癌基因与抑癌基因课件

癌基因与抑癌基因 oncogene 22), PHILADELPHIA CHROMOSOME (Ph1) MUTATION AND ACTIVATION OF CANCER CAUSING GENE abl to bcr = hybrid gene with tyrosine kinase activity Chronic Myelogenous Leukemia bcr-abl gene product the Philadelphia (Ph) chromosome Ideogram and banded chromosomes showing the normal chromosomes 9 and 22 plus the two derivating chromosomes resulting from the t(9;22)(q34;q11) The Ph chromosome was the first consistent abnormality noted in a human cancer, arising from a reciprocal translocation, t(9;22)(q34;q11.2), and molecularly by the fusion of the proto-oncogene ABL, located on the long arm of chromosome 9, with the BCR gene of chromosome 22, known as the breakpoint cluster region (bcr). DNA甲基化状态的改变可导致基因结构和 功能的异常，是细胞癌变过程中重要一步。 在真核细胞中最重要的甲基化碱基是C, 通常发生在双核苷酸区域（CpG岛）。 某些癌基因低甲基化和抑癌基因的高甲 基化改变是细胞癌变的一个重要特征。 甲基化状态的改变与基因点突变、基因 缺失及基因表达异常的发生有密切关系 （四）癌基因甲基化改变 (oncogenes methylation) 甲基化的功能意义：抑制基因表 达，维护染色体完整性，调节 DNA重组。抵御外来入侵的寄生 DNA。 低甲基化抑制基因组中重复子同 源重组，而导致基因组的不稳定 性增加。 mutations at promoter controlling gene expression 基因表达是指基因的转录与翻释以及它们的调控 。 基因表达水平的改变是细胞癌变的早期事件，过 量表达与细胞的异常增生有关 Met、c-ErbB2、ras （五）基因过量表达(overexpression of oncogenes ) 与人类肿瘤相关的特征性基因有三种，H-ras、K-ras和N- ras，分别定位于11、12、1号染色体，前二者是大鼠肉瘤病 毒的转化基因，后者是从人神经母细胞瘤中分离得到 （一）ras基因家族 常见癌基因 共有特征 (1)基因组中均含4个编码的外显子 和1个5端非编码外显子. (2)外显子所编码的蛋白为188-189 个氨基酸残基，分子量为21KD即P21蛋 白，具有高度特异性和同源性，尤其在 氨基酸序列的前80个氨基酸残基中，几 乎无种属间差别，具有高度保守性。 Model of Action of ras Gene (1)P21ras位于细胞膜内 侧，以软脂酸共价键形 式固定于脂质双层膜的 内表面 (2)对GTP和GDP具有高 度亲和力，并有同源性 GTP酶的活性. 生化性质 与G蛋白非常类似，提示 ras蛋白可能也具有信号 传导通路的作用，但目 前尚未发现ras蛋白作用 的特异受体和靶细胞. (二)myc基因家族及其表达产物 c-myc定位于第8号染色体的8q24区，其编码产物为439 个氨基酸残基的蛋白质。 N-myc定位于第2号染色体的2p23-p24区，其产物为456 个氨基酸残基蛋白质。 L-myc定位于第1号染色体的1p32区，编码产物为364个 氨基酸残基的蛋白质。 蛋白产物定位于核内，为核转录调节因子，能够与特殊的 DNA顺序结合 发生肿瘤时，myc基因家族成员可发生染色体基因易位、 基因扩增以及表达过度。 Myc-activated mechanisms of action （三） erb家族 表达产物：细胞骨架蛋白表达产物：细胞骨架蛋白 在细胞运动、分裂、信息传递、能量转换、在细胞运动、分裂、信息传递、能量转换、 代谢调控以及维持细胞形态方面具有重要作用代谢调控以及维持细胞形态方面具有重要作用 。 人人erberb-B-B编码的是编码的是“掐头掐头”的表皮生长因子的表皮生长因子(EGF)(EGF) 受体，这个受体，这个“截短截短”受体和其配体受体和其配体- -表皮生长因表皮生长因 子长期结合，从而可永远向细胞内传导促进生长子长期结合，从而可永远向细胞内传导促进生长 的信号。的信号。 与野生型受体相比，跨膜区域无变化，但受与野生型受体相比，跨膜区域无变化，但受 体的两端变短，尤其是全部细胞外结构区域都被体的两端变短，尤其是全部细胞外结构区域都被 删除。