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中国药典2010年版抗生素品种增修订概况,抗生素品种增修订概况,抗生素品种收载概况,抗生素类药标准增修订要点,抗生素品种分类介绍,一、抗生素品种收载概况,一、抗生素品种收载概况,临床应用广、销售额居前 临床不良反应、不良事件比例高 稳定性差 质量控制 与时俱进 质量标准 安全有效,二、 抗生素类药标准增修订要点,1.鉴别项下：HPLC与TLC并列供选择，方便基层 2.新方法新技术的扩大应用 3.杂质控制理念的飞跃 4.重视微量毒性杂质的控制，提高杂质控制的水平 5.加强对多组分品种中小组分和无效组分的控制 6.加强对制剂中添加物（如防腐剂）的控制 7.实现无菌检查的各论化 8.抗生素效价测定杯碟法和浊度法并举 9.对难溶药物颗粒剂、干混悬剂的溶出度进行控制 10.强化不溶性微粒等项目控制,.,二、抗生素类药标准增修订要点:,1.鉴别项下尽可能应用专属性强的鉴别反应 如：光谱法：IR 色谱法：HPLC TLC等 以及钠、钾、盐酸盐、硫酸盐的鉴别反应。 标准中鉴别反应HPLC与TLC二法并列。有利于基层检验机构的选择。,二、抗生素类药标准增修订要点:,2. 新方法新技术进一步在标准中扩大应用 2.1 应用HPLC-ELSD（蒸发光散射检测器）测定氨基糖苷类抗生素的组分，有关物质，特定杂质及含量的品种进一步增加。同时又用该方法测定硫酸盐（SO4）的含量。用HPLC-ELSD替代TLC检查有关物质与组分，可提高检测灵敏度。,如:硫酸依替米星及制剂的有关物质、硫酸盐及含量测定；硫酸卡那霉素及制剂的有关物质卡那霉素B以及含量测定；硫酸庆大霉素及制剂的庆大霉素C组分及有关物质、硫酸盐测定；硫酸小诺霉素及其制剂的组分测定；妥布霉素及制剂的有关物质测定（新增）等。,抗生素类药标准增修订要点:,2.2 本版药典首次采用HPCE（高效毛细管电泳 ）方法。品种有2个，其中一个为盐酸头孢吡肟中N-甲基吡咯烷的含量测定。,3.杂质控制理念的飞跃 有关物质项控制已知杂质和未知杂质，本版药典有关物质项增修订较多 大多数品种（包括原料和制剂）修订后的标准采用HPLC 方法，且较多采用梯度洗脱，大大提高检测效率。 -内酰胺类抗生素127个品种中有116个品种采用HPLC测定有关物质。 喹诺酮类46个品种就有40个品种用HPLC法测定有关物质。 其他如:氯霉素类，大环内酯类，氨基糖苷类,利福平等均增修订了有关物质检查项,抗生素类药标准增修订要点:,对-内酰胺类、喹诺酮类、大环内酯类和氨基糖苷类等已经报道的各类杂质，采用杂质对照品、混合杂质对照品，结合相对保留时间、LC-MS等方法，在HPLC色谱图中进行了归属，并制定了相应的质控限度，其中数十种杂质已经通过杂质对照品等方法实现了单独控制。,3.1 对检查有关物质与含量测定的HPLC方法的系统适用性试验进行修改并完善。 3.1.1 在系统适用性试验中均规定了主峰与指定杂质峰的分离度，梯度洗脱时标明主峰的保留时间，使方法的可操作性强，保证了结果的准确性。 如罗红霉素：罗红霉素峰的保留时间约为14分钟，与红霉素峰的分离度应不小于15.0，罗红霉素峰与相对保留时间约为0.95处杂质峰的分离度应不小于1.0，与相对保留时间约为1.2处杂质峰的分离度应不小于2.0,3.1.2 对杂质数多或多组分的、分离难度大的品种，中检所提供混合杂质对照品，多组分对照品及标准图谱.如阿莫西林、阿莫西林克拉维酸、氨苄西林、吉他霉素、乙酰螺旋霉素等。该混合对照品用于系统适用性试验，测得的色谱图应与标准图谱一致。便于操作，保证了方法的有效性。 作用：对需要检测的峰给予归属和定位,3.1.3 有关物质采用自身对照时，对本身纯度低于85%的品种，提出对自身对照溶液主峰进行校正。以免纯度较低品种采用自身对照法引起的结果偏高而影响正确性。如：盐酸平阳霉素,抗生素类药标准增修订要点:,4.重视微量毒性杂质的控制，提高杂质控制水平 高聚物（高分子杂质） 包材释放物（澄清度间接控制） 残留溶剂,抗生素类药标准增修订要点:,4.1 高聚物 -内酰胺类抗生素临床过敏反应的一个主要因素 国内研究工作始于70年代，历经近40年的研究 2000年版-4个品种8个药品标准 2005年版-11个品种21个药品标准 2010年版-21个品种42个药品标准 （40个凝胶色谱法+ 2个HPLC法） 是中国药典的一个亮点,抗生素类药标准增修订要点:,凝胶色谱法仍为2010年版药典的主要方法，但方法需要改进 原因：分析周期较长，涉及单位较多，工作量大。 考虑：原方法在原理、系统适应性试验，方法验证（专属性、重复性、准确性）等方面均符合要求，仅仅分析周期过长。 结果：仍采用凝胶色谱法的分离模式和自身对照外标法，但方法需改进完善。,方法改进思路 拟采用直径较细玻璃柱，（原：内径1.31.6cm；现：1.0 1.4cm）减少柱床体积；分析周期缩短至45-60分钟，是原方法的1/3。 强化系统适应性试验 由于高分子聚合物的对照品不易获得，样品中的高聚物量较少，故不能直接用样品与聚合物对照品配制分离度试验。采用溶液加入蓝色葡萄糖2000进行分离度试验（对照品+蓝色葡萄糖2000 ） 某些药物分子单体与其聚合体达不到基线分离 其分离度计算公式为R=高聚体的峰高/单体与高聚体之间的谷高，应大于2.0。