病原性球菌及检验 ppt课件

病原性球菌及检验,1,1. 简述病原性球菌的概念及种类。 2. 熟悉常见病原性球菌的主要生物学特性、 临床意义。 3. 说出葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的检验程序和检验方法。,学习目的与要求,2,对人有致病性的球菌主要引起化脓性炎症,又称化脓性球菌。主要包括有 1、G+球菌：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌。 2、G-球菌：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布兰汉菌等。,3,第一节 葡萄球菌属(Staphylococcus),4,（一）形态与染色 G+， 球形，无鞭毛、无芽孢，呈葡萄串状排列。,一、生 物 学 特 性,5,（二）培养特性 营养：要求不高，耐盐。 液体：均匀浑浊生长 普通琼脂平板： 血液琼脂平板：,高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌为淡橙黄色菌落； 其他葡萄球菌为白色菌落。,6,（三）生化反应 活泼分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。(如：葡萄糖，麦芽糖，蔗糖，甘露醇） 触酶（）（区别于链球菌属）,7,（四）抗原构造 、蛋白抗原（） 、多糖抗原 金黄色葡萄球菌：核糖醇磷壁酸 （检测磷壁酸有助于金葡菌感染诊断） 凝固酶（）：甘油磷壁酸,8,（五）分类:个种及亚种 、按色素分类：金、白、柠 、按凝固酶分类： 凝固酶阴性、凝固酶阳性葡萄球菌 、按噬菌体分类：金葡菌分为5群26型 4. 据色素、生化反应分： 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌,9,三种葡萄球菌的主要性状,10,（六）抵抗力 无芽胞菌中最强，耐干燥，对石炭酸、升汞、龙胆紫敏感。 易产生耐药性变异，如：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。MRSA常呈多重耐药，对青霉素、氧氟沙星及红霉素的敏感率分别为1.3%、3%及14%。,11,长期住院、反复使用各种广谱抗菌药物、烧伤或有伤口的病人及与MRSA定植或感染的病人接触都是造成院内MRSA流行的危险因素。MRSA定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源。 MRSA定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源。,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）,12,二、致病性和免疫性,(一)致病物质 金黄色葡萄球菌产生多种侵袭性酶与外毒素。 1血浆凝固酶（coagulase)： 分：结合型凝固酶、游离型凝固酶。 鉴别金黄色葡萄球菌的重要指标。,2葡萄球菌溶血素（staphylolysin）,13,3杀白细胞素（leukocidin） 4肠毒素（enterotoxin）： （A、B、C1、C2、C3、D、E、G、H 9个血清型） 5表皮剥脱毒素（exfoliative toxin） 6. 毒性休克综合征毒素1（toxic shock syndrome toxin 1, TSST1）,14,（二）所致疾病 1侵袭性疾病： （1）皮肤软组织感染特点：病灶局限且脓汁粘稠,（2）内脏器官感染,（3）全身感染,（4）尿路感染,15,2毒素性疾病 （1）食物中毒,（2）烫伤样皮肤综合征 由表皮剥脱毒素引起。,（3）毒性休克综合征 由TSST1引起,（4）假膜性肠炎,16,人类凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）感染中以表皮葡萄球菌的感染最为常见。 CNS主要引起以下几种感染：泌尿系感染，细菌性心内膜炎，败血症等，其中大多为医院内感染。