删除。 The ErbB signalling network c-erbB-2/HER2/neu Molecular diagnosis of breast cancer. a | Immunohistochemistry and b | fluorescence in situ hybridization (FISH) analysis of ErbB2 in human breast cancer. Immunohistochemistry was performed using HercepTest and FISH using a PathVysion ErbB2 DNA probe kit. The ErbB2 gene is seen as red fluorescence and the chromosome -17 centromeric -satellite probe as green fluorescence. （四）c-Met 染色体7q31，编码190KD跨膜糖蛋白， 链（50KD） 在胞外，链（145KD）含胞外配体结合区、跨膜区、胞 内酪氨酸激酶区。 蛋白表达位于腺样结构细胞的边缘。肝细胞因子（ HGF）或离散因子（SF）作为c-Met受体的配体，形成 HGF/SF-c-Met内分泌信号系统。 配体结合可使受体酪氨酸激酶磷酸化，促进细胞有丝 分裂、细胞动力和向腺上皮的形态分化 扩增和过表达肠型胃癌 基因重排：1号chr的易位启动子区(tpr)与c-Met gene 5 区融合形成tpr-met gene。在浅表性胃炎、萎缩性胃炎、 肠化和胃癌组织中均存在tpr-met mRNA高表达。 （五）Bcl-2 从B细胞淋巴瘤中鉴定出来，由染色体t(14;18)(q32;q21)易位而 激活，导致易位细胞中Bcl-2表达失控。 Proliferation: Malignancy P53: Molecular Policeman Bcl-2 （六）Mdm-2 位于12q13-14。进化保守基因 ，高表达时现癌基因功能 基因产物是90000Da的蛋白质， 氨基酸序列分析发现具有一个核 定位信号和两个锌指蛋白，提示 是一种DNA结合蛋白，具有转录调 节作用. Mdm-2蛋白可与p53&Rb蛋白结合 而使其功能失活。基因产物可和 wtp53和mtp53结合，起到对p53的 负调节作用。抑制p53介导的反式 激活，阻止p53抑制细胞增殖和诱 导细胞凋亡的功能，解除细胞G1 期的阻滞并重新进入细胞周期。 mdm2癌基因已在多种肿瘤中发 现其突变与扩增，而且mdm2突变 与P53突变不共存，mdm2扩增与肿 瘤转移密切相关 （七）细胞周期素（ Cyclins）/细胞周期素依赖 性激酶（Cyclin-Dependant Kinases ，CDK) 第二节第二节 抑癌基因抑癌基因 （anti-anti-oncogenesoncogenes，tumor suppressor genestumor suppressor genes） 抑癌基因的基本概念 抑癌基因作用机制 Rb基因“控制细胞周期的重要基因 ” p53基因“基因组卫士” 一、抑癌基因的基本概念 概念：是一类抑制细胞过度生长、增殖从而遏制 肿瘤形成的基因。 它的丢失或失活与肿瘤的发生有关。反之，其被 导入或激活可抑制细胞的恶性表现。 发现：1986年，美国加州大学的Geiser等用正常 细胞与肿瘤细胞杂交实验发现并提出抑癌基因 正常细胞与肿瘤细胞杂交 实验 正常 细胞 融合 非肿瘤型杂 交细胞 （正常，但不稳定） 传代 肿瘤细胞 肿瘤 细胞 11号染色体 某片段丢失 导入第11号染 色体丢失片段 细胞转变为正常 抑癌基因的产物是抑制细胞增殖，促进细胞 分化，和抑制细胞迁移，因此起负调控作用， 通常认为抑癌基因的突变是隐性的。 判断抑癌基因的3个标准： 1）正常组织中存在并表达 2）恶性组织中突变而失活 3）该基因的野生型导入该基因缺陷的恶性组织中 能部分或全部抑制其恶性表型 review 常见的抑癌基因 基 因 定 位 相关肿瘤 作 用 跨膜受体类： DCC 18q21 结直肠癌 编码表面糖蛋白（细胞粘附分子） PTCH 9q22.3 HEDGEHOG受体 胞质调节因子或结构蛋白： APC 5p21 结直肠癌 可能编码G蛋白 NF1 7q12.2 神经纤维瘤 GTP酶激活剂 NF2 22q 神经鞘膜瘤、脑膜瘤 连接膜与细胞骨架 转录因子和转录调节因子： P53 17P 多种肿瘤 编码P53蛋白（转录因子） Rb 13q14 视网膜母细胞瘤、骨 编码P105Rb1蛋白（转录因子） 肉瘤、肺癌、乳癌 DPC4 18q21.1 胰腺癌 TGF-调节的MAD相关蛋白 MADR2 18q21 结直肠癌 TGF-调节的MAD相关蛋白 VHL 3P 小细胞肺癌、宫颈瘤 转录调节蛋白 WT1 11P13 肾母细胞瘤 编码锌指蛋白（转录因子） 细胞周期因子： P16 9p21 黑色素瘤 编码P16蛋白，CDK 4, 6抑制剂 P15 9p21 交质母细胞瘤 编码P15蛋白，CDK 4, 6抑制剂 P21 6q21 前列腺癌 编码P21蛋白，CDK 2, 3, 4, 6抑制剂 抑癌基因失活机制： Knudsons两次打击论 1. 