,方法改进结果比较 2005年版药典方法和2010年版改进后方法测定部分品种高聚物的含量，结果基本一致。 2010年版药典凝胶色谱高分子聚合物项下仅将色谱柱规定为内径1.0-1.4cm，长为30-40cm的玻璃柱，即两种不同规格柱并列，可根据实际条件选择，测定结果一致。,Sephadex G-10高聚物检查方法的不足： Sephadex G-10凝胶色谱柱效低、分离效果差 不能有效分离不同聚合度的-内酰胺抗生素聚合物，且易受开环物等小分子杂质的干扰； 受制剂中辅料的干扰，无法测定-内酰胺抗生素颗粒剂、干混悬剂中的高聚物； 常用的-内酰胺酶抑制剂（克拉维酸钾和舒巴坦钠）的出峰位置与-内酰胺抗生素聚合物相同，因此也无法测定-内酰胺抗生素复方制剂中的聚合物； 对不溶解于水的-内酰胺酯（如头孢呋辛酯、头孢泊肟酯等）无法测定； 无法分离碳青霉烯类-内酰胺抗生素中的聚合物。,4.2 包材释放物（澄清度间接控制） 头孢曲松钠不良反应报道很多。目前认为溶液澄清度合格与否与其不良反应有一定的相关性。 实验证明： 溶液澄清度不合格样品中皮肤被动过敏试验的阳性率（31.6%）远远超出合格样品的过敏试验的阳性率（0 %）。 过敏反应主要集中在浊度浓于2号标准比浊液的样品中，澄清度介于1号和2号标准比浊液之间的样品均未引起过敏反应，澄清度检查规定“不得比1号浊度标准液更浓”是必要的。,造成注射用头孢曲松钠澄清度不合格的直接原因是丁基胶塞中释放的挥发性物质与头孢曲松钠形成不溶性复合物所致，主要原因是丁基胶塞中BHT（抗氧剂）在起作用,4.3 残留溶剂 ICH将药品生产及纯化过程中常用的69种有机溶剂按照对人体和环境的危害程度分为四类，并制定了限度标准。当生产工艺中用到这些溶剂时应对其残留量进行控制，以符合产品规范、GMP或其它基本的质量要求。 目前中国不仅接受了ICH对化学药品中残留溶剂控制的理念，而且结合中国国情，建立了适合于中国国情的残留溶剂控制方法。 在中国药典2010版中，几乎所有的抗生素原料药，在各论项下均按其生产工艺制定了严格的残留溶剂检查, 从附录走向各论 凡例：对于生产过程中引入的有机溶剂，应在后续的生产环节予以有效去除，除已明确列有“残留溶剂”检查的正文品种必须依法进行该项检查外，其他未在“残留溶剂”项下明确列出的有机溶剂与未在标准中列有此项检查的品种，如生产过程中引入或产品中残留有机溶剂，均应按本版药典附录“残留溶剂测定法”检查并应符合相应溶剂的限度规定 由于生产工艺的不同，各生产厂使用的有机溶媒也不同，同一品种中可能有几十种的溶媒，为方便操作、经试验在标准中规定各溶剂的相对调整保留时间（RART），检查时可先做供试品，从供试品中检出的溶媒的RART与规定的RART比较，确定为何种溶媒时，再进行对照品测定，可减少工作量，大大降低检验成本，提高工作效率。 标准加入法排除基质干扰, 检测方法进行了相应的调整：用相对调整保留时间代替相对保留时间 改变了残留溶剂测定的习惯步骤. 对样品中存在的残留溶剂进行定性， 根据检出对象配制相应的对照品溶液， 简化对照品溶液的配制，适合小批次、残留溶剂种类较少的品种，大大降低检验成本，提高工作效率。 RART法代替RRT法 利用甲烷测定色谱系统的t0，用溶剂峰RART代替RRT，只受柱温和固定相性质的影响，避免其他色谱参数如载气流速、柱尺寸变化对定性的影响。,如：头孢泊肟酯 残留溶剂 照残留溶剂测定法（附录 P）测定。甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、异丙醇、丁酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙酸丁酯、1,2-二氯乙烷、乙酸异丙酯、苯、四氯化碳、环己烷、二氯六环、甲基异丁基酮、吡啶、甲苯 色谱条件与系统适应性试验 略 内标溶液的制备 取正丙醇适量，用二甲基亚砜稀释制成每1ml中约含200g的溶液，作为内标溶液。,系统适用性溶液 丁酮、乙酸乙酯、正丙醇（内标）溶液 供试品溶液 略 对照品溶液：根据实验确定的具体检测对象制备。 分别精密称取溶剂对照品适量，用内标溶液定量稀释制成规定浓度的溶液，作为混合对照品，混合对照品中个溶剂的浓度分别为每1ml中含甲醇600g、乙腈82g、丙酮1mg、二氯甲烷120g、异丙醇1mg、丁酮1mg、乙酸乙酯1mg、四氢呋喃150g、乙酸丁酯1mg、1,2-二氯乙烷1g、乙酸异丙酯1mg、苯1g、四氯化碳1g、环己烷760g、二氯六环76g、甲基异丁基酮1mg、吡啶40g、甲苯170g。精密量取混合对照品1.0ml，置20ml顶空瓶中，密封瓶口，作为对照品溶液。,测定法 计算RART： 顶空进样甲烷气体，记录甲烷的保留时间，作为色谱系统的死体积（t0） 顶空进样供试品溶液，记录色谱图，如有色谱峰按公式计算各色谱峰的保留时间（tR）相对于正丙醇保留时间tR（正丙醇）的相对调整保留时间（RART）；,比较RART 将得到的RART值与下表的RART值比较确定供试品中的残留溶剂种类 制备相应的对照品溶液 顶空进样对照品溶液，记录色谱图，按内标法以峰面积计算 甲烷气体的获得和操作？ 