F-4500用细胞阳离子测量程序使用说明书.doc

用日立荧光光度计的FL Solution 软件测量细胞内阳离子程序的使用说明书请认真阅读并妥善保管本使用说明书。 在操作使用仪器之前，请认真阅读本使用说明书，充分理解与安全有关的注意事项。 为了让本使用说明书在需要时进行参照，请保管在方便取用的就近场所。HITACHI用日立荧光光度计FL软件测量细胞内阳离子程序的使用说明书目录前言1关于这本说明书1重要事项3预防电磁波的干扰31.电磁波可能会干扰这台仪器3 2.电磁场可能会影响这台仪器3产品的保修4安装、移机和售后服务7技术研讨和用户培训7其它的预防7 化学品和样品的处理7 关于这本说明书注意7 商标、证书8安全概要安-1 安全防范安-1 总的重要方针安-1 荧光光度计的注意事项安-3电安-3热源/火源安-3 数据备份安-3 抗计算机病毒的保护安-4 电源中断安-4 开关个人计算机安-51. 安装 1.1 检查装箱单内容1-1 1.2 细胞内阳离子测量程序的安装1-1 1.3 进入仪器序列号1-5 1.4 工具条的解释1-62. 操作2-1 2.1 操作流程2-1 2.2 设定条件2-2 2.2.1 普通标签2-3 2.2.2 仪器标签2-4 2.2.3 监控标签2-6 2.2.4 处理标签2-8 2.2.5 计算参数标签2-9 2.2.6 报告标签2-12 2.3 定义样品、注释和文件名2-14 2.4 测量2-16 2.5 测量期间为图表配一个标记2-173. 数据处理3-1 3.1 下载数据3-1 3.2 显示数据3-3 3.3 刻度的变化3-5 3.4 数据菜单3-7 3.4.1 设定时间偏移量3-8 3.4.2 减去背景3-9 3.4.3 减去曲线图3-10 3.4.4 删除点3-11 3.4.5 平滑处理3-12 3.4.6 计数参数3-13 3.4.7 标记3-14 3.4.8 覆盖3-15 3.4.9 数据处理后的存储3-17 3.5 建立标准曲线3-18 3.5.1 新标曲线的建立3-18 3.5.2 增加点3-20 3.5.3 FL阳离子校准文件的存储和打印3-214. 报告输出4-1 4.1 打印4-1 4.2 数据传到Excel上4-2 4.3 把谱图粘贴到Word上4-4 4.4 把数据转换成ASC码上4-7附录A附-1 A.1 设定扫描时间和周期时间附-1 A.1.1 实际周期时间的检查附-2 A.1.2 扫描时间的检查附-3 A.2 光电倍增管PMT电压和狭缝地设定附-4绪言非常感谢您购买与FL Solution程序相兼容的细胞内阳离子测量程序。这台仪器适合于有化学分析基础知识的人使用。请记住，不正确的使用分析仪器、化学品或样品，不仅会导致错误的分析数据，而且也不安全。在试图操作仪器之前，请仔细阅读这本说明书，以便熟悉仪器，正确操作。关于这本说明书这本说明书包含有警示指令，包含在荧光分光光度计F-2500/F-4500的操作说明书中。，在试图操作仪器之前，必须阅读它们。在使用报告发生器之前，确保仔细阅读这本说明书，以便保证正确的操作。重要事项预防电磁波的干扰1. 电磁波可能干扰这台仪器当该仪器用在住宅区或邻近区域，它可能受到无线电波和电视信号的干扰，为了防止这一点，利用特殊的系统连接线，它必须与说明书严格一致，这样仪器才能受到最小的电磁波的干扰。然而，不能担保电磁波不干扰这台仪器。如果该仪器受到了无线电波或电视信号的干扰，那就关掉仪器，再打开。如果用户试图纠正电磁波的干扰，请按下列去做： 增加仪器和无线电或电视接收信号之间的距离。 仪器不要和无线电收音机或电视机连在一起。2. 电磁场可能影响这台仪器如果这台仪器用在有强磁源的地方，干扰的噪声就可能产生，它会导致仪器性能或功能的不良效果。为了防止这一点，要使用规定的系统连接电缆，它必须严格与说明书一致。然而，也不能担保电磁波干扰不干扰这台仪器。如果仪器出现了电磁波的干扰，可关闭附近的电磁波干扰源。如果用户企图纠正这种干扰，请按下列措施去执行： 给仪器重定方向。 增加仪器和电磁干扰源之间的距离。 仪器的电源插座和电磁干扰源的电源插座要分离开来。 仪器的连接要不同于电磁干扰源的连接。 检查与仪器连接的其它设备不被电磁干扰. 产品的保修F-2500/F-4500荧光光度计在本手册所规定的性能内和下列给定的条件下，正常使用而产生的材料和性能的失效将给予免费修理。