二个等位基因中的一个缺失（LOH） 2. 另一个等位基因突变 对癌易感的引起遗传综合症的基因突变 如： RB-1 化学致癌物、病毒等引起体细胞中的基因突 变 3. 基因5端CPG岛胞嘧啶（C-5）高度甲基化， 抑制抑癌基因的转录 抑癌基因失活机制 mutMe mutmutMeMe Me Me Mutation Methylation First hit LOH MethylationLOH Methylation Second hit Second hit Mutation Mutation Methylation Bialielic + + + + LOH methylation LOH methytaoon 抑癌基因在细胞信号传导的通路的多 个层次发挥作用 跨膜受体：PTCH基因 DCC基因 胞浆调节或结构蛋白：NF1 PTEN APC NF2等 转录因子或转录调节因子：p53 WT1 RB1 VHL等 细胞周期因子：p16 p21 p15等 DNA损伤修复蛋白：MSH2 MLH1 PMS2 ATM BRCA1 BRCA2等 二、抑癌基因作用机制 （一）Rb基因“控制细胞周期的重要基因” 视网膜母细胞瘤是由Rb基因失 活所致。 基因结构：200kb，27外显子， 2.7kb mRNA，编码928残基，分 子量为105kDa的蛋白（P105-Rb ） P105-Rb功能：参与调节E2F等 多种转录因子来控制细胞周期， 影响细胞增殖和分化 P105-Rb活性调节：高磷酸化 无活性型和非或低磷酸化活性型 ，由Cyclin-CDK来调节；被多种 病毒蛋白结合抑制(如：SV40大T 抗原，腺病毒E1A蛋白，人乳头 瘤病毒E7蛋白) retinoblastoma Pathogenesis of Retinoblastoma Hit #1 (inherited) Hit #2 Familial Hit #1 Hit #2 Sporadic 不同程度磷酸化后，都可使不同程度磷酸化后，都可使p105p105活性缺乏或完活性缺乏或完 全消失。非磷酸化的全消失。非磷酸化的RbRb可防止细胞增殖，当可防止细胞增殖，当DNADNA 肿瘤病毒抗原结合了非磷酸化的肿瘤病毒抗原结合了非磷酸化的RbRb时，时，RbRb的活性的活性 就受到抑制，使细胞转化为无限增殖状态，形成就受到抑制，使细胞转化为无限增殖状态，形成 肿瘤。肿瘤。 pRb蛋白作 用示意图 myc,myb,c dc2 DNA聚 合酶 胸 苷激酶 , 二 氢叶酸还原 酶, pRb CYCA CDK2 原发肿瘤：视网膜母细胞瘤（两个等位基因 的缺失或失活） 相关肿瘤：骨肉瘤、小细胞肺癌、乳腺癌、 膀胱癌 Cyclin A cdk2 Cyclin D cdk4 Cyclin E cdk2 E2F P P P P P P P P P P E2F Rb Rb + Ser780 Ser796 Thr373 Ser249/252Ser870/811 G1 S Restriction Point DNA Synthesis RB1-0 结合 SV40T E1A HPV7 靶蛋白中包括一组E2F转录因子，它们所激活转录的靶 基因其产物是S期所必须的。和RB结合后E2F的激活转录能力 受到抑制，表明RB可以阻遏那些依赖E2F的基因表达。通过这 种途径RB可直接阻止细胞进入S期。RB-E2F的复合体也可直 接阻遏某些靶基因。E2F从RB上解离以后这些基因才能表达。 RB pathway and function RB-E2F 1、p53基因的发现 曾错误把P53基因定为癌基因 因当初 从肿瘤细胞分离得到的P53基因如同myc基因一样， 能和ras基因协同转化胚胎成纤维细胞，又依据癌基 因为细胞显性表型的原则而被定癌基因，后发现实为 其突变型。 1989年，才确认为“抑癌基因”。p53基因与 人类50%的肿瘤有关。P53基因突变型在血液系统肿 瘤、膀胱癌、肝癌、肺癌、结肠癌以及口腔癌等的细 胞中发现。 （二） p53基因“基因组卫士” 2、p53的结构 基因：20kb，11外显子，mRNA：2.5kb ，编码393氨基酸残基，分子量为53kDa的多肽 链。 p53蛋白中央核心 区结合特定的 DNA序列，N未端 序列有转录活化 的功能， C未端 可使p53蛋白自身 形成二聚体或四 聚体。 3、p53的功能 p53是细胞内重要的转录因子，调节p21、 GADD45、BAX等基因的转录表达来实现其功 能。当射线或其它因素引起DNA损伤时，p53蛋 白就被激活，执行如下功能： v调节细胞周期、促进DNA损伤修复：如果细 胞处于G1期，p53蛋白通过p21蛋白抑制cdk活 性，封闭细胞周期关卡,使细胞生长停止，并激 活GADD45，加速DNA修复。 