维生素类药物的分析(2).ppt

第十四章维生素类 药物的分析,公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来的维A。 1600年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。 1747年-苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C。 1831年-胡萝卜素被发现。 1911年-波兰化学家丰克为维生素命名。 1915年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的,1916年-维生素B被分离出来。 1917年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后 断定这种病是缺乏维D引起的。 1920年-发现人体可将胡萝卜素转化为维生素A 1922年-维E被发现。 1928年-科学家发现维B至少有两种类型。 1933年-维E首次用于治疗。 1948年-大剂量维C用于治疗炎症。,1949年-维B3与维C用于治疗精神分裂症。 1954年-自由基与人体老化的关系被揭开。 1957年-Q10多酶被发现。 1969年-体内超级抗氧化酶被发现。 1970年-维C被用于治疗感冒。 1993年-哈佛大学发表维生素E与心脏病关系的研 究结果。,VitA、D2、D3、 E、K1 等,脂溶性,水溶性,VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。,分类,按溶解度分,第一节维生素A的分析,分类：A1、A2 、A3 A1存在于动物肝脏、血液和眼球的视网膜中，又称 为视黄醇,天然维生素A主要以此形式存在。脂溶性 淡黄色片状结晶，熔点64 。 A2主要存在于淡水鱼的肝脏中。 维生素A2的化学 结构与A1的区别只是在-白芷酮环的3,4位上多一 个双键。,功能：,维持视觉： 维生素A可促进视觉细胞内感光色素的形成。维生 素A可调试眼睛适应外界光线的强弱的能力，以降 低夜盲症和视力减退的发生，维持正常的视觉反应, 有助于对多种眼疾(如眼球干燥与结膜炎等)的治疗。 2. 促进生长发育： 与视黄醇对基因的调控有关.视黄醇也具有相当于类 固醇激素的作用，可促进糖蛋白的合成。促进生长、 发育，强壮骨骼，维护头发、牙齿和牙床的健康。,3. 维持上皮结构的完整与健全,视黄醇和视黄酸可以调控基因表达，减弱上皮细胞 向鳞片状的分化，增加上皮生长因子受体的数量。 保持皮肤湿润，防止皮肤黏膜干燥角质化，不易受 细菌伤害，有助于对粉刺、脓包、疖疮，皮肤表面 溃疡等症的治疗 。 4. 加强免疫能力 维生素A有助于维持免疫系统功能正常，能加强对 传染病特别是呼吸道感染及寄生虫感染的身体抵抗 力；有助于对肺气肿、甲状腺机能亢进症的治疗。,富含维生素A的食物,梨、苹果、枇杷、樱桃、香蕉、桂圆、杏子、荔枝、西瓜、甜瓜。,水果类,蔬菜类,马齿菜、大白菜、荠菜、番茄、茄子、南瓜、黄瓜、菠菜,植物类,绿豆、大米、胡桃仁,一、结构与性质 （一）结构,R: -H 维生素A醇 -COCH3 维生素A醋酸酯 -COC15H31 维生素A棕榈酸酯,一个共轭多烯侧链的环己烯，有立体异构体,醋酸酯 相对生物效价 维生素A 325.5 100% 新维生素Aa 328 75% 新维生素Ab 320.5 24% 新维生素Ac 310.5 15% 异维生素Aa 323 21% 异维生素Ab 324 24%,（二）性质 1、具紫外吸收：在325328nm间有最大吸收 2、不稳定性： （易氧化变质） 易被空气中氧或氧化剂氧化 易被紫外光裂解 在加热和金属离子存在时，更易氧化变质，生成无生物活性的环氧化物、维生素A醛及维生素A酸,或有金属离子存在时氧化,3、能与三氯化锑呈色：产生不稳定的蓝色。 