中检所已解决（混合对照品定位） 甲烷、丙酮和异丙醇,残留溶剂（与附录不一致，表格各论列出）,残留溶剂 采用标准加入法测定，有效地排除基质效应的影响；可以得到更为准确的定量结果。 当标准加入法结果与内标法结果系统偏差约10%（通常偏低）时，可以认为方法存在明显的基质效应。 如：盐酸头孢吡肟,5.加强多组分抗生素中小组分和无效组分的控制 对大环内酯、氨基糖苷类抗生素品种中的主组分、无效、未知组分也均分别实现了控制。对其中诸组分的定位，均采用混合标准品结合标准图谱加以实现。 庆大霉素及其制剂，不仅要求控制C组分的含量，且对其中的小诺霉素、西索米星和其它未知组分的含量均分别加以控制 对麦白霉素不仅要求控制麦迪霉素A1应不低于48%，吉他霉素A6应不低于12%，且要求麦迪霉素（A1、A2）及吉他霉素A系列组分（A4、A6、A8）之和应不低于70%，进而对未知和无效组分实现控制；,6.加强制剂中添加物（如防腐剂）的控制 抗生素滴眼剂，虽然其本身具有一定的抗菌作用，但由于抗菌谱的限值，通常也需要添加防腐剂，特别是多剂量。 盐酸林可霉素注射液中的苯甲醇 但所有的抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂的量应为最低的有效剂量。且最终包装容器中的抑菌剂有效浓度应低于对人体的有害浓度。,中国药典2010版首次在附录中收载了“抑菌剂效力检查法指导原则”，用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终产品的抑菌效力，同时也用于指导生产企业在制剂研发阶段进行抑菌剂的筛选。 为保证添加到制剂中的抑菌剂的量在规定范围，抗生素专业委员会要求，对处方中含防腐剂等辅料的滴眼剂应控制其种类及含量，并参照USP等国外药典将其含量控制为其处方量的80120。 新修订的抗生素滴眼剂如氯霉素滴眼剂、妥布霉素滴眼剂等品种中，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和苯扎溴铵等抑菌剂均采用HPLC法加以了控制,林可霉素中的苯甲醇 人类红血球悬浮液接触到浓度低于80mM约为8.6512mg/ml）的苯甲醇时，在37,60分钟内极少或不会发生溶血。当苯甲醇浓度高于80mM时，溶血作用则会增加。,国家药品不良反应监测中心发布的“林可霉素注射液的不良反应”与国外报道苯甲醇的不良反应基本一致。 我国SFDA于2001年即已要求凡含有苯甲醇的注射液严禁给而儿童肌内注射。详见关于加强苯甲醇注射液管理的通知（国食药监注2005263号）,7.实现无菌检查的各论化 个性化的重要性 对具有抗菌活性的药品注射剂进行无菌检查，通常要利用薄膜过滤法去除药物的抗菌活性，并通过验证实验确证抗菌活性去除的是否彻底，以保证检验结果的有效性。,建立该品种SOP，确定样品的最佳溶解方式、最佳冲洗液、冲洗方式等操作关键点；并将上述内容按统一要求写入到每一个具体各论中，以方便今后的检验工作。 中国药典2010版中抗生素注射剂的无菌检查已经全部实现了各论化。 避免了由于方法而导致的假阳性和假阴性现象,8.抗生素效价测定杯碟法和浊度发并举 在中国药典2005版中，仅有庆大霉素一个品种同时收载了杯碟法和浊度法， 中国药典2010版中，几乎所有的抗生素效价测定法，均同时收载了杯碟法和浊度法两种方法。,9.对难溶药物颗粒剂/干混悬剂的 溶出度进行控制,对难溶药物如罗红霉素、头孢泊肟酯等品种的颗粒剂、干混悬剂均设立了溶出度检查； 对部分在片剂、胶囊剂溶出介质中极易溶（10min内溶出度大于80）的品种，如阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸钾等颗粒剂、干混悬剂，认为不必专门对其溶出度进行控制。既有效地控制了药品的质量，又最大程度的简化了质控项目。,10.强化不溶性微粒等项目控制,不溶性微粒从严控制；大容量注射液与眼用制剂增加渗透压摩尔浓度检查。 不溶性微粒 2007年11月 注射用头孢拉定致临床小儿血尿（国家ADR中心收到433份） 原因：严重超剂量和不溶性微粒存在 不含不溶性微粒的大剂量药物：大鼠血尿 不含药物的不溶性微粒：大鼠血尿 采用临界温度（大鼠不产生血尿的药物浓度），加入不溶性微粒后：大鼠血尿,供注射用的原料药增加不溶性微粒检查以保证制剂能符合注射剂的要求。 由于不溶性微粒光阻法测定结果仅与一定浓度范围内的样品溶液成正比关系，因此在标准中规定不溶性微粒检查供试品溶液浓度。 制剂规格较多，最多有11个规格 考虑临床使用的安全性，在标准中规定：规格1.0g以下的制剂按标示量折算，每1g样品中，含10m以上的微粒不得过6000粒，含25m以上微粒不得过600粒；规格1.0g以上（包括1.0g）的制剂按每1个供试品容器中含10m以上的微粒不得过6000粒，含25m以上的微粒不得过600粒。,三、抗生素品种分类介绍 下面将重点介绍 -内酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类、四环素类、酰胺醇类、利福霉素类、喹诺酮类、抗肿瘤 类、肽类的抗生素在新版药典中的增修订的情况。,1.