课件：变应性鼻炎实验动物模型.ppt

变应性鼻炎实验动物模型的建立,概述,概念：变应性鼻炎(allergic rhinitis，AR)是机体对外界致敏原，如冷空气、粉尘、螨虫、皮毛、油烟等的敏感性增高，由IgE介导的介质（主要是组胺）释放，并有多种免疫活性细胞和细胞因子等参与的鼻黏膜非感染性炎性疾病 。属于I型变态反应。,主要症状:喷嚏、鼻痒、 流涕、鼻塞。 检查指标： IgE 组胺 P物质,病理变化 基本病理变化为毛细血管扩张，通透性增加,腺体分泌增加以及嗜酸性粒细胞浸润，缓解期可恢复正常，长期反复发作时可引起粘膜上皮层增生性改变,导致粘膜肥厚和息肉样变；若合并感染，可为粘脓涕或脓涕。,正常对照,造模组,特点：变应性鼻炎的发病率高，发病机制复杂，因此建立一种既能反应变应性鼻炎典型症状，又能反映其病理生理改变的动物模型，有助于研究工作的进一步深入和开展。,诱发性动物模型,定义：通过物理的、化学的和生物的致病因素作用于动物，造成动物组织、器官或全身一定的损害，出现某些类似人类疾病时的功能、代谢障碍或病毒使动物患相应的传染病，又如用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物的肿瘤等。 优点：能在短时间内复制出大量疾病模型，实验条件易控制，重复性好。 缺点：和自然产生的疾病模型在某方面存在差异。,可建立模型的动物种类,豚鼠 较常用的有Hartley豚鼠 小鼠 目前常用的品系有BALBC、CBAJ和C57BIV6等 大鼠 封闭群是最常用的类型，分为Wistar大鼠、SD大鼠、LongErans大鼠、Brown-Norway(BN)大鼠。此外，还有近交系，突变系和杂交群。 猎狗 新西兰兔,1、豚鼠的祖先来自南美洲的安第斯山脉 2、Hartley豚鼠属于英国种 3、豚鼠对外界刺激极为敏感，对组胺极敏感，能引起支气管痉挛性哮喘，豚鼠血清中含有丰富的补体，是所有实验动物中补体含量最多的一种动物,其补体非常稳定，免疫学实验中所用补体多来源于豚鼠。 4、能耐低氧、抗缺氧,Hartley豚鼠,Hartley豚鼠：,BALB/c小鼠,BALB/c小鼠： 1、1913年从美国商人Ohio获得，1979年从美国引进。 2、常用于单克隆抗体的制备和研究；免疫细胞的分化和功能测定。,Wistar大鼠： 1、被毛白色，1907年由美国Wistar研究所育成，是我国引进早、使用最广泛、数量最多的品种。 2、对疾病的抵抗力尤以呼吸道疾病的抵抗力强。自发肿瘤率较低。对性激素感受性高。,封闭群Wistar,猎狗 1、易于驯养，适应性强； 2、视力差，红绿色盲，嗅觉灵敏； 3、具有发达的血液循环和神经系统以及大体上和人相似的消化过程，在毒理方面的反应和人比较接近，内脏与人相似,猎狗,新西兰兔： 1、兔毛色纯白，体健壮，性格温顺，易于管理。 2、用途：多用于免疫学研究，家兔的最大用处是产生抗体，制备高效价和特异性强的免疫血清。其制品广泛地用于人类各类抗血清和诊断血清的研制,新西兰兔,致敏原,经典的致敏原主要是TDl和0VA TDI:甲苯-2,4-二异氰酸酯，对机体具有半抗原性，需与载体蛋白如牛血清白蛋白合，形成完全抗原才能发挥致敏作用。有毒，在滴鼻建模时与真正的变应性鼻炎有一定区别 OVA：卵清蛋白是一种具有载体活性的抗原性蛋白质，具有很强免疫原性。0VA刺激性小，致敏后能产生持久抗体，因此成为目前建立变应性鼻炎最常用的致敏原 其他致敏原：真菌，豚草花粉，蛔虫，蟑螂，尘螨等。,常用佐剂：完全福氏佐剂、不完全福氏佐剂、AI(0H)3，和百日咳杆菌等。 建模过程：分为致敏和激发两部分。 建模所需时间：由于选择造模动物不同，造模方式不同而有较大差别，由1周到4个月不等，可以根据实验安排的时间选择造模方式。,佐剂：能增强抗原表面面积，延长抗原在体内保留的时间，使抗原与淋巴细胞有充分的接触时间。 完全弗氏佐剂=不完全弗氏 佐剂+分枝杆菌,佐剂,（一）豚鼠模型的建立,激发,致敏,以TDI为致敏原,10TDI醋酸乙酯滴鼻，1次/天，持续5天,间隔3W,重复上述步骤,用5的TDI10L滴鼻，隔天一次，4W,参考文献：Nakaya M, Dohi M, Okunishi K，et alNoninvasive system for evaluating allergeninduced nasal hypersensitivity in murine allergic rhinitisLab Invest。