v诱导细胞凋亡：如果细胞已经处于S期，p53 蛋白促进相关细胞凋亡蛋白基因（bax等）表达 ，启动细胞凋亡。 P53 蛋 白作用 示意图 GADD45 P21 CDK2,4,6 BAX等 生长停止 DNA修复细胞凋亡 p53 & Mdm2 P53可使p21的表达上调，而p21又是p53下游的转录激活产物，其上游调 节区含有p53的结合位点，可抑制细胞周期素（cyclin D）/细胞周期素依 赖性激酶（CDK）的底物磷酸化，导致G1期阻滞，使细胞在进入S期之 前有充足的时间进行损伤DNA的修复。Cyclin D-CDK4复合体正常情况 下可促进Rb蛋白磷酸化，低磷酸化或非磷酸化的Rb与E2F（通过G1限制 点必需的转录因子）结合。Rb磷酸化可导致E2F的游离和释放，并使E2F 转位至核，诱发多种基因的蛋白转录，进而促使细胞进入S期. 4、p53的功能特点 v在复制和转录水平上抑制细胞增殖 vP53可被一些癌基因产物结合而失活(如： SV40大T抗原，腺病毒E1B蛋白，HPV E6蛋白) vP53突变具有显性失活的效应。 5 、 P53突变与肿瘤 P53基因与人类50% 的肿瘤有关，人类肿瘤 中P53突变主要在高度 保守区内，以175、248 、249、273、282位点突 变最高，不同种类肿瘤 不同 The p53 family p53 family members pathways (三） 细胞周期因子 Cell cycle Cell cycle stagestage cyclincyclin-CDK complexes-CDK complexesinhibiforsinhibifors p15p15p16p16p18p18p21p21p27p27 G1G1cyclinD-CDK4/CDK6cyclinD-CDK4/CDK6 G1 / SG1 / ScyclinE-CDK2cyclinE-CDK2 S S cyclinA-CDK2cyclinA-CDK2 G2 / MG2 / McyclinB-CDK2cyclinB-CDK2 p21(cip1/wAF1),p27(Kip1)和p15/p16（ink4）合 称为Cki蛋白，它们结合在cdk-cyclin二聚体上， 使其失活。如在静止期通过这种途径阻止RB的磷酸 化，使细胞周期不能进入S期。 主要几种Cyclin-CDK细胞周期复合物 P16基因 P16基因又叫MTS(multiple tumor suppressor )基因 ，是 一种细胞周期中的基本基因，直接参予细胞周期的调控 ，负调节细胞增殖及分裂 一、P16基因结构及表达 P16基因定位于人染色体9p21， 8.5Kb由2个内含子 及3外显子组成，第1外显子由126bp组成，第2外显子由 307bp组成，第3外显子bp组成.P16基因是细胞周期中的 一种基本基因 二、P16基因的表达产物及功能 P16基因编码产物是P16蛋白，定位于细胞核内，为细 胞周期素依赖激酶CDK4及CDK6抑制物，通过结合 CDK4或CDK6而抑制Cyclin D-CDK4/CDK6复合物，阻 止细胞分裂、增生，突变型p16蛋白无此抑制活性，细胞 分裂失控，导致癌变。 三、P16基因与 肿瘤 P16基因已在多种 肿瘤中发现缺失，突 变 Kamb等已经从肺 癌、乳腺癌、皮肤癌 、膀胱癌、肾癌、卵 巢癌、淋巴瘤等中检 测出50%以上P16纯 合子缺失，在黑色素 瘤中还检出无义错义 ，移码突变. 表明 P16参予各种组织的 肿瘤形成.因此检测 P16基因的突变与缺 失，是判断肿瘤性质 及预后的一项重要指 标. （四）DNA损伤修复蛋白 BRCA1：基因全长100kb含23个外显子，22个内含子，1个单 一长开放阅读框架，编码1863个氨基酸，220KD核内磷酸化蛋白，有 锌指区，提示可调节基因表达。 肿 瘤： 家族性乳腺癌和卵巢癌 功 能： DNA结合区：转录调控 与Rad51相互作用，修复双链DNA断裂 BRCA2：13q21编码3418个氨基酸 肿 瘤： 男女性乳腺癌，胰腺癌等 功 能： 有DNA结合区：转录调控 与Rad51相互作用，修复双链DNA断裂 Rad51：酵母中发现修复双链DNA断袭 人细胞中有类似物 BRCA1 and BRCA2 BRCA1 functions Transcription factor: involved in the regulation of oestrogen receptor activity and related to the control of oestrogeninduced proliferation of breast tissue. DNA repair: homologous recombination and repair of transcription-coupled oxidation- induced DNA damage. Cell-cycle checkpoint control: interacts with