-内酰胺类抗生素,本类抗生素包括：头孢菌素类、青霉素类、酶抑制剂类、碳青霉烯类与单环-内 酰胺类共127个品种，占抗生素品种的36.8%。,表1.1 头孢菌素类品种收载情况,1.1 品种收载情况：,头孢菌素类新增品种： 原料： 制剂： 1.头孢尼西钠 1.注射用头孢尼西钠 2.头孢地嗪钠 2.注射用头孢地嗪钠 3.头孢唑肟钠 3.注射用头孢唑肟钠 4.头孢吡肟钠 4.注射用头孢吡肟钠 5.头孢西丁钠 5.注射用头孢西丁钠 6.头孢克肟 6.头孢克肟片；7.头孢克肟胶囊；8.头孢克肟颗粒 7.头孢丙烯 9.头孢丙烯片；10.头孢丙烯干混悬剂 8.拉氧头孢钠 11.注射用拉氧头孢钠 9.盐酸头孢他美酯 12.盐酸头孢他美酯片； 13.盐酸头孢他美干悬剂； 10.头孢孟多酯钠 14.盐酸头孢他美酯胶囊；15.盐酸头孢他美酯颗粒 11.头孢泊肟酯 16.注射用头孢孟多酯钠 17.头孢泊肟酯片； 18. 头孢泊肟酯胶囊； 19.头孢泊肟酯干混悬剂,表1.2 青霉素类，酶抑制剂，碳青霉烯类与 单环-内酰胺类品种收载情况,青霉素类与酶抑制剂: 新增品种： 原料： 制剂： 1.阿洛西林钠 1.注射用阿洛西林钠 2.美洛西林钠 2.注射用美洛西林钠 3.他唑巴坦 3.注射用哌拉西林钠他唑巴坦 4. 阿莫西林克拉维酸钾分散片； 5.阿莫西林克拉维酸钾颗粒； 6.阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂 单环-内酰胺类 新增品种： 原料： 氨曲南 制剂 ： 注射用氨曲,1.2 2010年版药典本类抗生素药质量标准要点 1.2.1 性状 本类药物均为半合成的头孢菌素及其制剂，原料药外观性状一般为白色至微黄色粉末或结晶性粉末。注射用粉针剂的外观性状与原料相同。,1.2.2 鉴别 原料药与注射用粉针的鉴别均采用色谱法HPLC，光谱法IR以及钾、钠离子火焰反应，也有多个品种采用HPLC与TLC二法并列。少数品种有用UV鉴别。 固体口服制剂一般用HPLC或HPLC与TLC作为鉴别，二法并列。少数有用UV法作为鉴别。,1.2.3溶液的澄清度与颜色 检查溶液的澄清度与颜色是控制-内酰胺类注射用的原料药与制剂内在质量的一个重要指标。 关注包材的相容性 标准中大部分采用与标准管进行比浊和比色的目测法。本版药典有多个品种采用紫外-可见分光光度法在特定的波长处测定吸光度，控制溶液的颜色，如：头孢尼西钠、 头孢噻肟钠。,1.2.4 有关物质 1.2.4.1 头孢菌素类药物原料27个品种均规定检查有关物质，制剂42个品种除6个品种颗粒与干混悬剂由于辅料干扰未规定检查有关物质外, 其他品种均有有关物质检查。 头孢菌素品种有关物质检查均采用HPLC法，除头孢西丁钠以苯基键合硅胶为填充剂外；其他均以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，紫外检测。其中有头孢地尼、头孢克洛、头孢唑啉钠、 头孢西丁钠、 头孢克肟、头孢噻肟钠、 头孢噻吩钠、 拉氧头孢钠、 头孢呋辛钠、头孢丙烯、头孢氨苄、头孢羟氨苄及其制剂共29个品种用HPLC法梯度洗脱。,表1.3 头孢菌素的有关物质检查,1.2.4.2 青霉素类、酶抑制剂、碳青霉烯类与单环-内酰胺类原料22个品种均规定检查有关物质，制剂25个品种除5个品种的颗粒与干混悬剂等由于辅料干扰未规定检查有关物质外, 其他品种均有有关物质检查。 有关物质检查均采用HPLC法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，紫外检测。其中有阿莫西林、阿莫西林钠、青霉素钠(钾)、青霉素V钾、氨苄西林、氨苄西林钠、氨曲南等原料及其制剂共27个品种采用梯度洗脱方法。,表1.4 青霉素类与酶抑制剂有关物质检查,表1.5 碳青霉烯类与单环-内酰胺类有关物质检查,1.2.4.3 采用梯度洗脱时，由于不同色谱柱的行为略有差异，故在系统适用性试验中，应规定主峰的出峰时间，主峰与已知杂质的分离度等要求。 如：头孢地尼规定: 主成分头孢地尼峰保留时间约为22分钟，E-异构体峰保留时间约为头孢地尼峰保留时间的1.5倍，理论板数按头孢地尼峰计算不低于7000，头孢地尼峰与其相对保留时间0.95和1.1处杂质峰的分离度均应不小于1.0。,1.2.4.4 由于梯度洗脱基线噪音相对较大，故规定供试品溶液色谱图中小于对照溶液主峰面积0.05倍或0.1倍的峰可忽略不计。以免基线噪音影响结果正确性。 1.2.4.5 有关物质测定结果计算可分为三种方法： (1). 不加校正因子的自身对照法； (2). 加校正因子的自身对照法； (3). 已知杂质对照品外标法。,有关物质包括已知杂质与未知杂质，故在方法中可分别规定用杂质对照品外标法、加校正因子与不加校正因子的自身对照法计算含量和杂质的杂质的总量。 如：头孢哌酮钠 供试品溶液色谱图中如有杂质峰，含杂质A按外标法以峰面积计算，不得过3.0%，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的2倍（2），其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3倍（3.0%）,供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.1倍的峰可忽略不计。