4、溶解性： 维生素A能与氯仿、乙醚、环己烷或石油醚任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶,二、鉴别试验 （一）三氯化锑反应 原理：维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中，即显蓝色，渐变成紫红色。 注意：鉴别在无水、无醇（乙醇可以和碳正离子作用使其正电荷消失）条件下进行。,CHCl3,水中水解为氯化氧锑,（二）紫外吸收光谱：,5个共轭双键,6个共轭双健,去水VitA（VitA3）,VitA,（三）薄层色谱 吸附剂：硅胶G 展开剂：环己烷-乙醚 (80:20) 点样量：各2l，不必挥散溶剂，立即展开 显色剂：三氯化锑溶液 结 论：比较供试品溶液和对照品溶液所显蓝色斑点位置,BP 杂质对照品法 显色剂 三氯化锑 USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值,立体异构体 氧化降解产物 合成中间体 副产物,UV法,（一）,维生素A2 维生素A3 环氧化物 维生素A醛 维生素A酸,1、方法建立的依据,三点校正法,2、测定原理 方法的依据： 主成分：在325 328nm有吸收 杂质：在310340nm范围内 吸收呈一条直线，且随波长的增大，吸收度变小。 物质对光的吸收具有加和性。,3、三点波长的选择 （1）第1点：选择维生素A的最大吸收波长(1) （2）第2点和第3点：在max两侧各选一点 等波长差法：3-1=1-2 测定VA醋酸酯，规定： 1=328 nm，入2=316nm，3=340nm 等吸收度法：A2=A3=6/7A1 测定VA醇，规定： 1=325 nm，2 =310 nm, 3 =334 nm,4、杂质吸收 (1)维生素A2和维生素A3 (2)维生素A的氧化产物为环氧化物、维生素A醛和维生素A酸。 (3)维生素A在光照下产生的无生物活性的聚合物鲸醇。 (4)维生素A的异构体。 (5)合成时产生的中间体。 (1)(5)这些杂质在310340 nm波长范围内有吸收，因此，在测定维生素A含量时，必须考虑这些杂质的干扰。三点校正法可以消除这些杂质的影响。,5、测定方法,（1）基本步骤: 第一步 A的选择 选择依据： 所选A值中杂质的干扰已被基本消除,第二步：求百分吸收系数，,注意： C 为混合样品的浓度,第三步 求效价,换算因数由纯品计算而得：,第四步：求标示量,(2)第一法等波长差法，高纯度VA醋酸酯 测量方法： 计算各波长下的吸收度与328nm波长下的吸 收度的比值,判断 是否在326329nm之间,在326329nm之间,改用第二法,是,否, 求算 并与规定值比较,规定值 差值,判断前提；最大吸收波长在326329nm之间,第二法,第二法,讨 论,VA醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法（即代数法）推导而来；VA醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（几何法或称6/7定位法）推导而来。 在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。在测定前务必要校正波长。测定的样品应不得少于两份。,（3）第二法皂化法：适用于维生素A醇,加热回流,判断max是否在323327nm之间,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算,是,否,0.73 进一步判断 0.73，杂质含量过高,0,3%,3%,二、三氯化锑比色法,优点 简便 快速,max 618nm620nm,标准曲线法,（三）高效液相色谱法,RP-HPLC同时测定人血清中VitA和VitE的含量,1、仪器与分析条件：HPLC-UV、C18 (3003.9 mm）、甲醇水（96：4）、流速：1.2 ml/min、检测波长：08min (330 nm), 8 min后(292 nm） 内标：维生素A醋酸酯,血清样品的制备：LLE法制备 分析方法的建立： 线性 LOD Recovery Precision Chromatogram:,作业：,维生素AD胶丸中维生素A醋酸酯的测定方法如下：取内 容物0.0410g，加环己烷溶解并稀释至50ml，摇匀，取出 2ml加环己烷溶解并稀释至25ml，摇匀，在下列5个波长 处测定吸光度如下： 已知：平均丸重（平均内容物重）=0.0910g，标示量 10000IU/丸，求维生素A醋酸酯的标示量%？