如果不在本手册要求下使用，就不予保修。（1） 保修的范围a. 由于设计或制造所造成的任何一个部件的缺陷，将免费给以修理、调整或更换。b. 代用品部件能够用于维修，或者用一个等价的产品取代c. 某一系统成分，如个人电脑和打印机为了改进而频繁地更换，而不适应原先的版本。（2） 保修的期限从安装之日起，保修1年。（不包括易损件，如氙灯）（3） 技术支持服务的有效性技术支持服务可适用于日立公司预先确定的工作日内。（4） 保修期的限定和排序注意，下列情况是排除在保修范围之内的。a. 由于没有特意请求日立人员安装而操作仪器所造成的失效b. 由于电源电压/频率没有按日立公司所要求的，或者由于电源不正常所造成的失效。c. 由于所使用的试剂、气体、空气或冷却水含有杂质而使管道腐蚀和恶化所造成的失效。d. 由于腐蚀的大气气体，造成电路的腐蚀，或光学元件变坏，所造成的失效。 e. 由于使用非日立公司指定的硬件、软件或备件，所造成的失效。f. 由于用户不适当的处理和维修所造成的失效。g. 由于没有经过日立公司认可和审定的维修代理的维护和修理所造成的失效。h. 没有经过日立公司批准就挪动位置或者转售他人所造成的失效。i. 由于在初始安装后，移位或运输中所造成的失效。j. 由于没有经过日立公司批准，就拆卸、修正或移动所造成的失效。k. 由于是消耗品和已达到使用寿命的备品备件失效所引起的故障。l. 本手册或其它文件中规定不保修的部件。m. 由于天灾人祸，包括火灾、地震、暴风雨、洪水、闪电、社会动乱、暴乱、犯罪、起义、战争、放射性污染、有害物质的玷污等所引起的失效。n. 由于计算机病毒的影响而造成硬件失效，系统软件、应用软件、数据库和硬盘的损坏。o. 由于电源电压的中断或电压突然变化而引起与仪器连接的电脑失效或系统软件、应用软件、数据库或硬盘的损坏。（如闪电或雷击等引起的）p. 由于在断开至电脑电源时，没有采取规定的、正常的关闭程序，而导致与主机连接的电脑失效或者造成系统软件、应用软件、数据库和硬盘的损坏。（5） 不承诺保修a. 日立公司对于特殊目的的使用和违反专利权的使用皆不予保修。b. 没有日立公司口头的或书面的信息或通知，它的销售人员、发行人、代理或雇员创建保修单或者以任何方式增加保修范围都是无效的。安装、迁移和售后服务这种仪器的安装应当由日立公司的有资格的技术人员，或由日立公司审定的维修代理人进行。在安装之前，用户应当做好根据这本手册所示的安装要求的准备。当需要搬迁时，（在安装完之后），请通知当地的日立销售代表或附近的日立维修部。技术研讨和技术培训为了使用户更深层次地理解这种分析仪器，日立公司为你提供技术研讨和用户培训。有关这方面更详细的信息，请找当地的日立销售代表，技术研讨和用户培训是要收费用的。其它的预防措施（1） 用户在处理、保存或丢弃所用的化学品或样品时，要遵守有关的法律或规则。（2） 试剂、标准液和质控样品在处理、储藏和丢弃时，要按照各自的供应商的要求去执行。关于这本手册的注意事项：（1） 本手册的信息，由于产品的改进，会有些变化，这将不另行通知。（2） 本手册的版权归日立公司所有。 （3） 本手册的内容，不经日立公司的书面许可，不得以任何形式或任何方式去复制或转送。商标承认书微软公司、Windows、Excel、Word和Windows 98都有美国微软公司的注册商标。在本手册中所用的其它商标名称和产品名称都是经过商标注册的，或者是它们相应的贸易名称。 安 全 概 要安全防护在使用F-2500/F-4500荧光分光光度计之前，必须仔细地阅读下面的安全指令。 总的安全方针遵守本说明书提供的所有操作程序。本仪器的安装和维修应由有资格的维修人员执行。必须遵守产品上和说明书中的警示标签，在说明书中有警报标题，它由报警符号和信息单词组成，信息单词有：危险、 警告、注意 危险：它指示有紧急的危险状态，如果不避免，将导致人员死亡或严重伤害。 （这个警示没有出现在产品标签上。）警告：它指示有潜在的危险状态，如果不避免，将导致人员死亡或严重伤害。 注意：它指示有危险状态，如果不避免将会导致较小的或中等的伤害或给仪器造成损害 这是报警符号，它出现在危险报警文字的前面，和本说明书安全叙述的左前面。安1 安 全 概 要总的安全方针（连续）“NOTE”和“NOTICE”是标题词，它不直接涉及到人员的安全。