,1.2.4.6 在检测中根据杂质最大吸收波长的不同，采用双波长测定，如：头孢拉定有关物质测定时，用不同波长测定不同杂质，用220nm波长检测双氢苯苷氨酸，用254nm波长检测其他杂质。,1.2.5 高分子聚合物,表1.6 凝胶色谱测定高分子聚合物 （2005版已收载21个品种）,表1.7. 凝胶色谱测定高分子聚合物 （2010年版新增19个品种）,表1.8 HPLC测定高分子聚合物（2010年版新增2个品种）,1.2.6 应用HPCE测定盐酸头孢吡肟中N-甲基吡咯烷的含量，是本版药典正文收载应用HPCE的2个品种之一。 1.2.7 标准中增加有机溶媒检查的品种较多,1.2.8 2-乙基己酸 对生产工艺过程中使用2-乙基己酸的原料，增加2-乙基己酸检查，采用气相色谱法测定。方法也收载在2010年版药典二部（附录 L）.如:头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西林钠等。 1.2.9 水分 本类药物原料药均采用水分测定法第一法A测定水分，制剂中辅料对水分测定法有干扰时，则改为干燥失重。如:注射用头孢他啶，因含有10%的碳酸钠对水分测定有干扰，改为60真空减压干燥，头孢地尼胶囊也改为60真空减压干燥。 1.2.10 不溶性微粒与可见异物,1.2.11 含量测定 本类共127个品种的含量测定均采用HPLC法或HPLC梯度洗脱。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，反相色谱，紫外检测。为保证方法的专属性与结果的正确性。利用该类药物遇光照或加热能产生反式异构体或E异构体等有关物质，用于制备系统适用性试验用分离度溶液，测定分离度，结果按外标法以峰面积计算,即得。,如：拉氧头孢钠 【含量测定】 照高效液相色谱法（附录 D）测定。 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.01mol/L醋酸铵溶液-甲醇（19:1）为流动相；检测波长为254nm。取拉氧头孢对照品适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含0.25mg的溶液，取上述溶液适量，在80水浴中加热30分钟，冷却，取10l注入液相色谱仪，记录色谱图，拉氧头孢R异构体、拉氧头孢S异构体依次流出；拉氧头孢R异构体和拉氧头孢S异构体的分离度应不小于4.0，两主峰与相邻杂质峰的分离度均应符合要求。,测定法 取本品适量（约相当于拉氧头25mg），精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取10l注入液相色谱仪，记录色谱图；另取拉氧头孢对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算供试品中C20H20N6O9S的含量。,1.3 标准中涉及的已知杂质，在标准最后列出其化学命名，便于与国外药典标准中的杂质比较。 如：头孢哌酮钠 杂质A：(5aR,6R)-6-(2R)-2-(4-ethyl-2,3-dioxopiperazin-1-yl)carbonylamino-2-(4-hydroxyphenyl)acetylamino-5a,6-dihydro-3H,7H-azeto2,1-bfuro3,4-d1,3thiazine-1,7(4H)-dione 中文名：(5aR,6R)-6-(2R)-2-(4-乙基-2,3-二氧代哌嗪-1-基)甲酰基氨基-2-(4-羟基苯基)乙酰基氨基 -5a,6-二氢-3H,7H-氮杂环丁烷并2,1-b呋喃并3,4-d1,3噻嗪-1,7(4H)-二酮,2大环内酯类抗生素 该类抗生素可分为十四元环、十五元环和十六元环三类。它们均为多组分抗生素。十四元环有红霉素及其衍生物，具有结构相近,无紫外吸收,特征性反应不明显的特点，以红霉素、琥乙红霉素、克拉霉素、罗红霉素为代表.十五元环有阿奇霉素；十六元环有乙酰螺旋霉素、吉他霉素等，,2.1 品种收载情况见表2.1 表2.1 2010年版药典大环内酯类品种收载情况,新增品种： 原料： 制剂： 交沙霉素、 交沙霉素片、 丙酸交沙霉素、 丙酸交沙霉素颗粒、 麦白霉素胶囊。 红霉素肠溶胶囊,2.2增修订项目概况见表2.2 表2.2 2010年版药典大环内酯类品种增修订项目,2.3 本类抗生素质量标准要点 2.3.1 鉴别 标准中凡用HPLC法测定组分含量以及有关物质的品种均采用HPLC法作为鉴别，并增加部分品种的TLC法鉴别，大部分品种HPLC法和TLC法并列，可任选一项；原料药也有用IR作为鉴别，如罗红霉素；有紫外吸收特性的品种也可用UV法作为鉴别，如麦白霉素、交沙霉素；部分品种采用显色反应。,2.3.2组分测定与有关物质 2.3.2.1组分测定 采用HPLC法测定，组分测定标准品和标准图谱由中检所提供，作为系统适用性试验的参比。 涉及品种共计17个，较2005年版增加8个品种，分别为:麦白霉素胶囊、乳糖酸红霉素、 注射用乳糖酸红霉素、硬脂酸红霉素、硬脂酸红霉素片、硬脂酸红霉素胶囊、硬脂酸红霉素颗粒、红霉素肠溶胶囊。 