,第二节 维生素Bl的分析,二、结构及性质 (一)结构,氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),HCl,Cl-,存在于米糠、麦麸和酵母中 人工合成,(二)性质 （1）溶解性： 在水中易溶，水溶液显酸性 在乙醇中微溶，在乙醚中不溶 （2）具有紫外吸收：max=246nm（HCl溶液） （3）硫色素反应：,具有荧光,（4）碱性 可与酸成盐 与生物碱沉淀试剂反应，生成组成恒定的沉淀。 （5）氯化物特性,嘧啶环 伯胺 噻唑环 季铵,碘化汞钾、三硝基酚、碘溶液、硅钨酸等,三、鉴别试验 (一)硫色素反应维生素B1的专属反应 原理：,硫色素,【O】,注意事项：,(1)硫色素反应为维生素Bl的专属反应，虽非定量完 成，但在一定条件下形成的硫色素与维生素Bl浓度 成正比，且回收恒定。故可用于维生素Bl及其制剂 的含量测定。 (2)本法为维生素B1所特有，故不受氧化破坏产物的 干扰，测定结果较为准确。但操作繁琐，且荧光测 定受多种因素干扰； (3)本法中使用的氧化剂，除铁氰化钾外、尚可用氯 化汞或溴化氰。其中，溴化氰能将维生素Bl完全定 量地氧化为硫色素，在较宽的浓度范围内与荧光强 度成正比，且尿液中某些代谢产物不干扰测定。故 亦适用于临床体液分析。,VitB1,H+,H+,H+,H+,S元素反应,Cl-反应,NaOH,四、含量测定 非水溶液滴定法（原料）和紫外分光光度法（制剂）、 硫色素荧光法（USP（24）。 （一）非水滴定法 1、原理： 含有两个碱性的已成盐的伯胺和季铵基团，在非水溶液中可与高氯酸作用，用于含量测定。,喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）,2、方法： 用冰醋酸作溶剂，滴加醋酸汞， 以喹哪啶红亚甲蓝混合物作指示剂， 高氯酸作滴定液,3、注意事项： （1）加醋酸汞。 （2）滴定度为16.86mg/ml。 VB1有两个碱性基团，与高氯酸反应的摩尔比为12 （3）非水容量法可用于弱酸性特别是弱碱性药物及其盐类的含量测定。 （4）此处仅适用于维生素B1的原料药含量测定。,（二）紫外分光光度法 1、原理：,2、VB1片的含量测定 测定方法： 以盐酸溶液 (91000)作溶剂，在246nm测 定吸收度，按Cl2Hl7ClN4OSHCl的吸收系数 (百 分吸收系数)为421计算，即得。,片剂、注射剂,= 421,（每片）相当于标示量的%=,A = ECL,规格 g/片,g/100ml,g,ChP,（每ml）相当于标示量的%=,规格 g/ml,ml,差示分光光度法,简称A法 取两份相等的供试液，一份加酸，另一份加碱或缓冲 液或其他能够发生某种化学反应的试剂，有时也可不加任 何溶液，然后将两者分别稀释至同样浓度，一份置样品池 中，另一份置参比池中，于适当波长处，测其吸收度的差 值（A值） 在供试溶液的一定浓度范围内，A值与浓度C之间呈 线性关系。 优点：在不同pH介质中，或经适当化学反应后，供试物发 生了特征性的光谱变化，而赋形剂或其他共存物质不受pH 条件或化学试剂的影响，未引起光谱变化，从而消除了它 们的干扰。,差示分光光度法,A法使用： 1、利用最大吸收波长进行药物的测定：紫外光谱对pH十 分敏感时，可测得A（碱-酸）或A（pH7-酸）。 2、利用最大吸收与最小吸收之差（即振幅）进行药物测 定：某些药物共存物在某pH范围内的光谱与pH无关（即 吸收度不变）。而主药有最大和最小吸收，两者差值与 主药浓度成正比。