告诫：该指令是为了预防产品的损害注意：该指令是为了保证正确的使用仪器和正确的分析在更换部件时，使用非指定的部件时，不要修改这个指令，也不要除去安全符号，否则是很危险的。在交货安装、维修和搬迁时，应提交日立公司有资格的维修人员当有疑问时，不要执行任何操作，应当与当地的日立公司销售代表或附近的日立公司维修部联系。当分析操作使用化学品时，确保房间的合适的通风，通风不良会危及到你们的健康。要保持清醒的头脑，在本手册中和仪器上的危险标记并不覆盖一切可能，因为不可能预知和评价所有的情况，所以必须警惕和使用你的感觉器官。安-2 安 全 概 要荧光光度计的安全注意事项电 确保光度计施加的电流为100V交流，功率为1KVA或更高些，频率为500.5赫兹或600.5赫兹。如果电源电压波动，或者噪声施加到电源线上，光度计会受到负面影响，这将会导致错误产生。确保电源线上有地线连接，接地电阻应是100欧或更小。 检查地线连接是否正确，如果地线连接不正确，光度计可能受到外部噪声的攻击，或者可能产生偏离电压，这将会导致电击的危险。光度计的内部使用了高压电路，为了防止电击，在操作时，不要打开盖子，除非必要时才打开。热源/火源 不要把光度计放在有烟雾或有火焰的地方。数据备份存在硬盘中的数据，会因为系统失效，错误操作，计算机病毒的感染而丢失，为了确保硬盘在意外的损坏的情况下数据的完整性，把硬盘文件拷贝到软盘上去，制作必要的备份。 为了防止硬盘上有错误的操作，总是保存约100兆的自由空间作为应用软件的工作区。安-3 安 全 概 要计算机病毒的防护 如果某个程序或数据突然受到损害或操作/屏幕遭到意外，计算机可能是遭到病毒的干扰。 计算机病毒是恶意的程序，它在计算机中暗中作祟，使计算机异常或数据损坏，有一个防病毒的程序被称为疫苗程序。 引起病毒干扰的原因是： 通过通讯下载了带有病毒的程序。使用带有病毒的软盘或其他存储介质。注意，一旦计算机受到病毒的干扰，利用杀毒软件来杀灭病毒，注意，某些杀毒软件是不可能根除实际的病毒，因此，确保预先为硬盘文件制造备份。 电源中断 由于电源中断或光闪，使得瞬间电压下降，这样，计算机可能失效，或者系统软件，应用软件或数据可能损害，为了防止瞬间电压的下降，可使用不间断电源装置。安-4 安 全 概 要计算机电源的开与关当计算机硬盘驱动器或软盘驱动器工作时，请不要关闭计算机，如果硬盘关闭，计算机可能失效，所存储的数据和软件可能被损害，在关闭计算机电源之前，确保离开荧光光度计的控制和数据处理程序，（FL软件程序）。然后使用系统软件关闭程序。安-51. 安装1.1 检查装箱单内容 按照装箱单检查装箱的内容，如有缺少、损坏或有什么提问，请找销售代理。1.2 细胞内阳离子测量程序的安装 为了运引这个程序，就必须用所提供的安装盘来安装。 购买这个程序后，仅需一次安装，而不是每次都需要启动操作。 把软盘上给定的信息A盘拷到目标盘C盘上。 注意：在安装细胞内的阳离子测量程序后，要确保FL软件已经安装上。（1） 点击Windows 98的开始按钮，并选择设置控制面板，一个窗口被显示。如图1-1所示。 1-1（2） 双击添加/删除程序图标，一个窗口被显示。如图1-2。（3） 当窗口如图1-3被显示时，把第一个所提供的系统盘插进软盘驱动器中，并点击Next。1-2（4） 当图1-4窗口被显示时，点击Finish。（5） 安装开始。当安装完成时，图1-5窗口将被显示。（6） 启动FL Solution程序。（7） FL Solution程序开始，图1-6初始化窗口显示。1-3（8） 下一步监控窗口被显示。如图1-7。参考：程序的重新安装首先必须删除已存在的程序，然后按下列步骤安排新的程序。选择开始设置控制面板，然后双击添加/删除程序图标，一个窗口将显示。如图1-8所示。在程序表中，选择“FL Solution”，点击添加/删除。当删除完成时，点击OK。现在你能安装FL Solution程序了。1-41.3 进入仪器序列号 从工具条上选择仪器命令，或点击按钮，一个窗口将被显示。如图1-9所示。 点击Instrument，然后点击Serial Number，一个窗口将被显示。如图1-10所示，进入你的仪器号。 进入后，点击OK，已进入的序列号被存储。作为一个分析条件，它在数据文件中，也能被打印。