此外，心脏起搏器安装、置换人工心脏瓣膜、长期腹膜透析、静脉滴注等亦可造成凝固酶阴性葡萄球菌的感染。,3、凝固酶阴性葡萄球菌的致病性,17,三、微 生 物 学 检 验,（一）标本采集 （二）检验程序 （三）检验方法,18,三、微 生 物 学 检 验,（一）标本采集 根据病情采集标本 种类：脓液、伤口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。 注意：无菌操作，避免污染。,19,（二）葡萄球菌检验程序,脓液、咽拭子、穿刺液 尿液、痰液,脑脊液血液,粪便、呕吐物,直接涂片染色,增菌培养,分离培养 （血平板）,分离培养 （高盐甘露醇平板）,取可疑菌落,鉴定试验药敏试验,涂片染色 血浆凝固酶 耐热核酸酶 其他鉴定试验,报告,初 报,20,（三）检验方法,1、直接涂片 适用于：正常情况下无菌的标本（如脑脊液） 伴有炎症细胞的其他体液标本、脓液等,初步报告： “查见革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌” 或：“查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌”,21,2、分离培养 50ml葡萄糖肉汤（增菌）,浑浊,无菌（7天）,报告： 无菌生长,脑脊液、脓液、 穿刺液、咽拭、尿液,血平板,血液标本5ml,粪便、 呕吐物,高盐甘露醇平板,22,（三）检验方法,3、鉴定试验 （1）血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌（+） （2）甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌（+） （3）耐热核酸酶试验：金黄色葡萄球菌（+） （）肠毒素测定： 金黄色葡萄球菌产生 （5）SPA检测： 金黄色葡萄球菌 （6）凝固酶阳性和凝固酶阴性的葡萄球菌鉴定 （7）API葡萄球菌鉴定试剂盒,23,（四）结果评价和报告,1、金黄色葡萄球菌：无论任何标本中分离到均 应鉴定并报告临床。 2、表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌：从输液导管、人工植入组织中分离到，应视为致病菌。 3、尿培养计数：103-104为阳性菌尿标准。 4、其他凝固酶阴性葡萄球菌：引起感染流行或治疗失败时，应鉴定到种。 5、金黄色葡萄球菌（MRSA)：头孢菌素类抗生素体外药敏试验为敏感时，不应报告，因体内试验已证实MRSA对该类抗生素耐药。,24,第二节 链球菌属(Streptococcus),25,一、 链 球 菌,26,一、生 物 学 特 性,（一）形态与染色 G+，球形或椭圆形，呈链状排列，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。,27,一、生 物 学 特 性,（二）培养特性 条件：营养要求较高，多数为兼性厌氧菌，少 数专性厌氧。 液体：沉淀生长（絮状或颗粒状）。 普通琼脂平板：不生长。 血液琼脂平板：,28,（三）生化反应 活泼分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。 菊糖（-） 胆汁溶菌试验（-） optochin敏感试验（-） 触酶（-）（区别于葡萄球菌属）,（区别甲链与肺链）,29,（四）抗原构造 、多糖抗原（C抗原）： 群特异性。 、蛋白抗原（M、T、R、S） 型特异性，与致病有关的是M蛋白抗原。 3、核蛋白抗原：无特异性。,30,多糖抗原,蛋白质抗原,核蛋白抗原,链球菌抗原构造模式图,荚膜,31,（五）分类 40个种及亚种 、按溶血情况分类： （1）甲型溶血性链球菌：菌落周围有12mm宽的草绿溶血环，称甲型溶血或溶血。为条件致病菌。 （2）乙型溶血性链球菌：菌落周围形成一个24mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或溶血。又称溶血性链球菌。致病力强，引起多种疾病。 （3）丙型链球菌：无溶血环，不致病,32,、按抗原结构分类： 按C抗原分群：ABCD20群，对人致病的以A群为主。 