课件：饮用水中微生物检测方法粪链球菌、铜绿假单胞菌、产气荚膜梭菌.ppt

第一部分 粪链球菌的检测,2019,-,1,粪链球菌特性,粪链球菌菌形圆或椭圆，可顺链的方向延长,直径0.5微米1.0微米,大多数成双或短链状排列,通常不运动。在丰富培养基上菌落大而光滑，直径1毫米2毫米，全缘，罕见色素。其营养要求低，在普通营养琼脂上也可生长。能在1045 pH9.6或含6.5%NaCl肉汤培养基中生长，并能耐65 30分钟。它可利用精氨酸为能源，发酵山梨醇，不发酵阿拉伯糖。在简单的培养基上生长不需叶酸。,2019,-,2,GB/T 8538-2008粪链球菌检测,适用于饮用天然矿泉水的检测 原理 滤膜法：250ml水样用0.45m的滤膜过滤，滤膜在KF链球菌琼脂上于361中培养48h，选择红色或者粉红色菌落在脑-心浸萃琼脂上进行确证实验，过氧化氢酶反应阴性，并能在脑-心浸萃液体培养基上于45培养后浑浊生长，则存在，结果阳性。,2019,-,3,培养基,KF链球菌琼脂平板 脑-心浸萃琼脂液体培养基 脑-心浸萃琼脂斜面,2019,-,4,粪链球菌检测程序,2019,-,5,推测性试验,水样过滤 依照水质确定稀释倍数，使得过滤250ml水样滤膜上菌落数20个100个。 培养：361培养48h。 计数 对滤膜上红色或者粉红色菌落进行革兰氏染色、显微镜镜检，G+，计数250ml水样中粪链球菌数。,过滤操作方式和滤膜放置培养时注意事项,2019,-,6,KF链球菌琼脂上菌落,2019,-,7,确证性试验,滤膜上的典型菌落在脑-心浸萃琼脂斜面培养，361 24h48h，有菌落继续。 过氧化氢酶反应 取培养物在洁净载玻片上，滴加3%过氧化氢。有气泡阳性，不是粪链球菌；无为阴性，继续。 继续培养 转移到脑-心浸萃液态培养基和胆汁液态培养基分别于45 48h和361 3d。 判定：若生长，为阳性。,2019,-,8,报告,依据典型菌落的计数和确证性试验为阳性的结果，计算250ml水样中粪链球菌数量，结果以CFU/250mL计。,2019,-,9,第二部分 铜绿假单胞菌的检测,2019,-,10,铜绿假单胞菌特性,一种常见的条件致病菌，属于非发酵革兰氏阴性杆菌。菌体细长且长短不一， 铜绿假单胞菌有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌体的一端有单鞭毛，在暗视野显微镜或相差显微镜下观察可见细菌运动活泼。 本菌为专性需氧菌，生长温度范围2542，最适生长温度为2530，特别是该菌在4不生长而在42可以生长的特点可用以鉴别。在普通培养基上可以生存并能产生水溶性的色素，如绿脓素（pyocynin）与带荧光的水溶性荧光素（pyoverdin）等。在血平板上会有透明溶血环。,2019,-,11,GB/T 8538-2008铜绿假单胞菌检测,适用于饮用天然矿泉水的检测 原理 滤膜法：250ml水样用0.45m的滤膜过滤，滤膜在CN琼脂上于361中培养48h，能生长并产生绿脓菌素，或者生长且氧化酶阳性、紫外36020nm产生荧光、能利用乙酰胺产氨的革兰氏阴性菌无芽孢杆菌，则存在绿脓杆菌，结果阳性。,2019,-,12,培养基,假单胞菌琼脂基础培养基/CN琼脂平板 金氏B培养基斜面 乙酰胺肉汤 营养琼脂 氧化酶试剂 钠氏试剂,2019,-,13,铜绿假单胞菌检测程序,2019,-,14,推测性试验,水样过滤 依照水质确定稀释倍数，用0.45m的滤膜过滤250ml水样。 培养：CN培养基 361培养40h48h。 