1-51.4 工具条的解释 屏幕上工具条可提供较简易的操作。 标准化工具条上的按钮及其功能如表1-1所述。 用于细胞内钙的测量程序的按钮，逐条解释如下。表1-1 标准工具条按钮功能按钮功能创建新的分析方法/样品表打开打印窗口打开数据文件指示光度计连接的状态存储该打开的文件指示FL的版本数据等存储一个已选择的字符串或图解项到剪贴板上请求帮助窗口粘贴剪贴板上的内容表1-2 测量工具条按钮功能按钮功能打开分析窗口停止测量显示窗口，为了进入样品名和注释关闭块门开始测量打开块门在测量下，设定图解标记1-6表1-3 谱图工具条按钮功能按钮功能恢复原先的刻度描绘谱图显示规则线表1-4 仪器工具条按钮功能按钮功能执行波长驱动纵标上减半指示执行自动预扫为纵标选择自动刻度指示，因此，谱图能够见到调节零点显示规则线纵标上双重指示表1-5 处理工具条按钮功能按钮功能打开特性窗口执行平滑处理数据文件的输出报告为设定浓度，显示浓度窗口为设定时间轴偏移量显示偏移量窗口重新设定先前的数据为设定删除数据点，显示删除窗口添加数据点，这显示产生的标准曲线1-71.5 终止程序 在完成测量之后，执行下列程序。 从File菜单中，选择Exit命令。图1-11 选择Yes，FL Solutions 程序将结束。1-82. 操作 你现在将要学习如何运行细胞内阳离子测量程序。为了掌握标准的波长扫描、光度值法、时间扫描和三维扫描方法，请参阅日立荧光光度计使用手册的FL Solutions 程序版本。本节涵盖测量条件的设定。 测量之后的数据处理，在第3节中解释。要使光度计、PC机等的电源打开，并使FL Solutions 程序已经启动。如果程序还没运行，要根据仪器手册的FL Solution版本启动它。2.1 操作的流程 当FL Solution程序启动时，一个窗口就显示，如图2-1所示。 通过顺序点击测量工具条上的按钮可执行测量，测量工具条再屏幕的右上侧。屏幕上每个按钮的描述，参阅1.5节。 1. 设定测量条件2. 进入样品名称和注释3. 点击测量按钮4. 执行数据处理5.打印分析数据每一步详述如下。2-12.2 设定条件 点击按钮或选择EditMethod。一个窗口就出现了，如图2-2所示。 细胞内阳离子测量程序的方法窗口包含有六个标签，如下所述。普通标签： 选择测量类型。仪器标签： 设定测量波长和扫描时间。监控标签： 确定在监控窗口中显示的纵坐标和横坐标。处理标签： 设定是否自动执行数据处理，例如测量后的平滑处理。计算参数标签：设定在测量结束时，用于显示合成浓度图表的计算公式。报告标签： 设定打印项目。 每个标签详述如下。2-22.2.1 普通标签 当点击普通标签时，一个窗口显示如图2-3。图2-3 普通标签 普通标签包含有下列参数。 测量从下列六个测量模式中选择一种测量模式。波长扫描时间扫描光度值法三维扫描（对于F-2500来说，是选项程序）细胞内阳离子扫描偏振扫描（对于F-4500来说，是选项程序） 让我们选择“阳离子扫描”。 操作者 进入分析者的名字。当这个系统用于网络中，为网络设定的名字在初始中被显示。输入的字符数，最多20个。 仪器 连接仪器的模块名称被显示。 加样 标准 当用手工进样时。2-3 注释 进入测量条件的解释或警告。 下载 点击这个按钮，为了下载已存储的方法。通过点击窗口打开，文件显示。 存储 所以六个标签的参数设定完之后，点击这个按钮，方法能被存储。当点击这个按钮，数据将覆盖现存屏幕。 存储到 点击这个按钮可把设定的条件存储到新的名字下。当“Save As”窗口出现时，你应当进入文件名称。 2.2.2 仪器标签 当在方法窗口的普通标签中设定光度值法测量时，显示出现。当选择仪器标签时，一个窗口被显示，如图2-4所示。图2-4 仪器标签 试剂号设定用于测量的试剂号。当你选择“2”时，“试剂2”的条件就变成设定值了。 试剂名进入每个试剂的名称，最多可输20个字符。2-4 波长数选择每个试剂的波长。当选择“2”时，“EX WL2”和“EM WL2”就被进入了。 激发光波长进入每个试剂的激发光波长。对于F-4500，进入的保持范围是200至900nm，以1nm递增。对于F-2500，进入的保持范围是220至800nm，以1nm递增。 数据模式对于荧光，数据模式是固定的。 扫描时间进入扫描时间，它在20至7200秒之间。 周期时间进入周期时间，它在0.2至25秒之间。 