按M蛋白分型：如A群：100个型，B群：4型，C群：13个型。,（五）分类,33,（六）抵抗力 不强，6030min杀死，对多种消毒剂敏感。 乙链：对青霉素、四环素、红霉素等敏感。,34,二、致病性和免疫性,（一）致病物质 1、链球菌溶血素 （1）链球菌溶血素O (SLO) SLO抗体 抗链球菌溶血素O试验：协助诊断风湿热（1:400) （2）链球菌溶血素S (SLS)：无抗原性。,2、致热外毒素（猩红热毒素/红疹毒素） 3、M蛋白,35,4、透明质酸酶 5、链激酶 6、链道酶,36,（二）所致疾病 主要由A群链球菌引起。 1、化脓性感染：由皮肤伤口侵入，经呼吸道侵入，其他 途径（如产褥热、蜂窝组织炎） 特点：病灶界限不清,脓汁稀薄,2中毒性疾病：猩红热 由产生致热外毒素的A族链球菌所致的急性呼吸道传染病。,37,3变态反应性疾病： 风湿热 急性肾小球肾炎,二、致病性和免疫性,4其他疾病： 甲型（草绿色）链球菌：引起亚急性细菌性心内膜炎。,38,三、微生物学检验,（一）标本采集 （二）检验程序 （三）检验方法,39,（一）标本采集 根据病情采集标本 种类：脓液、鼻咽拭子、血液等 风湿热查血清抗体,40,（二）链球菌的检验程序,痰、脓、穿刺液咽拭子等,脑脊液,血 液,直接涂片染色,测抗原,分离培养,增菌培养 (5%CO2葡萄糖肉汤),血平板（5%CO2）,可疑菌落,鉴定试验,初步报告,血清学鉴定 （分群）,杆菌肽试验 optochin 胆汁溶菌试验 其他鉴定 敏感试验 试验,41,（三）链球菌的检验方法,（1）直接镜检： （痰、脓、穿刺液、 咽拭子等） 初报：发现G+球菌， 呈链状排列,42,（2）分离培养： 血液、脑脊液 肉汤增菌 脓液、咽拭子等 血平板分离,43,（3）鉴定链球菌的主要试验： 根据形态、菌落、溶血情况进行： 杆菌肽敏感试验：A群敏感(d10mm) Optochin敏感试验：肺炎链球菌d18mm， d400为+,45,二、肺炎链球菌(S.pneumoniae),属链球菌科，链球菌属。 广泛分布于自然界，主要寄生于人类上呼吸道，多数不致病。,46,一、生 物 学 特 性,（一）形态与染色 G+， 矛头状，成双（或短链）排列，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。,47,（二）培养特性 条件：营养要求较高，兼性厌氧菌， 5-10% C02生长最好。 产生自溶酶。 液体：培养24h呈均匀混浊，后期因产生自溶而变得澄清。 普通琼脂平板：不生长。 血液琼脂平板：灰白色，圆形，扁平，较小，周围有草绿色溶血环（溶血）,48,（三）生化反应 活泼分解多种糖类。 菊糖（多数 + ） 胆汁溶菌试验（+） Optochin试验(+),区别甲链与肺链,49,（四）抗原构造 、荚膜多糖抗原： 据此将肺炎链球菌分85型，对人致病的有20多型。 -型引起大叶性肺炎。 、菌体多糖抗原： 可与CRP反应，产生沉淀。 3、M蛋白抗原： 型特异性。,50,（五）抵抗力 较弱，加热56 ，20min即死亡。 对一般消毒剂敏感，对干燥抵抗力较强。,荚膜变异：有荚膜的光滑（S）型菌有毒力，失去荚膜的粗糙（R）型毒力减低或消失。,（六）变异性,51,二、致病性和免疫性,（一）致病物质 1、荚膜： 肺炎球菌的致病力，主要是荚膜的抗吞噬作用。 2、蛋白粘附素、脂磷壁酸、肺炎链球菌溶素O等 溶血毒素“O”：自溶后释放，能溶解人和动物的红细胞，高浓度对动物有坏死及致死作用。,52,（二）所致疾病 存在于正常人上呼吸道，为条件致病菌，仅在人体抵抗力下降时才引起疾病。 可引起：大叶性肺炎，胸膜炎，脓胸，慢性支气管炎，中耳炎，脑膜炎，败血症等。,53,三、微生物学检验,（一）标本采集 痰液，脓液，血液，脑脊液等。 （二）检验程序 （三）检验方法,54,检验程序,痰、脓,脑脊液,血液,直接涂片 分离培养,革兰染色、美兰染色 荚膜肿胀试验,增菌培养（葡萄糖肉汤、硫酸镁肉汤）,（血平板）,挑选可疑菌落,纯培养,初报,兔血清肉汤,小白鼠毒力试验,涂片 荚膜肿胀试验,胆汁溶菌试验 菊糖发酵 Optochin试验,药敏试验,报 告,55,检验方法,1、直接镜检 适用于：痰、脓、脑脊液标本。 