首次对红霉素及其衍生物组分检测方法进行了统一，在其盐类及制剂中均增加了红霉素A组分的检查。具体见表2.3。,表2.3 组分测定,2.3.2.1.1 乙酰螺旋霉素与吉他霉素的组分 测定方法同2005年版, 修订系统适用性试验，系统适用性对照品溶液的色谱图应与标准图谱一致. 2.3.2.1.2 麦白霉素的组分 主要组分有5个，2005年版仅控制麦迪霉素A1, 2010版全面控制麦迪霉素A1、A2和吉他霉素A4、A6、A8；本品主成分为麦迪霉素A1，故采用麦迪霉素A1的标准品为基准, 以外标法计算各组分含量. 规定（按干燥品计）： 麦迪霉素A1 不得低于48% 吉他霉素A6 不得低于12% 5个组分总含量不得低于70%。 测定方法:HPLC，色谱柱C18、检测波长232nm,2.3.2.1.3 红霉素、乳糖酸红霉素、硬脂酸红霉素 红霉素、乳糖酸红霉素、硬脂酸红霉素主要组分均为红霉素A、B、C . 测定方法：HPLC法，色谱柱C18 , 检测波长215 nm；3个品种规定限度相同： 红霉素A: 以无水物计不得少于88.0%，用对照品外标法计算. 红霉素B: 不得大于5%,用加校正因子（0.7）的自身对照法计算。 红霉素C: 不得大于5% ,用自身对照法计算。,2.3.2.2 有关物质 除琥乙红霉素仍采用TLC法外，2005年版采用TLC法的品种均修订为HPLC法，共26个品种采用HPLC法； 完善了HPLC系统适用性要求，明确主峰与指定杂质的分离度，确保方法的有效性和准确性；增加特定杂质的控制（如阿奇霉素）和总杂的控制（如罗红霉素）；首次对红霉素及其衍生物有关物质检测方法进行了统一。见表2.4。,表2.4 有关物质测定(1),表2.4 有关物质测定(2),2.3.3 溶出度 除乳糖酸红霉素是供注射用外，其他均为口服制剂（片、胶囊、干混悬剂、颗粒）。由于原料的水溶性较差，因此要求口服制剂检查溶出度或释放度。共25个制剂，其中2个红霉素肠溶制剂检查释放度，其他均检查溶出度；颗粒剂中包衣颗粒和非包衣颗粒制订了相应的溶出度检查法（如罗红霉素颗粒）。,溶出度项下溶出液的测定，6个品种采用直接紫外可见分光光度法（231235nm波长处）、9个品种采用硫酸显色反应后紫外可见分光光度法（482nm波长处）、10个品种则采用HPLC法（阿奇霉素、克拉霉素和罗红霉素由硫酸显色法修订成HPLC法）。因制剂中某些辅料与硫酸也会发生显色反应，采用硫酸显色法时,采用自身对照法，以抵消辅料的干扰；同时多组分品种亦采用自身对照法，以消除组分比例差异对结果的影响。如:麦白霉素片,麦白霉素胶囊,吉他霉素片。溶出度介质可加酶，如麦白霉素胶囊和罗红霉素胶囊，后者还规定了胰酶的加量以单位表示（每1ml中含胰蛋白酶不少于0.08活性单位、胰淀粉酶不少于1.1活性单位和胰脂肪酶不少于0.4活性单位 ）,更为科学合理。见表2.5。,表2.5 (1)溶出度测定 （溶出液uv法测定）,表2.5 (1)溶出度测定 （溶出液硫酸溶液显色,uv法测定）,表2.5 (2) 溶出度测定 (溶出液HPLC法测定),2.3.4 含量测定 除个别品种（如克拉霉素、罗红霉素、阿奇霉素）采用HPLC法外，其他品种均采用微生物检定法测定效价，见表2.6。2005版药典采用管碟法，本版药典增加浊度法，两法并列供选择，在附录中明确仲裁方法为管碟法； 阿奇霉素系列由微生物法修订为HPLC法，系统适用性试验规定“标准品溶液色谱图应与标准图谱一致”；,罗红霉素系列完善系统适用性实验，增加主峰与红霉素的分离度，并明确与前相邻杂质峰（相对保留时间为0.95）和后相邻杂质峰（相对保留时间为1.2）位置； 依托红霉素为红霉素酯类衍生物，故在微生物法测定含量时，必须使药物完全水解成红霉素，有抗菌活性后，方能测定抑菌能力，本版药典进行了充分研究后将水解条件由“37水浴中放置6小时”修订为“60水浴中放置4小时”，缩短实验时间。,表2.6 含量测定,3、氨基糖苷类抗生素 3.1 氨基糖苷类抗生素的特点 3.1.1 本类药物结构中都有以氨基环己醇与氨基糖缩合而成的苷，结构中没有共轭双键所以没有可供分析用的特征的紫外吸收仅有末端吸收，结构中具有不对称碳原子有旋光性。 3.1.2 本类抗生素相对其他类抗生素而言稳定性较好，制剂为注射液品种较多 。,3.2 品种收载情况： 表3.1 品种收载情况,*为新增品种,3.3 关键检测项目方法一览： 表3.2 检测项目方法,3.4 修订情况概要 3.4.1鉴别 一般采用TLC法与硫酸盐反应，含量测定或组分采用HPLC-ELSD的方法时，也可用HPLC作为鉴别，个别品种也有用IR作为鉴别反应，少数品种有显色反应鉴别。在鉴别试验中规定TLC和HPLC两个色谱鉴别项，可根据实验室条件任选其中之一，便于灵活操作。,例1.硫酸依替米星 【鉴别】 （1）TLC （2）HPLC （3）硫酸盐鉴别反应。 以上（1）、（2）两项可选做一项。,3.4.2、检查 3.4.2.1 供无菌分装的原料标准正文中增加了可见异物 、 不溶性微粒 、 无菌检查。 例1. 