延迟时间进入从点击测量按钮到实际开始测量之间的时间。有效的输入范围：09999秒。 激发光狭缝选择激发光侧的狭缝宽度（以nm计）F-2500F-45002.55.010.020.01.02.55.010.020.02-5 发射光狭缝选择激发光侧的狭缝宽度（以nm计）F-2500F-45002.55.010.020.01.02.55.010.020.0 光电倍增管监测器的光电倍增管的电压是手控在设定的电压下。选择下面的一个电压，设定范围是400至700V，以两位数增加。 900V (F-4500)700V400V2.2.3 监控标签 这个标签选择后，一个窗口被显示，如图2-5所示。 2-6 下面一列参数被设定。 Y坐标（最大值） 在监控窗口中进入纵坐标的最大值。 Y坐标（最小值）在监控窗口中进入纵坐标的最小值。 X坐标（最大值）在监控窗口中进入横坐标的最大值。 X坐标（最小值）在监控窗口中进入横坐标的最小值。 在数据获得后，打开数据处理窗口。在样品测量后，选择是否执行数据处。当这个按钮被选择时（检查标记），对于测量的数据的数据处理窗口将显示在图标上。当你打开这个图标，数据处理，例如峰检测被允许。注意：当你的PC机的存储器的剩余容量时非常小时（系统资源小于20），数据处理窗口将打不开，即使按钮被按压时。在这种情况下，关闭当前积极的数据处理窗口或者重新启动FL Solution程序。数据获得后的打印报告。样品测量后，选择是否打印报告。当这个按钮被选择时，在测量后，将自动打印程序。在报告标签中该项目被选，将进行打印。2-72.2.4 处理标签 选择处理标签，打开一个窗口，如图2-6所示。图2-6 处理标签 处理的选择 数据处理的方法被列成表（Savitsky-Golay主滑处理，平均主滑处理，中值主滑处理）。选择你的方法，点击向右箭头，它在处理选择和处理步骤之间。被选择的方法将指示在最新的命令中，以便马上执行。 处理步骤 处理顺序被指示在这个区域中。如果你想删除处理方法，请选择它，并点击向左箭头，它在处理选择和处理步骤之间。被选择的方法将从这个领域中抹去。 当你在这个领域内双击任何一种平滑方法时，你将被允许改变平滑参数（平滑顺序、点的序号等等）。如果测量在中途停止，基于数据点的序号能被检查，通过处理标签来检查。它在准备窗口中，可存储数据。 平均 进入开始时间和结束时间以便平均。 动力学法 进入开始时间，结束时间和K-周数以便动力学计算。2-82.2.5 计算参数标签 当计算参数标签被选择时，下列窗口将被显示。如图2-7和2-8所示。现在，我们选择一个实验浓度计算方法。 从三种方法中选择一个计算公式（等式1，等式2和校准）。等式1和等式2随着所进入的波长数的变化而变化，而波长数的设定在仪器标签中。2-9 公式1： 公式2： 在这儿 C: 浓度 F: 荧光温度 F1max: 在标准钙或钙范围中的荧光温度 F1min: 在0钙或没有钙中的荧光温度 a: 常数 Kd: 对于探测器或指示器的分裂常数（用户确定）2-10 公式1： 公式2：在这儿 C： 浓度 F1，F2： 波长1和波长2的荧光温度 F1max，F2max：波长1和波长2在标准钙或钙范围中的荧光温度 F1min，F2min：波长1和波长2在0钙或无钙中的荧光温度 Kd： 探测器或指示器的分裂常数（用户定） 校准 这个方法的选择显示下载校准按钮和系数a0,a1,a2，取决于相应的次数。当点击Load Calibration 按钮，校准曲线文件变成可选择的。当校准曲线准备好了，这个功能才有效。至于建立校准曲线的方法，参阅3-5节“产生标准曲线”。2-112.2.6 报告标签当你选择报告标签时，下列窗口被显示，如图2-9所示。 方法窗口中的报告标签包含有分析报告的输出。 输出 打印报告 使用Microsoft Excel 使用它可把数据传递到Microsoft Excel上。 使用打印发表 当时用分离的可用报告发生器时，可选择这一项。 见报告发生器使用手册。 定位 当在打印方法中选择报告打印时，可选择这一项。选择打印的方向，既可以是风景式，也可以是肖像式。当肖像被选择时，能够打印数据和分析条件。 样品名 在覆盖光谱的情况下，这一项要选择。2-12 打印（传送的）项目 包含日期 包含方法 动力学法 平均 标记 包括图表（从荧光强度、比值、浓度中选择） 包括数据表（从荧光强度、比值、浓度中选择） 打印周期和数据范围也被设定。 