RB, ESF1 and p53. Chromatin remodelling. BRCA1 domains The RING-finger domain is a proteinprotein-interaction domain, and binds BRCA1- associated RING domain 1 (BARD1). The carboxy-terminal BRCT domain is necessary for BRCA1s function in DNA repair and transcriptional activation. The highlighted mutations (denoted by *)are the two common founder mutations found in Ashkenazi Jews. BRCA1 and BRCA2 BRCA2 functions DNA repair: homologous recombination. Cell-cycle checkpoint control: interacts with p53. Chromatin remodelling. BRCA2 domains Exon 11 contains both the ovarian cancer cluster region (OCCR) and eight BRC repeats,which are required for binding to RAD51.Mutations in this region are associated with a greater risk of ovarian cancer and a lower risk of breast cancer than are mutations outside this region. The highlighted mutations (denoted by *) are the common founder mutations found in Ashkenazi Jews and in Iceland. Factors that modify risk of breast or ovarian cancer NCOA3. Nuclear receptor coactivator 3 ( also known as amplified in breast cancer 1, AIB1) RAD51 is involved in the repair of doublestrand DNA breaks, and interacts with both BRCA1 and BRCA2. TAMOXIFEN. One of a group of antioestrogenic drugs.Acts by blocking oestrogen signalling by binding to the oestrogen receptor. HRAS. A non-coding polymorphism of the VNTR (variable number of tandem repeats) type is situated one kilobase downstream of the HRAS proto-oncogene on chromosome 11. PTEN/MMAC1/TEP1 PTEN ( phosphate and tension homology deleted on chromosome 10, PTEN) 又称为MMACI(mutated in multiple advanted cancer1) 和TEPI(TGF-regulated and epithelial cell-enriched phosphatase) PTEN：10q23.3 9个外显子 编码403个氨基酸 兼有磷酸酪氨酸磷酸酶(PTP)和双重特异性磷酸酶 (DSP)结构模体,以其DSP活性调节胞浆信号分子的磷酸化水 平,拮抗酪氨酸激酶、磷酸化酶活性而抑制肿瘤发生、发展 。 使Ip3的第3位磷酸、去磷酸化抑制胰岛素诱导的磷酸肌醇3激酶 活性，Ip3是胰岛素调节细胞生长信号通路中的重要的第二信使。 PI 3.4.5 P3 PI - 4.5 P2 PTEN PTEN与细胞骨架蛋白中的张力蛋白(tensin)和辅助蛋白 (auxilin)具有同源性。对细胞迁移、铺展、聚焦粘附活动的抑 制作用 等位基因缺失： 纯合性丢失：胶质母细胞瘤，前列腺癌等有15% 。 基因突变：缺失突变，错义突变，无义突变，mRNA剪接突变， 突变一般在等位基因杂合性缺失基础上发生。 胶质母细胞瘤、子宫膜癌：突变率可达30-40%。 前列腺细胞株：突变75100% 甲基化：前列腺癌，晚期明显。 考登综合征 (cwden病,CD），BZS(Bannayan-Zonana或Bannayan-Ruvalcabu) 80%存在LOH和基因突变。 