计数 20h24h和40h48h观察菌落并计数； 蓝色or绿色判定为铜绿假单胞菌，非蓝绿产荧光和红褐色菌落进一步确证性试验。,过滤操作方式和滤膜放置培养时注意事项,2019,-,15,铜绿假单胞菌在CN板上,2019,-,16,营养琼脂 在CN琼脂上培养2024h的可疑菌落接种，在361培养20h24h，检查再次纯化的菌落。 氧化酶试验 选最初为红褐色菌落试验，10s内成深蓝紫色为阳性反应，注意反应操作方法。 金氏B培养基 红褐色、氧化酶阳性的接种 361 24h5d，每天紫外灯检，5d内有荧光为阳性。 乙酰胺肉汤试管 接种营养琼脂纯化的菌落361 2024h，加钠氏试剂，色泽深黄到砖红，产氨阳性。,确证性试验,2019,-,17,金氏B培养基产生荧光,阴性 阳性 阳性,2019,-,18,乙酰胺肉汤培养液,阳性 阴性,砖红色,深黄色,2019,-,19,计数结果及报告,2019,-,20,第三部分 产气荚膜梭菌的检测,2019,-,21,产气荚膜梭菌生物系特性,菌体较大，大小为(0.91.3)(3.09.0)微米,无鞭毛，有荚膜。芽孢椭圆形,位于偏端。专性厌氧。菌落直径25毫米，血琼脂平板上有溶血圈。糖发酵能力强，产酸产气。本菌的特征之一是在牛乳培养基中呈暴烈发酵现象。 为革兰阳菌粗短大杆菌。两端钝圆，单个或成双排列，偶见链状。芽胞椭圆形，位于菌体中央或次极端，芽胞直径不大于菌体，在一 般培养时不易形成芽胞，在无糖培养基中有利于形成芽胞。在机体内可产生明显的荚膜，无鞭毛，不能运动。,革兰氏染色阳性,2019,-,22,GB/T 8538-2008产气荚膜梭菌检测,适用于饮用天然矿泉水的检测 原理 滤膜法：50ml水样用0.22m的滤膜过滤，滤膜在SPS琼脂上于361厌氧培养24h，计数黑色菌落，选择3个5个分别接种FT培养基，361厌氧1824h。培养物做确证性试验。,2019,-,23,培养基,庖肉培养基 亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂（SPS） 液体硫乙醇酸盐培养基（FT） 动力-硝酸盐培养基 含铁牛奶培养基 卵黄琼脂培养基,2019,-,24,产气荚膜梭菌菌检测程序,2019,-,25,推测性试验,水样过滤 依照水质确定稀释倍数，过滤50ml水样，用0.22m滤膜。若菌多可用0.1%蛋白胨水稀释。 培养：SPS培养基 361厌氧培养24h。 计数 对平板上黑色菌落计数。,过滤操作方式和滤膜放置培养时注意事项,2019,-,26,SPS上典型菌落（黑色）,2019,-,27,FT培养 35个黑色菌落接种，在361培养18h24h，取样革兰氏染色镜检。特征：革兰氏阳性粗大杆菌，可能有芽孢。 动力试验 穿刺接种，厌氧培养，看接种线情况判断有无动力，滴加甲萘胺液和对氨基苯磺酸液各0.5ml，观察硝酸盐是否被还原。特征：无动力，能还原硝酸盐为亚硝酸盐。 牛奶发酵试验 取1mlFT培养液接于含铁牛乳培养基，46水浴培养2h，观察有无“暴烈发酵”现象。发酵乳糖、凝固酪蛋白、产生大量气体。 卵黄琼脂平板 点种FT培养液，361，厌氧24h。产卵磷脂酶，接种点底部及周围形成乳白色浑浊带。,确证性试验,2019,-,28,含铁牛乳培养基 暴烈发酵现象,2019,-,29,卵黄琼脂平板（乳白色浑浊带）,2019,-,30,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考，实际情况实际分析,感谢您的观看和下载,The user can demonstrate on a projector or com