反射 使用这个按钮来设定所有被覆盖样品的相同项目。 打印机字形 点击这个按钮可改变用于报告中的字形。 注意：用波长数设定位“1”时进行测量，此时，比值不能被计算。因此，即使比值项被选择时，打印或传送是不可能的。2-132.3 定义样品、注释和文件名 样品名和文件名必须在测量前就得定义。调出监控窗口，点击按钮，下列窗口被显示，如图2-10所示。 进入样品名和注释。为了在测量后能自动存储结果，在“Auto File”中放置检查标记，然后点击选择按钮。 确定“Save in”（为了存储目的），然后进入“文件名”。进入后，点击Save，另一个窗口被显示，如图2-12所示。2-14 如果忘了进入文件名，一个文件名。例如“defautool.fdm”将自动赋值。当你执行下一个测量而没有改变第一次测量的设定时，如图2-12所示，文件名将由“sampleool.fdm”变成“sampleooz.fdm”。如此等等。 为了把该图谱作为图文文件，在“图文文件自动存储”中放置一个检查标记，数据将存储在相同的文件名下（*.wwf）。就像存入的文件一样。 即使自动存储没有设定，测量后仍能存储。2-152.4 测量 有两种方法用于启动测量。a) 从光度计菜单中选择测量命令。b) 点击（测量）按钮，它在测量工具条上。 为了延缓测量，点击停止按钮，它在工具条上。测量数据一直到停止按钮被点击的那儿得点上，这些测量数据将被存储（当自动存储被选择时）或被显示。 完成测量之后，数据将自动显示，如图2-13所示。 当通过监控标签，“数据获得后，打开数据处理窗口”被选择时，打开这个文件，并执行数据处理。如果“Auto Save”被设定，数据将自动存储，见2.3节。如果“Auto Save”没有设定，从文件菜单中选择存储命令以便存储数据。2-162.5 测量期间为图表配一个标记 当点击时，在图表的X坐标上出现一个三角形（）标记，它在被点击的位置上（时间点）。如图2-14所示。 仅在测量期间内，这个三角形的标记时不能是不能设定的，但是测量之后仍能设定，参考第3节。2-173 数据处理3.1 下载数据让我们调出已存储的数据，点击（打开）按钮或选择文件打开。下列窗口将被显示，如图3-1所示。图3-1 当选择数据文件的文件类型时，被选择类型的文件将在下表中。找出所需的文件，点击“打开”，然后，数据文件将打开。下列文件类型是会用的。 FL波长扫描文件（*.fds） FL时间扫描文件（*.fdt） FL光度值文件（*.fdq） FL阳离子扫描文件（*.fdm）三维扫描文件（*.fd3） FL偏振时间扫描文件（*.ftp） FL偏振波长扫描文件（*.fwp） FL阳离子校准文件（*.fdc） FL方法文件（*.flm） FL样品表文件（*.fls） FL报告文件（*.flr） FL已处理的数据文件（*.fdp） F-4500 FL波长扫描文件（*.fds） F-4500 FL时间扫描文件（*.fdt） F-4500 FL光度值文件（*.fdq） F-4500 FL三维扫描文件（*.fcd）3-1 F-4500 FL阳离子扫描文件（*.dat） F-4500 FL校准扫描文件（*.cal） F-4500 FL偏振时间扫描文件（*.fpt） F-4500 FL偏振波长扫描文件（*.fpw） 所有文件（*.*） 当你打开一个数据处理文件时，下列指示出现在标题栏中。 文件名.fdm，样品名，试剂1或2 “试剂1或2”表示数据起源于哪个试剂，如果样品名没有进入，“1”“2”“3”将被指示。当波长数是2，对于试剂1，指示1；而对于试剂2，指示为“2”，样品名将变成1或3。当波长数是“1”，对于试剂1，指示1；而对于试剂2，指示为“2” ，样品名将变成1或2。3-23.2 数据的显示 当你打开数据处理窗口时，一个显示画面如图3-2所示。 选择观看菜单，它在数据处理窗口。你能够选择显示和不显示工具条，以及谱图画面下指示方法。 3-3组合 当荧光值、比率和浓度图形中的任意两个图形被当前显示时，这个功能可执行。图3-4显示的荧光值和浓度图形的组合。 在这种组合中，左侧纵坐标表示荧光温度，右侧纵坐标代表浓度。 注意：1. 在不同的组合中，左、右纵坐标设定如下。 荧光强度和比值图形的组合。 