,差示分光光度法,A法使用： 3、利用干扰杂质等吸收波长进行测定：于干扰物的等吸 收波长处进行测量，如测得供试物的相应吸收度，即可消 除共存物的干扰。 4、利用最小吸收波长(lmin)处的增色效应进行测定：某 些药物在碱性和酸性溶液中吸收重叠，但吸收值不同。但 在碱性或酸性溶液中于lmax或lmin处可产生增色效应，利 用此效应可测定药物浓度。,通过与对照品荧光强度的比较即可测得供试品含量,2、实验操作 40 ml具塞试管3支对照品溶液5 ml；其中2支加入氧化试剂3.0 ml，再迅速加入异丁醇20 ml，振摇。第三支试管中加入3.5 mol/l的NaOH，同法操作为空白。 另取三支试管加入供试品，同法操作。 各试管中加入无水乙醇2 ml，分取异丁醇，进行荧光测定。,3、结果计算,式中：A和S分别为供试品和对照品溶液测得的平均荧光读数； b和d则分别为其相应的空白读数； 0.2为对照品溶液的浓度（g/ml）； 5为测定时对照品溶液的取样体积（ml）。,（1）灵敏度高，线性范围宽 （2）代谢产物不干扰，适用于体液分析 （3）该法适用于VitB1的制剂含量分析 （4）可用BrCN为氧化剂，反应定量完全，适合于生物样本分析,第三节维生素C的分析,功效： 1、促进胶原蛋白的合成 2、治疗坏血病 3、预防牙龈萎缩、出血 4、预防动脉硬化 5、抗氧化剂 6、治疗贫血 7、防癌 8、保护肝脏的解毒能力和细胞的正常代谢 9、提高人体的免疫力 10、提高机体的应急能力,维生素C有四种光学异构体，其中以L-构 型右旋体的生物活性最强。 药典：维生素C原料、片剂、泡腾片、颗粒 剂和注射剂,一、结构及性质 (一) 结构,具有烯二醇结构和内酯环 在C4、C5有两个手性碳原子 性质活泼 具有旋光性,（二）性质 1、溶解性： 水中易溶 乙醇中略溶，在氯仿或乙醚中不溶 水溶液呈酸性,C3OH的 pKa = 4.17,C2OH的 pKa = 11.57,一元酸（与碳酸氢钠成盐）,2、具有酸性,烯二醇结构 （抗坏血酸）,二酮基结构 （去氢抗坏血酸）,烯二醇结构,o -2H,+2H,3、强还原性,有活性,有活性,无活性,L-二酮古洛糖酸,L(+)抗坏血酸 活性最强,手性C（C4、C5）,*,*,4、光学活性,与碱反应,内酯环,5、水解性,糖类的显色反应,50,结构与糖类相似,6、糖类的性质,7、紫外吸收特性,二、鉴别试验 （一）利用VC所具有的强还原性,1、与硝酸银反应 (1)方法：取本品0.2g，加水l0ml溶解。取该溶液5m1，加硝酸银试液0.5m1，即生成银的黑色沉淀。 (2)原理：,烯二醇基，具强还原性,2、与2，6二氯靛酚反应 (1)方法：取本品0.2 g，加水l0ml溶解。取该溶液5m1，加2，6二氯靛酚试液12滴，试液的颜色即消失。,原理：,氧化型,玫瑰红色,（玫瑰色）,（无色）,3、与其他氧化剂反应 亚甲蓝或高锰酸钾 试剂褪色 碱性酒石酸铜 砖红色沉淀 磷钼酸 钼蓝,或盐酸,吡咯,50,（二）利用维生素C所具有糖类性质的反应,H+,吡咯,（三）利用VC所具有的紫外吸收特性 维生素C在0.0lmol/L盐酸液中，在243nm 波长处有惟一的最大吸收，利用此特征进行鉴别。 BP中采用该法，并规定其吸收系数应为545585之间 （四）薄层色谱,三、杂质检查 1.溶液的澄清度与颜色：有色杂质 分光光度法 2.铁、铜离子：原子吸收分光光度法 3.草酸的检查：,四、含量测定 具有较强的还原性，可被不同氧化剂定量氧化。 （一）碘量法 1、原理,指示剂 淀粉指示液,H+,取本品约0.2g，精密称定，加新 沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶 解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴 定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝 色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液 (0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6,3、注意事项 防止样品氧化 减慢VitC被O2氧化速度 用新沸冷水作溶剂 赶走水中O2 应用范围广 对维生素C原料、维生素C片、维生素C泡腾片、维生素C注射液、维生素C颗粒剂等的含量测定均采用。 