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肿瘤基因研究解决方案,上海吉凯基因化学技术有限公司,2011年10月,不同类型的合作者对应的研究阶段,肿瘤 基因 功能 机制,已确定肿瘤研究方向，手头有组织样 本，但未确定目的基因的研究者 已确定目的基因或者 做过表达芯片，有候选基因列表 已找到基因功能 明确基因发挥功能的机制,不同阶段研究者的推进过程所涉及产品,肿瘤 基因 功能 机制,芯片产品,已确定肿瘤研究方向，手头有组织样 本，但未确定目的基因的研究者 已确定目的基因或者 做过表达芯片，有候选基因列表 已找到基因功能 明确基因发挥功能的机制,基因芯片,让我们用心，换取您的放心！,蛋白芯片,让我们用心，换取您的放心！,组织芯片,IHC： Immunohistochemistry,让我们用心，换取您的放心！,不同阶段研究者的推进过程所涉及产品,肿瘤 基因,芯片产品 工具产品 功能检测,已确定肿瘤研究方向，手头有组织样 本，但未确定目的基因的研究者 已确定目的基因或者 做过表达芯片，有候选基因列表,功能 机制,已找到基因功能 明确基因发挥功能的机制,肿瘤功能基因研究技术,传统研究功能基因是把基因转入细胞看功能表型,1、细胞内高表达该基因时，外源表达的基因超过了细 胞内所需的量而体现不出功能。,2、外源高表达基因对细胞也是个刺激压力，会产生假 阳性和假阴性。,当RNA干扰技术出现后，给科研工作者提供了一个很好研究 内源基因的工具。,让我们用心，换取您的放心！,2006年的诺贝尔生理学奖获得者：,Andrew Z. Fire Craig C. Mello,9,基因沉默的分子机制模型,Long dsRNA PTGS,TGS,dsRNA RISC,mRNA cleavage,Chromatin modification,Translation arrest,RNA介导的基因沉默 让我们用心，换取您的放心！,RNAi中使用的siRNA,让我们用心，换取您的放心！,慢病毒包装感染,大鼠原代培养 Glia细胞,大鼠原代培养 心肌细胞,大鼠原代培养 神经元,人骨髓间充质 干细胞,稳定细胞株,hepG2单克隆细胞株 让我们用心，换取您的放心！,L02单克隆细胞株,SMMC 7721单克隆细胞株,Lentivirus 用于肿瘤基因功能研究,肿瘤研究中 肿瘤细胞注 射入动物体 内成瘤 让我们用心，换取您的放心！,慢病毒感染 肿瘤细胞 慢病毒 瘤内注射,慢病毒感染后的 肿瘤细胞注射入 动物体内成瘤 肿瘤相关 基因功能 离体研究,肿瘤相关基因 功能在体研究,功能检测,让我们用心，换取您的放心！,不同阶段研究者的推进过程所涉及产品,肿瘤 基因 功能,芯片产品 工具产品 功能检测 芯片产品,已确定肿瘤研究方向，手头有组织样 本，但未确定目的基因的研究者 已确定目的基因或者 做过表达芯片，有候选基因列表 已找到基因功能,机制,明确基因发挥功能的机制,不同阶段研究者的推进过程所涉及产品,肿瘤,芯片产品,已确定肿瘤研究方向，手头有组织样 本，但未确定目的基因的研究者,基因 工具产品 功能检测 功能 芯片产品 机制,?,已确定目的基因或者 做过表达芯片，有候选基因列表 已找到基因功能 明确基因发挥功能的机制,不同阶段研究者的推进过程所涉及产品,肿瘤,芯片产品,已确定肿瘤研究方向，手头有组织样 本，但未确定目的基因的研究者,基因 工具产品 功能检测 功能 芯片产品 机制,?,表达芯片获得候选基因列表 已找到基因功能 明确基因发挥功能的机制,不同阶段研究者的推进过程所涉及产品,肿瘤 基因,芯片产品,已确定肿瘤研究方向，手头有组织样 本，但未确定目的基因的研究者 已确定目的基因或者 表达芯片获得候选基因列表 做过表达芯片，有候选基因列表,功能,工具产品 功能检测,?,已找到基因功能,!,高通量筛选,芯片产品,机制,明确基因发挥功能的机制,肿瘤功能基因高通量筛选的基本要素, 基因操作工具, 功能实验方法, 数据采集分析系统,1 Cell. 2006 Mar 24;124(6):1283-98.,吉凯基因肿瘤功能基因组学研究,平台构成及其优势, 基因操作工具：高覆盖lentivirus介导的RNA干,扰与过表达文库, 功能检测方法：增殖、凋亡、转移、血管新,生等功能实验方法, 高通量数据采集分析系统：Thermo cellomics,arrayscan高通量筛选系统,吉凯基因肿瘤功能基因组学研究,平台构成及其优势, 高覆盖lentivirus介导的RNA干扰与过表达文库：,RNAi文库覆盖18738个基因 过表达文库覆盖14592个基因 两库同时覆盖12176个基因,国内最早的RNAi服务提供者，提供高效，快速，经,验证，低成本的基因操作工具。,吉凯基因肿瘤功能基因组学研究,平台构成及其优势, 功能检测方法：增殖、凋亡、转移、血管新生等,功能实验方法,1.多年不断优化验证以及研发，构成了完整的肿瘤,功能试验方法平台,2.累积8年的科研实验服务经验，总数超过5000个 的科研服务合同经验，每年超过2000个以上的科 研服务合同的执行能力,针对肿瘤基本功能的,常规实验检测方法,生长：细胞计数，MTT，克隆形成，细胞周期(PI 染色)检测,凋亡：ANNEXIN5染色，PI染色，凋亡相关蛋白的 检测,转移：细胞形态的变化，运动能力变化，相关蛋 白检测,血管新生：血管内皮迁移，增殖，体外血管形成 试验,吉凯基因肿瘤功能基因组学研究,平台构成及其优势, 高通量数据采集分析系统：Thermo cellomics,arrayscan高通量筛选系统,1.