左侧：荧光温度 右侧：比值 比值和浓度图形的组合。 左侧：比值 右侧：浓度 荧光强度和浓度图形的组合 左侧：荧光强度 右侧：浓度 2. 当用鼠标改变刻度时，两个图形的纵坐标都将改变。3-43.3 刻度的改变 X坐标和Y坐标的数据刻度能通过两种方法来改变，一是数字进入，另一个是用鼠标操作。（1） 通过数字进入来改变刻度点击（准备）按钮并选择坐标标签。图3-5 坐标标签在“最大”或“最小”的场所为X坐标和Y坐标进入所需的数字值。Y坐标刻度设定为某个模式（数字、比值、浓度）存储以后，初始的值就是这些值。 X坐标进入X坐标的最小值和最大值，在这儿显示进入的范围。坐标的单位在方法窗口中设定，最初的值是数据文件的最大值和最小值。 Y坐标进入Y坐标的最小值和最大值，在这儿显示进入的范围。坐标的单位在方法窗口中设定，它随着测量模式的变化而变化。初始值得最小值比数据文件中最小值得5%小，初始值得最大值比数据文件中的最大值的5%大。 默认范围返回到X和Y坐标的初始值。 3-5 （2）通过鼠标操作来改变刻度1. 把鼠标的指针指向要放大区域的一个顶点（矩形）。2. 当按压鼠标的左键时，移动鼠标至要放大区域的对角线的相反位置。现在这个区域被封闭，如图3-6所示。3. 释放鼠标按钮，指定的区域将被显示在满刻度上。4. 为返回到原来的刻度，请点击按钮。或者选择观看重新设定坐标。或者是点击鼠标右键，并选择重新设定坐标。3-63.4 数据菜单 当你选择数据菜单时，一个下拉菜单显示如图3-7所示。 数据菜单包含有处理功能，如下列所示。 设定时间偏移量 减背景 减图表 删除点 平滑处理 计算参数 标记 覆盖 每个处理功能详述如下3-73.4.1 设定时间偏移量 这个功能用来选择适当的时间点作为时间零。尽管这个处理仅仅对于测量数据是有效的，它将从测量数据中导致所有数据（比值、浓度）计算。时间零点（偏置）仅为曲线图设定的，为了选择新的偏移量，时间零点必须返回导原先点，再重新设定数据。 为了设定测量数据图形的零点：1. 点击按钮或选择数据设定时间偏移量，一个窗口将显示，如图3-8所示。直线光标出现在这个窗口，光标位置上的信息在这儿显示。2. 按照下列方法设置所需时间点的偏移量，点击Offset和右击微量指针或键入该时间点。3. 在完成偏移量进入之后，点击OK按钮，谱图将按时间零点被显示，该零点时按规定的偏移值移位。为了使谱图返回到数据处理前的状态，请点击图标。屏幕上的谱图能够通过鼠标操作而放大，并且，放大的刻度能够通过双击鼠标而重新设定。3-83.4.2 减背景 这个功能用于从测量数据的图形上的所有数据点减去背景。选择数据减背景，将显示一个窗口，如图3-9所示。图形的刻度可通过鼠标操作来改变，在该窗口中出现一条直线光标，光标位置的信息被指示。图3-9 这个窗口包含设定下列元素 F1的背景 进入一个被减去的值，它作为背景值，从第一波长的数据减去这个值。 F2的背景 进入一个被减去的值，它作为背景值，从第二波长的数据减去这个值。 重新设定 重新把背景水平设定为0。 首先，点击“F1的背景”（“F2的背景”），然后在谱图上所需要的位置上右击鼠标。 对应于光标位置的背景值将在相应的对话框中显示。在完成背景水平设定之后，点击OK。在背景减法被显示之后，设定窗口将消失。背景水平的设定仅在有谱图的情况下，为了选择新的背景水平，当前的背景水平必须返回到原先的水平，它通过选择数据重新设定来操作。3-9 为了把谱图返回到数据处理之前的状态，点击。屏幕中的谱图能够通过鼠标操作来放大，放大的刻度能够通过双击鼠标来重新设定。3.4.3 减谱图 谱图之间的减法能够执行。但是，FL阳离子扫描文件（*.fdm）的其它数据处理窗口在当前没被显示或者当设定的波长数是不同的，这个功能是不适用的。 计算公式如下：（所需的谱图）=（当前谱图）-（缩放比例常数）（被选择的谱图）当选择数据减谱图时，一个窗口被显示，如图3-10所示。图3-10关键元素详述如下： 缩放比例常数进入一个常数，以放大所选择的谱图。 图表在图表对话框中，当前显示FL阳离子的扫描文件的文件名（窗口题头）被指示。选择完成之后，点击OK。从当前窗口中的数据减去别选择的图谱，该窗口将消失，一个谱图将被显示。如果你要放弃数据处理，请点击Cancel。为了使该图谱返回到数据处理之前的状态，请点击。