硫酸阿米卡星 无菌 取本品，加0.9无菌氯化钠溶液制成每1ml中含阿米卡星8mg的供试液，经薄膜过滤法处理，用pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液分次冲洗（每膜不少于500ml），以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，依法检查（附录XI H），应符合规定。（供注射用）。 可见异物 取本品5份，各0.6g，分别加微粒检查用水5ml使溶解，依法检查（附录IX H），应符合规定。（供注射用）,不溶性微粒 取本品3g，加微粒检查用水100ml，制成每1ml中含30mg的溶液，依法检查（附录IX C）。每1g供试品中，含10m以上的微粒不得过6000粒，含25m以上的微粒不得过600粒。（供注射用）,3.4.2.2 渗透压摩尔浓度 2005年版药典首先在抗生素类滴眼液-硫酸卡那霉素滴眼液标准中列入渗透压检查，本版药典将其扩大为4个滴眼液，两种表示方法并列:妥布霉素滴眼液、庆大霉素滴眼液和硫酸卡那霉素滴眼液（均为渗透压摩尔浓度为260-320mOsmol/kg）硫酸新霉素滴眼液（渗透压摩尔浓度比为0.95-1.15）。,3.4.2.3 防腐剂 本版药典对氨基糖苷类抗生素滴眼液中常用防腐剂如羟苯乙酯、丙酯、苯扎氯胺等进行检查。 例1. 妥布霉素滴眼液 检查羟苯乙酯、羟苯丙酯、苯扎氯铵，方法为 HPLC（限度： 80%-120% ）,3.4.2.4有关物质、组分 有关物质、组分、特定杂质检查方法修改为HPLC-ELSD方法的品种较多 ，但有些品种如新霉素、盐酸大观霉素仍采用TLC法。 3.4.2.4.1 HPLC-ELSD方法扩大应用，2005年版药典除硫酸卡那霉素，硫酸庆大霉素,硫酸小诺霉素三个原料及其制剂共9个品种的组分、特定杂质检查方法为HPLC-ELSD方法， 2010年版药典有7个原料及其制剂共23品种采用HPLC-ELSD方法检查有关物质、组分、特定杂质。,2005年版药典采用的薄层色谱法(TLC)测定有关物质，属于半定量方法，只能对杂质进行限度检查，不能准确测定样品中单个杂质和总杂质量。ELSD属于通用型检测器, 几乎对所有的化合物均有响应，流动相和环境温度对响应值的影响小,适宜用于无特征紫外吸收化合物的定性和定量分析，由于其色谱响应值(峰面积的对数值)与对应的质量（溶液浓度的对数值）呈线性关系，因此用回归方程计算含量。尽管ELSD检测器在灵敏度上不如UV检测器，但较之TLC其灵敏度要高得多。,3.4.2.4.2 柱前衍生HPLC方法首次应用在中国药典氨基糖苷类抗生素有关物质检查项中，阿米卡星和硫酸阿米卡星:柱前衍生HPLC法可以在同一色谱条件下同时检出卡那霉素、杂质B、杂质A以及其它杂质，并可参考BP2009阿米卡星项下系统适用性色谱图定位，且药厂出口采用此法，对本法的可行性已有数据可证明。,3.4.2.4.3 硫酸盐 除部分品种仍采用原滴定方法，本版药典首次采用HPLC-ELSD方法对其进行测定。 2005年版中测定硫酸盐含量采用的是容量法与传统的重量法测定相比，有其先进性，但滴定终点突跃不明显.本版药典建立的HPLC-ELSD方法测定硫酸盐含量，采用硫酸滴定液作为对照品，解决了对照品的问题，该方法方便、准确。 例如：2010年版药典中;硫酸西索霉素、硫酸庆大霉素、 硫酸奈替米星和硫酸依替米星，均采用HPLC-ELSD方法测定硫酸盐含量。,3.4.4 含量测定 有以下五种形式，表3.3 （1）硫酸卡那霉素，硫酸依替米星及其制剂共7个标准的含量测定为HPLC-ELSD方法。 （2）阿米卡星和硫酸阿米卡星及其制剂共4个标准的含量测定采用柱前衍生化HPLC-UV方法。 （3）硫酸新霉素 硫酸核糖霉素及其制剂共5个标准的含量测定采用微生物检定法管碟法. （4）盐酸大观霉素及其制剂共2个标准的含量测定采用微生物检定法浊度法 （5）其他21个标准的含量测定均采用微生物检定法管碟法和微生物检定法浊度法两法并列，可任选一方法。,表3.3 含量测定,4、四环素类抗生素 4.1 四环类抗生素都是结晶型物质，分子内含有蒽酮类发色团，一般为黄色结晶性粉末，干燥的四环类游离碱和它们的盐类都比较稳定，但在贮存中遇光促使颜色变深，可能有降解物产生。,4.2 品种收载情况： 表4.1 品种收载情况,4.3 本版四环类抗生素修订情况概要 4.3.1 性状 基本未修订。 4.3.2 鉴别 一般采用TLC/HPLC、IR和氯化物反应，部分品种增加了紫外鉴别。 如:盐酸多西环素在甲醇溶液中紫外特征较强,故增加了紫外鉴别：20ug/ml甲醇溶液在269nm和354nm处有最大吸收，在234nm和296nm处有最小吸收。,4.3.3 检查 4.3.3.1有关物质 有关物质测定方法仍以HPLC为主，但测定条件随含量测定方法修改有所改变。 色谱条件同修改后含量测定的色谱条件（见表）， 杂质含量计算方法 四环素已知杂质含量用加校正因子的自身对照法计算，米诺环素、土霉素、多西环素用已知杂质对照品定位，用不加校正因子的自身对照法计算，金霉素用杂质对照品外标法计算已知杂质的含量。,4.3.4含量测定 4.3.4.1 盐酸多西环素, 盐酸四环素, 盐酸土霉素等 2010年版药典对流动相作了较大修改。可以使主成分与杂质达到良好分离，分离的杂质数基本与EP6.0报导的一致,几点注意： (1) 由于流动相pH值在7.5-8.8，因此需要选择耐碱性的色谱柱。 (2) 主峰与其有关物质的峰形和分离效果受柱温影响较大，本品检测时控制柱温是有必要的。 (3) 与主峰相对保留时间为1.1处的杂质可能为2-乙酰-2-去酰胺四环类杂质。在土霉素、多西环素中都存在，故在系统适用性试验中应规定与其的分离度。,4.3.4.2金霉素 采用酸性流动相：高氯酸-二甲亚砜-水(8:525:467)(pH小于2.0)取代了2005年版的流动相，分离效果较好。注意：采用耐酸的色谱柱。,5、酰胺醇类抗生素 本类品种包括：氯霉素类，甲砜霉素类。 5.1氯霉素类 5.1.1 化学合成法得D,L-苏式混旋体，又称合霉素，进一步拆分得氯霉素。,5.1.2品种收载情况：未新增,5.1.3 2010年版药典本类药品质量标准要点 5.1.3.1 性状 氯霉素为白色或微带黄绿色结晶或结晶性粉末. 棕榈氯霉素为白色或类白色粉末。 琥珀氯霉素为白色或类白色结晶性粉末. 5.1.3.2 鉴别 采用HPLC、TLC以及IR等方法作为鉴别反应，也有用UV法作为鉴别反应。,5.1.3.3.1有关物质 在2005年版药典执行过程中发现在规定的色谱条件下，杂质对硝基苯甲醛峰的峰形严重前倾，对称性差，导致测定结果的误差很大。 在原色谱条件的基础上进行了修改，修订了流动相系统与检测波长。 氯霉素及其滴耳液，滴眼液中的二醇物与对硝基苯甲醛测定照含量测定项下HPLC法的色谱条件测定，用对照品以外标法计算杂质含量。,5.1.3.3.2残留溶剂 由于氯霉素在生产过程中使用了二类溶剂氯苯与三类溶剂乙醇，新增了2种溶剂的检查，采用残留溶剂检查法的第二法。 5.1.3.3.3 防腐剂 氯霉素滴眼液新增羟苯甲酯、羟苯乙酯与羟苯丙酯的检查，用HPLC 法与有关物质同时检出，限度80%-120%。,5.1.3.3.4 琥珀氯霉素与棕榈氯霉素中的游离氯霉素 用TLC法检查，与氯霉素对照品溶液主斑点比较 5.1.3.3.5 琥珀氯霉素 在正文下新增可见异物、不溶性微粒和细菌内毒素。,表5.1 色谱条件比较,5.1.4含量测定 5.1.4.1 色谱条件 对HPLC法测定含量的色谱条件进行了优化：,5.1.4.22005年版药典规定氯霉素滴眼液标示量为：不得少于标示量的85.0%，现修订为：应为标示量的90.0-120.0% 5.1.4.3琥珀氯霉素及注射用琥珀氯霉素，棕榈氯霉素及其制剂采用紫外一可见光分光光度法测定含量，未修订。,5.2 甲砜霉素类 5.2.1品种收载情况： 甲砜霉素、 甲砜霉素肠溶片和甲砜霉素胶囊 5.2.2增、修订情况 5.2.2.1 鉴别 原料项下的TLC鉴别中的展开剂比例参照BP2008进行了修订，由乙酸乙酯-甲醇（97：13）修订为;乙酸乙酯-甲醇（97：3）。 5.2.2.2 吸收系数 增订了吸收系数检查项,其他项目均未做修改。,6、利福霉素类 6.1、基本特点 利福平系由链霉菌S.mediterranei发酵培 养的代谢产物利福霉素SV合成的半合成抗结核抗生素，在其 发酵和合成过程中可能产生利福霉素SV、醌式利福平、N-氧 化利福平及3-甲酰利福霉素等杂质。 6.2、品种收载情况： 利福平 、 利福平片 、利福平胶囊、利福平滴眼液 异福片(利福平与异烟肼的复方制剂) 异福胶囊 、异福酰胺片（利福平与异烟肼与吡嗪酰胺的复方制剂）、 异福酰胺胶囊,本类药物为抗结核病药, 以利福平为原料制成的单方制剂及滴眼用制剂；为适合不同结核病人的需要制成各成分比例不同规格的复方制剂。,6.3 修订和增订项目概况 6.3.1 鉴别 6.3.1.1 用含量测定项下的HPLC方法记录的色谱图中，供试品溶液主峰（或几个主峰）的保留时间与对照品溶液主峰（或几个主峰）的保留时间一致作为鉴别。 6.3.1.2 利福平原料及其制剂均相应增加TLC鉴别，HPLC与TLC两项鉴别任选一项。 6.3.1.3 滴眼液中如含有聚维酮，对TLC展开有影响，建议用HPLC鉴别。,6.3.2 有关物质 利福平中存在各种已知杂质，如：醌式利福平，N-氧化利福平，3-甲酰利福霉素SV,在2005年版药典利福平的有关物质检查，用HPLC方法并利用上述已知杂质与主成分的校正因子，对各杂质进行校正，用加校正因子的自身对照法计算含量。2010年版药典修改为采用杂质对照品按外标法计算含量，结果更准确。,6.3.4、溶出度 本品为难溶于水的药物，故口服制剂均进行溶出度检查。 对复方制剂异福片（胶囊）项下的溶出度，除测定利福平外，增加了异烟肼的测定，异福酰胺片（胶囊）增加吡嗪酰胺和异烟肼的测定，用紫外一可见分光光度法测定利福平，用HPLC测定吡嗪酰胺和异烟肼。,6.3.5 渗透压摩尔浓度 滴眼制剂新增渗透压摩尔浓度检查。 为 260-320mOsml/kg。 6.3.6 含量测定 6.3.6.1 滴眼用利福平修订了含量测定中系统适用性分离度试验用的对照物，原标准为利福平与醌式利福平的分离度，新标准为利福平与利福霉素SV的分离度。 6.3.5.2 本类药物含量测定均采用HPLC法测定，在系统适用性试验中用已知杂质制备分离度试验用溶液，保证了方法的专属性，准确性。 6.3.5.3 复方制剂中用几个主成分与醌式利福平制备分离度试验用溶液，进行系统适用性试验，保证结果的准确性。,7. 喹诺酮类抗生素 7.1 品