功能试验的数据量化研发（快速准确提取出最能反,应实验结果特征的量化信息）,2.功能试验与高通量仪器的整合（将功能试验调整到,适合高通量仪器的检测模式）,3.前期1000个基因的高通量功能筛选（高通量平台的,完整运转，历时1年时间的磨合调整）,基于芯片的基因功能高通量筛选流程,细胞或组织基因芯片 （I） 文献分析判断（II） 表达验证（细胞，组织） （III ） 高通量功能筛选（IV） 机制筛选(干扰后表达芯片） （IV） 让我们用心，换取您的放 心！,2000 Genes 60 Genes 30Genes 45 Genes ？ Genes,高通量具体实施案例,文章示例,Cell, Vol. 117, 927939, June 25, 2004,Twist, a Master Regulator of Morphogenesis, Plays an,Essential Role in Tumor Metastasis,Figure 1. Microarray Analysis Identified Twist to Be Upregulated during the Metastatic Prog,Figure 3. Suppression of Twist Expression Inhibited the Ability of 4T1 Cells to Metastasize from the Mammary Gland to Lung,Figure 4. Suppression of Twist Expression Reduced the Presence of 4T1 Cells in the Blood Circulation,Figure 5. Twist Induces an EMT and Cell Migration,Figure 6. Expression of Twist Results in Repression of E-Cadherin Transcription,Figure 7. Expression of Twist in Human Tumor Cell Lines and in Human Breast Carcinomas,该文章关键节点：,1.Figure1：由芯片结果找出功能基因twist 2.Figure6：找出受调控的下游相关基因,及功能验证,How？,Lucky？ Or,Something important but not show？,文章关键推进步骤的解决,肿瘤 基因,芯片产品,已确定肿瘤研究方向，手头有组织样 本，但未确定目的基因的研究者 表达芯片获得候选基因列表,功能,?,找到基因功能,机制,?,表达芯片获得下游变化基因列表,?,文章关键推进步骤的解决,肿瘤,芯片产品,已确定肿瘤研究方向，手头有组织样 本，但未确定目的基因的研究者,基因 功能,高通量筛选,!,表达芯片获得候选基因列表 找到基因功能twist,机制,芯片产品,!,表达芯片获得下游变化基因列表,!,高通量筛选,文章关键推进步骤的具体实验,20,使用吉凯基因的产品发表的文献,Publication number,Distribution,140,5IF值 10 9%,IF值 10 5%,IF值 1 8%,120 100 80,3IF值 5 24%,2IF值 3 31%,1IF值 2 23%,60,40,Nature Cell Nature medicine,0,2005,2006,2007,2008,2009,2010,Cancer cell Neuron,J Biol Chem Mol Cell Biol ,Nat Med. IF= 27.136 Treatment of cerebral ischemia by disrupting ischemia-induced interaction of nNOS with PSD-95. Zhou L, Li F, Xu HB, Luo CX, Wu HY, Zhu MM, Lu W, Ji X, Zhou QG, Zhu DY. 2010 Dec;16(12):1439-43. Epub 2010 Nov 21.,产品/服务 过表达慢病毒,领域 细胞生物学,目的细胞 皮层神经元细 胞 （原代培养）,基因名称 Human nNOS-N1-133,后续检测 Western Blot、 小鼠脑皮层注 射,让我们用心，换取您的放心！,Nat Cell Biol. IF= 19.527 Cytosolic FoxO1 is essential for the induction of autophagy and tumour suppressor activity. Zhao Y, Yang J, Liao W, Liu X, Zhang H, Wang S, Wang D, Feng J, Yu L, Zhu WG. 2010 Jul;12(7):665-75. Epub 2010 Jun 13.,产品/服务 慢病毒介导的 RNAi,领域 肿瘤生物学,目的细胞 肺癌H1299、 结直肠癌 HCT116、 子宫颈癌HeLa 细