3-103.4.4 删除点 数据点能被从光谱数据中删除，被删除时间点的数据通过使用调节点的数据的扦补来产生。 点击按钮或选择数据删除点，一个窗口被显示，如图3-11所示。图3-11 波长（1，2） 选择要删除数据的谱图。 表格 被显示谱图的数据清单（处理前的测量数据）。 清除所有 清除所有要删除的做法。 为了数据点的删除：1. 选择一个要删除的数据点，点击数据表上的数据值，或者选择波长1或2，然后右击鼠标指向谱图上要删除的数据点。2. 为了取消你的选择，点击数据表上的相应的时间单元。当你希望消除所有的选择点时，请选择“Clear All”。3. 在完成选择之后，请点击OK按钮。所选择的数据点将被删除，修改后，谱图将重新显示。为了使谱图返回到数据处理之前的状态，请点击。屏幕上的谱图能够通过鼠标的操作而放大。并且，被放大的刻度能够通过双击鼠标而重新设定。 3-113.4.5 平滑处理 在数据菜单中选择平滑处理命令或者点击按钮，一个窗口被显示，如图3-12所示。 这个窗口包含下列参数，每个参数叙述如下。 功能类型 选择下列三种平滑方法中的一种。 Savitskg-Golay 平均 中值 平滑处理的方次 给平滑处理赋值方次。 有效输入范围：2至4 点数 给用于计算的数据点数赋值。 有效输入范围：1至100 为了返回到原先的状态（计算前），请点击。3-123.4.6 计算参数 对于浓度显示的计算公式是可以改变的，点击按钮或选择数据计算数据，一个窗口被显示，如图3-13所示。 等式1/2 计算公式取决于设定的波长数。每个常数值“Kd”和“a”能够进入，每个使用计算得出的Fmin和Fmax的值也可以进入。为了进入，请按Fmin或Fmax按钮或在轨迹上按右键。当前的迹线值将被进入，所需要的值也能用键盘进入。 校准 当你想为计算使用校准曲线时，请选择这个按钮。这个按钮被选择之后，再选择Load Calibration按钮，点击这个按钮以选择文件（*.fdc） 自动最小/最大 为了使用浓度计算能够自动设定Fmin和Fmax。设定之后，点击OK按钮，数据将根据确定的条件重新计算，并且结果将被显示。 屏幕上的谱图能够通过鼠标操作进行放大，并且已放大的刻度能够通过双击鼠标而重新设定。3-133.4.7 标记 在所有谱图的横坐标上能够显示三角形（），这些谱图表示荧光强度、比值和浓度，它们在数据处理窗口。为了进入标记信息，选择数据标记，一个窗口被显示，如图3-14所示。 使进入到时间和注释区域。进入之后，点击OK按钮，将显现在进入的时间点上，这个时间点是在谱图上显示的。图3-15显示标记在已进入的时间点85秒，200秒和255秒上。 标记信息最高可进入5个点。3-143.4.8 覆盖 这个功能用于两个或两个以上谱线的比较。从数据菜单中选择覆盖命令，最多可选择10条谱线（高达5个数据文件）。点击扦入。被覆盖的一列文件将被显示，选择所需的文件名，并点击打开“Open”按钮，显示将以所选择的样品名而更新。如图3-17所示，然后点击Close。3-15为了从覆盖窗口删除，再次显示一个窗口，如图3-17所示。选择相应的样品名，并点击Delete。或者从预览菜单中选择Stack或Tile命令，然后点击按钮并选择显示谱图标签。一个窗口被打开，如图3-18所示。点击要显示的谱图，然后点击OK。在覆盖的谱线中，光度值在每个谱线的颜色相对应出被指示，如标记（1）所示。样品名被指示，如标记（2）所示，峰值表和比值计算结果表将不被显示。注意：覆盖的数据不能够被存储。3-163.4.9 处理后的数据存储 数据处理，例如平滑处理之后的文件能被存储。数据处理之后，选择FileSave as，一个窗口被显示，如图3-20所示。 进入文件名，并点击Save，在这儿存储的文件有一个“*.fdm”格式。3-173.5 创建标准曲线 样品的浓度能够通过标准曲线的计算而得到。在执行这个功能之前，标准曲线需要被选定，建立的方法在下面进行描述。3.5.1 新标准曲线的建立 点击或选择FileNew。一个窗口被打开，如图3-21所示。 选择“Calibration Curve”并点击OK，然后出现一个窗口，如图3-22所示。3-18 这个窗口包含有设定项目，如下列所示。 校准模式既可以选择浓度数据型，也可以选择浓度比率型。 校准类型选择线性或二次方类型。 标准数为标准曲线进入标准数，有效输入范