转移抑制基因 (Metastasis Suppressor gene) 肿瘤的转移与转移基 因激活或转移抑制基因 失活有关，是多种转移 相关基因及转移抑制相 关基因综合作用结果. Soble认为凡是能抑 制肿瘤转移形成的基因 均可命名为转移抑制基 因。 肿瘤转移抑制基因主 要是抑制肿瘤细胞的转 移表型 nm23基因 一、nm23基因及表达产物 人基因组中存在两个nm23基因，即nm23-H1，和nm23-H2，定 位于17q.3、21、3，受两个独立的调控系统所调节。编码152 个氨基酸组成的17KD蛋白，其中nm23-H1和nm23-H2的氨基 酸序列同源性达88% nm23是myc的一个重要调节基因.细胞死亡时，nm23 可以诱导myc的表达，nm23-H1丧失有助于细胞永久生存. nm23蛋白是个转录因子。nm23蛋白改变.可使微管聚合 异常而引起减数分裂时纺缍体的异常，导致癌细胞染色体 非整倍体的形成，促进肿瘤的发展，还可能通过影响细胞 骨架而引起细胞运动，参与浸润转移过程和发育过程. 二、nm23功能 nm23已在胃癌、骨肉瘤、膀胱癌、乳腺癌、肠癌等具有 转移潜能的肿瘤细胞中呈低表达，在大肠癌中nm23在低 表达与肿瘤状态和远距离转移紧密相关 nm23编码的产物具有抑制肿瘤转移功能，nm23在分化 良好的肿瘤中呈高水平表达，且nm23基因表达与淋巴结 转移呈负相关，与无病生存期，整个生存期呈正相关， 因此检测nm23基因的表达高低，可作为判断肿瘤有无转 移的一个重要指标. 三、nm23基因与肿瘤转移 癌基因与抑癌基因的特性比较 特 征癌 基 因抑 癌 基 因 突变变等位基因的功能获获得功能，以显显性 方式起作用 丧丧失功能，以隐隐性方式 起作用 致癌所需突变变等位基因数 12 可通过过生殖细细胞遗传遗传现现尚无例子常有遗传遗传 的形式 体细细胞突变变的致癌作 用 有有 突变变有组织组织 的特异性有一些，但能在许许 多组织组织 中 遗传遗传 型常显显示组织优组织优 先选选 择择性起作用 癌基因与抑癌基因的相互作用 癌基因与抑癌基因这两类似乎是作用矛盾的基因之 间的精细平衡控制着细胞的生长，它们在癌生成中的相互作 用 DNA肿瘤病毒的癌基因蛋白质灭活Rb和p53抑癌基因蛋白质 mdm2及p53自家调节反馈途径 c-myc 和Rb的复合作用 Waf/cip1抑癌基因调节Cdks NF1抑癌基因与ras癌基因的本互作用 MicroRNAs as oncogenes and tumor suppressors 微小RNA(microRNA ，miRNA)是生物体内 源长度约为2023个核 苷酸的非编码小RNA， 通过与靶mRNA的互补 配对而在转录后水平上 对基因的表达进行负调 控，导致mRNA的降解 或翻译抑制。 miRNA biogenesis and silencing mechanisms. miRNAs are initially transcribed as long primary miRNAs (pri-miRNAs) and cleaved at hairpin- stems by the Drosha/DGCR8 microprocessor complex, resulting in pre-miRNAs in the nucleus. After nuclear export, pre-miRNAs are cleaved into miRNA duplexes by Dicer/TRBP, and the guide strand of the duplexes is incorporated into RISC. These two steps may be coupled, because Dicer/TRBP is associated with Ago2, a key component of RISC. miRNAs are thought to regulate about 30% of the genes in the human genome by multiple mechanisms, and their targets include both oncogenes and tumor suppressor genes. miRNAs suppress translation at the initiation and elongation steps, and may also induce deadenylation, decapping and degradation of target mRNAs within P- bodies (GW-bodies). 三、肿瘤发生是多因素、多基因和 多阶段相互协调作用的癌变过程 多种遗传缺陷：点突变、易位、基因 重排、移码突变、缺失突变和插入突变 等 癌基因产物之间协同：核内癌基因产 物与胞浆癌基因产物发生协调作用，如 Myc与Ras。 癌