细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色与观察

请同学们按学号坐好 ,先不要开电脑显微镜李李 姣姣 （吴明松）（吴明松）细胞生物学与遗传学教研室细胞生物学与遗传学教研室2014.11 2014.12TEL： 8609692E-mail: 270378076qq.aom1号综合楼号综合楼 2-25室室1. 预习；2. 穿白大衣并扣好；3. 认真操作；4. 爱护仪器；5. 保持卫生；6. 保持安静。 实验室规则1 #。2 #。3 #。4 #。5 #。6 #7 #实验课要求实验课要求实验室安全注意事项实验室安全注意事项1. 实验完成后检查水电；2. 实验动物回收焚烧：填表责任制；3. 了解化学试剂毒性和安全使用规则；4. 突发情况处理及逃生，如各种原因起 火分别用关电闸、盖布、打开门窗、报警，及其他突发情况，依次离开实验室及大楼等。本学期实验教学进度安排本学期实验教学进度安排第一次(验证性 ) 细胞生物学研究技术和方法线粒体的活体观察 第二次(验证性 ) 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示细胞内 DNA和 RNA的原位显示 第三次(验证性 ) 细胞膜的通透性观察小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察第四次(验证性 ) 细胞内过氧化物酶的原位显示细胞有丝分裂的观察第五次(设计性 ) 设计性实验报告汇报及指导第六次(设计性 ) 动物细胞融合细胞核的分离与鉴定第一次实验 细胞生物学的研究技术和方法 线粒体活体染色与观察I 细胞生物学的研究技术和方法细胞形态结构研究技术 显微观察亚显微观察细胞的培养技术细胞组分的分离纯化技术细胞和亚细胞组分的测定分级分离技术层析法电泳法细胞化学法荧光细胞化学法放射自显影技术显微结构 microscopic structure在光学显微镜下所观察到的细胞结构亚微结构 submicroscopic structure细胞内小于 0.2m的细微构造，通常使用各种电子显微镜进行观察细胞形态结构研究技术分辨力（率） resolution显微镜或人眼在 25cm的明视距离处能够区分相近两点最小距离 的能力。普通光学显微镜 light microscope， LM染色后可观察线粒体、中心体、细胞核等结构最大分辨力一般为 0.2m相差显微镜 phase contrast microscope观察活细胞的微细结构和变化暗视野显微镜 dark field microscope 反差大、分辨力高（ 0. 04 m)观察活细胞内细胞器以及液体介质中的细菌和真菌等的存在和运动荧光显微镜 fluorescence microscope 光源 紫外线细胞荧光化学，特别是免疫荧光技术中的重要工具，可观察细胞或标本中的荧光现象分辨力达 0.08nm观察细胞 内部 结构 二维平面图像透射电子显微镜 TEM 扫描电子显微镜 SEM 分辨力一般在 3nm观察细胞（样本） 表面 形貌三维立体图像细胞的培养技术细胞培养 cell culture细胞在体外的培养技术 ，即在无菌条件下，从机体中取出组织或细胞，模拟机体内正常生理状态下生存的基本条件，让它在培养器皿中继续生存、生长和繁殖的方法。原代培养 primary culture直接从机体获取的组织或细胞进行的首次培养。原代细胞以一定比例转移到另一个或几个容器中的扩大培养。传代培养 secondary culture一般传一次称为一代细胞融合 cell fusion又称为细胞杂交，指细胞彼此接触时，两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的现象。含有 同一亲本 细胞核的融合细胞含有 不同亲本 细胞核的融合细胞同核体homokaryon异核体heterokaryon细胞融合技术自然融合人工诱导融合细胞融合技术是研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤等的重要手段，尤其对单克隆抗体及细胞去分化的研究开拓了一条新的途径物理化学生物细胞组分的分离纯化技术细胞组分的分级分离 cell fractionation根据细胞内各种结构的比重和大小等不同，在同一离心场内的沉降速度也不同的原理，用不同介质或不同转速的 离心 ，将细胞内各组分分级分离出来，并进行分析的方法。基本步骤组织匀浆分级分离分析密度梯度离心差速离心用细胞化学法或生物化学的方法分析、鉴定得到的细胞组分差速离心密度梯度离心细胞和亚细胞组分的测定细胞化学法 cytochemical method在 保持细胞结构 的基础上，利用某些化学物质可与细胞内某种成分发生化学反应，在 局部范围 形成 有色沉淀物 （或 电子密度高的物质 ）的原理，对细胞的化学成分进行定性、定位和定量的研究。碱性蛋白显示酸性蛋白显示I 细胞生物学的研究技术和方法细胞形态结构研究技术 显微观察亚显微观察细胞的培养技术细胞组分的分离纯化技术细胞和亚细胞组分的测定分级分离技术层析法电泳法细胞化学法荧光细胞化学法放射自显影技术II 线粒体活体染色与观察线粒体活体染色与观察1. 了解线粒体的原位分布；了解线粒体的原位分布；2. 了解活体染色的原理和方法。了解活体染色的原理和方法。一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理线粒体上的细胞色素氧化酶系可保持詹纳斯绿 B染料始终处于氧化状态而呈绿色。活体染色：活体染色：应用无毒或毒性较小的染色剂显示活细胞内应用无毒或毒性较小的染色剂显示活细胞内某些天然结构，是对细胞生命活动影响较小的某些天然结构，是对细胞生命活动影响较小的一种染色方法。一种染色方法。20min实验步骤实验步骤（点击图片查看详细介绍）（点击图片查看详细介绍）2008级临床 K4班学生实验结果1. 取材部位及力度；取材部位及力度；2. 盖片的技巧；盖片的技巧；3. 染液干后的处理。染液干后的处理。四、注意事项四、注意事项