l i n gg a s o t r a n s m i t t e r , b e s i d e sn i t r i co x i d ef n o ) a n dc a r b o nm o n o x i d e ( c o ) a n dh a s i m p o r t a n tp h y s i o l o g i c a l f u n c t i o n s t 4 1 e n d o g e n o u sh 2 s g a sm a y b e g e n e r a t e db yt w o p y r i d o x a l 一5 一p h o s p h a t e d e p e n d e n t e n z y m e s c y s t a t h i o n i e 1 3 - s y n t h a s e ( c bs ) a n d c y s t a t h i o n i n e7 - 1 y a s e ( c e s ) i n m a m m a l i a nt i s s u et h a tu s el - c y s t e i n ea st h em a i ns u b s t r a t e 【5 - 7 1 r r 一1 lh ee x p r e s s l o no ft h e s et w oe n z y m e si s t i s s u e t y p es p e c i f i c l 4 h 2 si s d i r e c t l yp r o d u c e di nm y o c a r d i a lt i s s u e a r t e r i a la n d v e n o u st i s s u e sb yc e s 川d l 。p r o p a r g y l g l y c i n e ( p p g ) i s a s p e c i f i ci n h i b i t o ro fc e s ，w h i c hc a ns u p p r e s se n d o g e n o u sh 2 s p r o d u c t i o n t l i 】 i ti sn o wc l e a rt h a th 2 sh a sv a s o r e l e x a n tf u n c t i o na n dt h e v a s c u l a re f f e c to fh 2 si s e x e r t e db yd i r e c t l y a c t i v a t i n gk a 伸 c h a n n e l sa n dh y p e r p o l a r i z i n gm e m b r a n ep o t e n t i a lo fv a s c u l a r 研究论文 s m o o t hm u s c l ec e l l s ( v s m c s ) 9 1 s o m er e s u l t sd e m o n s t r a t et h a t t h ev a s c u l a re f f e c to fh 2 si s p a r t i a l l ym e d i a t e db yaf u n c t i o n a l e n d o t h e l i u ma n dd e p e n d e n to nt h ee x t r a c e l l u l a rc a l c i u me n t r y b u ti n d e p e n d e n to ft h ea c t i v a t i o no ft h ec g m p p a t h w a yu n l i k e n oa n dc o 【1 2 】 h 2 si st h ef i r s ti d e n t i f i e dg a s e o u so p e n e ro fk a l l pc h a n n e l s i nv s m c s t 9 1 i th a sb e e nk n o w nt h a tk 脚c h a n n e l sa r ew i d e l y d i s t r i b u t e di nt h em y o c a r d i u m i ti sa l s ok n o w nt h a to p e n i n go f t h ek a n , c h a n n e l si nm y o c a r d i u mi sa ni m p o r t a n te n d o g e n o u s c a r d i o p r o t e c t i v em e c h a n i s m t1 3 1 r e c e n t l y , h 2sh a sb e e nf o u n dt o p l a y an e g a t i v e i n o t r o p i c r o l ei nt h eh e a r ta n dc o u l db e e n d o g e n o u s l yp r o d u c e db yt h ec a r d i a ct i s s u ea sap h y s i o l o g i c a l c a r d i a cf u n c t i o nr e g u l a t o r a n dt h i se f f e c to f h z si sm e d i a t e db y k a n , c h a n n e lp a t h w a y 【引i na d d i t i o n ，o u r l a b o r a t o r y d e m o n s t r a t e dt h a t h 2 s c o u l da f f e c t e l e c t r o p h y s i o l o g y o f m y o c a r d i u m a n de x e r t n e g a t i v ec h r o n o t r o p i c a c t i o no n p a c e m a k e rc e l l si ns i n o a t r i a ln o d e s t h e s ee f f e c t sa r ed u et oa n i n c r e a s ei np o t a s s i u me f f i u xt h r o u g ho p e n i n gk a r l , c h a n n e l sa n d ad e c r e a s ei nc a l c i u mi n f l u x 【1 4 1 t h e p r e s e n ts t u d y w a su n d e r t a k e nt o i n v e s t i g a t e t h e e l e c t r o p h y s i 0 1 0 9 i c a l e f f e c t so fh 2 so ni s c h e m i c g u i n e ap i g p a p i l l a r ym u s c l ea n dt h eu n d e r l y i n gm e c h a n i s m ( s ) t h ea i mo f o u r s t u d yw a st oo b s e r v et h ee l e c t r o p h y s i o l o g i c a le f f e c t so fh 2 s o ni s c h e m i cg u i n e ap i g p a p i l l a r ym u s c l e sa n de l u c i d a t e t h e m e c h a n i s m ( s ) i n v o l v e d l l 研究论文 m a t e r i a l sa n dm e t h o d s 1e l e c t r i c a lm e a s u r e m e n t s g u i n e ap i g so fe i t h e rs e x ( w e i g h i n g3 0 0 4 0 0 9 ，p r o v i d e d b y e x p e r i m e n t a la n i m a lc e n t e ro fh e b e ip r o v i n c e 、) w e r ek i l l e d w i t has i n g l eb l o wo nt h eh e a da n dt h eh e a r tw a sr e m o v e da n d p l a c e di nc o l d ( 0 - 4 。c ) t y r o d e ss o l u t i o n t h ep a p i l l a r ym u s c l e w a sc u tf r o mf i g h tv e n t r i c l ea n dt h e np i n n e do r lat h i ns i l i c o n d i s ca tt h eb o t t o mo fap e r f u s i o nc h a m b e r t h ep r e p a r a t i o nw a s p e r f u s e d ( 4m l m i n ) w i t ht y r o d e ss o l u t i o n ( 3 5 5 0 5 ) o ft h e f o l l o w i n gc o m p o s i t i o n ( i nm m o l l ) ：n a c l118 0 ，n a h c 0 32 5 0 ， k c l 4 7 ，m g s 0 41 6 ，c a c l 22 5 ，k h 2 p 0 41 2 ，a n dg l u c o s e1 1 1 t h et y r o d e ss o l u t i o nw a ss a t u r a t e db yam i x t u r eo f9 5 o ，a n d 5 c 0 2a n dt h ep hw a s7 2 0 0 0 5 a n dt h e nt h ep a p i l l a r y m u s c l ew a s p e r f u s e d ( 4m l m i n ) w i t hs i m u l a t ei s c h e m i cs o l u t i o n ( 3 5 5 o 5o c ) o ft h ef o l l o w i n gc o m p o s i t i o n ( i nm m o l l ) ：n a c l 1 2 3 0 ，k c l1 0 ，n a h c 0 32 0 。0 ，m g s 0 40 5 ，n a i l 2 p 0 40 9 ，c a c l 2 2 7 ，a n dn og l u c o s e t h es i m u l a t ei s c h e m i cs o l m i o nw a s s a t u r a t e db yam i x t u r eo f9 5 n 2