2006，86：917-926,（二）大鼠模型的建立,以Wistar大鼠为实验动物，OVA为致敏原,致敏,激发,将OVA0.3mg，辅以AI(OH)330mg作佐剂，加生理盐水1ml形成混悬液，行腹腔注射，隔日1次，共7次,用05OVA的生理盐水滴鼻，每侧0.05ml，每日 1次，共7次,参考文献：赵宇，CAndrew van Hasselt，吴港生，等卵白蛋白经鼻致敏建立变应性鼻炎动物模型中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，2005，40：176180.,（三）小鼠慢性变应性鼻炎模型的建立,用OVA2gkg加AI(OH)32 mg溶于1 ml的生理盐水中于BALBc小鼠腹腔注射，分别在第1天和第5天各1次,第12天开始以3OVA溶液滴鼻激发，每侧10l，连续7 d,3OVA溶液滴鼻，每周3次，隔天1次，共8周,参考文献：Nakaya M，Dohi M，Okunishi M，et al.Prolonged allergen Challenge in murine nasal allergic rhinitis：nasal airway remodeling and adaptation of nasal airway responsiveness . Laryngoscope2007，117：881885,（四）猎狗模型的建立,用豚鼠草200g加AI(OH)330mg溶于0.5ml生理盐水中对出生24h内的新生猎狗腹腔注射，1次/W，持续6W。,重复上述方法，两周一次，至第十六周,狗龄4个月开始，每次抽取5ml血液检测豚鼠草特异性IgE，每年4次,参考文献：Tiniakov RL, Tiniakova OP, McLeod RL, et al. Canine model of nasal congestion and allergic rhinitis J Appl Physiol 2003 94(5):1821-1828,动物症状体征的观察,行为学评分系统：通过激发，动物模型会出现打喷嚏、挠鼻、抓脸和鼻溢等症状。 评分标准： 鼻痒：轻度：1分，轻擦鼻几次 重度：2分，抓挠鼻、面不止，到处擦磨 喷嚏：13个为1分，410个为2分，11个以上为 3分。 清涕：流到鼻前孔为1分，过鼻前孔为2分，流涕 满面为3分。以叠加法记录总分，总分超过 5分即为建模成功。,处死动物 末次激发2小时后，股动脉放血法，处死动物。 动物模型可以用作： 1.鼻粘膜组织病理学检查 2.鼻粘膜组胺含量测定 3.死亡动物呼吸道解剖及组织病理学观察,（一）豚鼠,优点： 1 .体内含有丰富的补体，极易发生变态反应。豚鼠是过敏性休克和变态反应研 究的首选动物，特别是迟发型超敏反应与人相似。 2 .可以诱导出速发和迟发两相的症状，且症状典型。 3 .对药物敏感 4 . 适合做神经系统方面的研究，对于神经因素引起的变应性鼻炎尤其适合 缺点： 1.对于豚鼠基因和免疫系统认知较少，不适合做免疫机制的研究和基因操作。 2.豚鼠体质较弱，易生病，造模过程中需防止细菌感染。 3.致敏的豚鼠极易激活补体系统释放过敏毒素C3a和C5a等，迅速引起毛细血管 通透性增加、支气管平滑肌痉挛致死。影响造模成功率,（二）大鼠,优点： 1 . 遗传性状稳定，生命力顽强，嗅觉灵敏，对环境中的粉尘、氨气和硫化氢敏感，容易诱发出变应性鼻炎，但不如豚鼠敏感。 2 .容易产生针对吸人性变应原的特异性IgE抗体，迟发相反应显著 3 . 大鼠模型兼具豚鼠和小鼠模型的优点，可以运用现代基因工程技术也可以运用传统方法进行相关方面研究 4 . 相较于小鼠和豚鼠，大鼠体形适中，繁殖快，易饲养，给药方便，采样量适合且容易,（三）小鼠,优点： 现已对小鼠的免疫系统有较好的认识，适用于做免疫机制的研究 小鼠的基因图谱已绘制完整，可在发病机制的分子水平上进行研究，利用基因敲出和基因重组的小鼠研究分子的作用机制。 小鼠淋巴系统非常发达，对外来刺激敏感 小鼠性情温和、攻击性小、生长期短、繁殖力强,（四）猎犬,优点： 克服了小型动物实验结论不能很好推广于人