差别仅在前处理：为了消除制剂中辅料对测定的干扰，滴定前要作些必要的处理。,4、附加剂干扰的排除,片剂 滑石粉 过滤,USP,JP,（2）快速滴定 2min内,（1）酸性环境 HPO3-HAc,稳定VitC,防止其他还原性物质干扰,（3）剩余比色测定,（定量过量）,（测剩余染料）,（4）缺点,需经常标定,贮存一周,干扰多 氧化力较强,（三）高效液相色谱法,人血浆中VitC浓度的HPLC法测定,1、色谱条件 2、标准溶液的制备 3、血浆样品的处理：酸性溶液沉淀蛋白法 4、方法学考察 5、测定,是抗佝偻病维生素的总称。收载有：维生 素D2、D3原料药、维生素D2胶丸和注射剂、 维生素D3注射剂等。,第四节 维生素D的分析,维生素D3胆骨化醇,一、结构与性质,维生素D2骨化醇,24,（一）结构,（二）性质： 1、性状：D2、D3无臭、无味，遇光易变质 2、溶解性：在植物油中略溶，水中不溶 3、不稳定性：含有多个烯键，不稳定，易氧化变质降低效价，毒性增加。 4、旋光性：维生素D2有6个手性碳原子 维生素D3有5个手性碳原子 5、显色反应：甾醇类化合物共有 6、紫外吸收特性,二、鉴别试验,（一）显色反应,2.三氯化锑反应 橙红色渐变粉红,3.三氯化铁反应 橙黄色,4.二氯丙醇和乙酰氯反应 绿色,渐变,渐变,迅即,迅即,（二）比旋度鉴别,维生素D2,维生素D3,溶 剂,浓 度,比旋度值,无水乙醇,无水乙醇,40mg/ml,5mg/ml,+102.5+107.5,+105+112,注意事项：应于容器开启30分钟内取样 在溶液配制后30分钟内测定,（三）区别反应：,以96%乙醇为溶剂， 加乙醇和85%硫酸,D2显红色，在570nm处有最大吸收,D3显黄色，在495nm处有最大吸收,4.其他方法： TLC、HPLC、制备衍生物测熔点。,三、杂质检查,维生素D2中麦角甾醇的检查：加洋地黄皂苷溶液，混合，放置18h不得发生浑浊或沉淀。,前维生素D的光照产物,四、含量测定方法,中国药典 采用正相高效液相色谱法(NP-HPLC）测定维生素D的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯。 根据样品的具体情况按以下三个方法进行分析。,第一法：用于无维生素A醇及其它杂质干扰的情况 系统适用性试验：测定重复性和分离度。,固定相：硅胶 流动相：正己烷-正戊醇（997：3）,照射,第二法：用于有杂质的干扰的情况，步骤如下： 1皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸发除乙醚、制备供试液A。 2净化：供试液A经液相色谱分离，准确收集含有维生素D及前维生素D混合物的全部流出液，制备成供试液B。 固定相：ODS 流动相：甲醇-乙腈-水（50：50：2） 3含量测定：取供试液B按第一法测定。,第三法：用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况 1制备供试液：取供试液A，净化，水浴加热，正已烷溶解，得供试液C。 制备对照液：对照品储备液（异辛烷溶解），稀释、加热。 2含量测定：在第一法的色谱条件下，交替精密进样。 对照液和供试液，按外标法定量,讨论 1、采用的是正相高效液相色谱法 2、测定过程中应避免VitD的氧化 3、皂化应剧烈振摇，水浴温度40，提取溶剂大多采用己烷或戊烷以消除苯的毒性 4、若供试品中没有VitA醇及其它杂质干扰时，可以直接进样分析 5、注意色谱系统适用性样品VitD、前VitD的制备方法,一、结构及性质 (一)结构 维生素E为苯并二氢吡喃醇衍生物，苯环上有一个乙酰化的酚羟基，故又称生育酚醋酸酯。有、和四种异构体，其中以异构体的生理作用最强。,第五节 维生素E的分析,dl生育酚醋酸酯,(二)性质 1、溶解性 微黄色或黄色透明的粘稠液体 易溶于乙醇、丙酮、乙醚、石油醚中，不溶于水 2、具有紫外吸收：苯环上有酚羟基 VE的0.lmg/ml无水乙醇溶液在284nm波长处测定吸收度时，其吸收系数为41.045.0。,3、易水解氧化： 在无氧或其他氧化剂存在时，对热稳定 在有氧或其他氧化剂存在时，遇光、空气可被氧化,二、鉴别试验 （一）硝酸反应 原理：,橙红色,（橙红色）,生育红,HNO3,强氧化剂,（二）三氯化铁反应,= 41.045.5,max = 284nm,min = 254nm,0.01%无水乙醇中,薄层板 硅胶G,展开剂 环己烷 -乙醚（4 ：1）,显色剂 硫酸（105 5）,结果各物质的Rf值分别为： -生育酚为0.5 -生育酚醋酸酯为0.7 -生育酮为0.9,（四）TCL法,三、特殊杂质 1、酸度 目的：制备过程引入的游离醋酸 方法：以NaOH滴定液（0.1mol/L0.5ml）体积控制。 2、游离生育酚的检查 原理：利用游离生育酚的还原性，用硫酸铈滴定液 (0.0lmol/L)滴定，以二苯胺为指示剂，杂质的限量为2.15%。,硫酸铈滴定液（0.01mol/L） 二苯胺（亮黄灰紫）,（二）试剂,（M生育酚= 430.8）,取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过 1.0ml。,2.15,药典规定,消耗硫酸铈液（0.01mol/L）1.0ml,若硫酸铈液浓度不是0.01mol/L， 应重新计算硫酸铈的消耗量,（一） GC法（法定方法）,GC特点,选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好,挥发性低、不稳定、极性强衍生化易受样品蒸气压限制,中国药典（2005年版）规定：VE的原料药、片剂、注射剂、胶丸、粉剂等都采用气相色谱法。 1、色谱条件与系统适用性试验 载气：氮气 固定相：硅酮 (OV-I7) 涂布于经酸洗并硅烷化处理的硅藻土或高分子多孔小球上，涂布浓度为2%;,柱温：265; 进样口温度高于柱温3050 检测器：氢火焰离子化检测器; 柱效：理论塔板数按维生素E峰计算应不低于500 分离度：维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于2 2、校正因子测定 内标：正三十二烷，加正己烷溶解稀释成含 1.0mg/lml 进样量：131 3、测定方法 取131注入气相色谱仪，测定，计算，即得。,(二)HPLC用外标法可以测定dl生育酚 1、色谱条件： 色谱柱：内径4mm,长1530Cm的不锈钢柱;填充以粒径5l0m的十八烷基硅烷键合硅胶固定相 流动相：甲醇-水 (49:1) 紫外检测器;波长为292nm 维生素E比醋酸维生素E先出峰，且二峰的分离度应大于2.6。 需做重现性试验，即重复试验3次，峰高的相对标准偏差小于0.8%。,2、测定方法： 取供试品液和对照品液各20l注入高效液相色谱仪 中，记录峰高HX和Hr 3、计算： 供试品中维生素E的量mx(mg)= 式中：mr为生育酚对照品的量， Hx、Hr为生育酚供试品、对照品中检测得峰高。,（三）荧光分光光度法,1、药物本身具有荧光 2、溶剂产生的拉曼光谱影响测定方法的灵敏度和准确度 3、采用同步荧光扫描法测定，消除干扰,同步荧光扫描法测定血清中VitE的含量,1、仪器：荧光分光光度计 2、样品液的制备:样品测定管U、标准管S、空白管B 3、测定方法：测定Fu、Fs、Fb 4、计算：,Discussion,激发波长 295 nm,发射波长325 nm,普通荧光,同步荧光,选择合适的波长差来消除溶剂的干扰,第六节复方制剂中多种维生素的分析,离子对HPLC法测定多种维生素,以能溶解于甲醇和水的樟脑磺酸为离子对试剂，以二巯基丙烷磺酸钠为抗氧剂，采用HPLC法同时测定多种Vit的含量,1、色谱条件：色谱柱、流动相、检