报告：“找到肺炎链球菌” 2、分离培养 硫酸镁肉汤：均匀混浊生长，有绿色荧光。 血平板：灰白色，圆形，扁平，较小，周围有草绿色溶血环（溶血）,56,3、鉴定试验 （1）荚膜肿胀试验 （2）胆汁溶菌试验：+ （3）Optochin试验：+ （4）菊糖发酵试验：+ （5）小鼠毒力试验： 有毒力的菌株，接种后12-36h，死亡。,57,胆汁溶菌试验阳性：,加入胆汁或10%去氧胆酸钠，37，5-10min，激活本菌的自溶酶，出现溶菌现象。,58,Optochin敏感试验阳性： 取肉汤培养液均匀涂于血平板上用optochin纸片贴于接种区中央（或分区划线法，纸片贴于1-2区），35需氧培养过夜，抑菌圈 18mm。,59,Optochin test,60,肺炎链球菌的主要鉴定依据,1、镜下形态：革兰阳性球菌，矛头状成双排列，平端相对，尖端向外； 2、血平板菌落特点：直径0.5-1.5mm，灰白色，半透明，光滑（有些菌株为粘液状），扁平，周围有草绿色溶血环。 培养或放置24h以上，菌落中央可塌陷，呈脐窝状。 3、生化鉴定： Optochin试验+，胆汁溶菌试验+。,61,肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的鉴别,形态 菌落 血清 胆汁 菊糖 Opto- 小鼠 肉汤 溶菌 chin 毒力试验,肺链 甲链,矛头状， 稍大，湿润 浑浊 + + + + 成双， 扁平， 有荚膜 脐窝状,圆形， 较小，稍干， 沉淀 无荚膜 圆，凸起,62,（四）结果评价和报告,乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌为毒力强的致病菌，无论从任何临床标本中分离出均应报告临床。 及时鉴定和报告咽部标本中分离出的化脓性链球菌，有利于早期治疗，以减少并发症（如风湿热，肾小球肾炎）的产生。 草绿色链球菌在重症感染时，应鉴定到种。,63,第三节 肠球菌属,是肠道中的正常菌群 导致医院内感染：如尿路感染、腹部和 盆腔感染、败血症、脑膜炎。,64,一、生物学特性,（一）形态染色 G+球菌，单个、成双或短链状排列。无荚膜、芽胞，部分菌株有鞭毛。,65,营养要求较高。能在高盐（6.5%NaCl）、高碱（PH9.6）、高胆汁（40%）、1045生长。 菌落：圆形、中等大小、灰白色、不透明、S型，有或溶血。,（二）培养特性,66,能分解多种糖类 触酶（-） PYR（吡咯烷酮-萘基酰胺）试验（+）,（三）生化反应,67,目前分18种。引起医院内感染常见的是粪肠球菌和屎肠球菌。 常用的分型方法：rRNA基因探针分型法。,（四）分型,（五）抵抗力 对理化因素抵抗力弱。 但对大多数抗生素天然耐药。,68,二、微生物学检验,（一）标本采集 尿液、血液、脑脊液、脓汁分泌物等。,69,（二）检验程序,尿液、脓汁、穿刺液,血 液,涂片染色 分离培养（血平板、5%CO2）,初 报,挑选可疑菌落,增菌培养（葡萄糖肉汤、5%CO2）,PYR试验,胆汁七叶苷试验,6.5%NaCl生长试验,血清学试验,其他鉴定试验,报 告,70,（三）检验方法,1、直接镜检 适用于：痰、脓、脑脊液、穿刺液标本。 2、分离培养 血平板：灰白色，圆形，中等大小，不透明，S型菌落，周围有溶血或溶血。 选择培养基：叠氮胆汁七叶苷琼脂平板。,71,3、鉴定试验 （1）菌属鉴定试验： PYR试验：肠球菌、A群链球菌、某些凝固酶阴性葡萄球菌为（+） 胆汁七叶苷试验：+ 盐耐受试验：+ （4）种间鉴定试验：P175表17-3,72,第四节 奈瑟菌属(Neisseria),特点：为一群G-双球菌，无鞭毛，无芽胞，有菌毛，需氧，氧化酶及触酶 +。 种类：共九种，主要致病菌是 脑膜炎奈瑟菌(merningococcus) 淋病奈瑟菌(gonorrhoeae),73,一、脑膜炎奈瑟菌 (N.meningitidis),即脑膜炎球菌， 是流行性脑脊髓膜炎的病原体,74,（一）生物学性状,1形态结构 2培养特性 3生化反应 4. 抗原结构 5. 抵抗力特点,75,（一）形态结构,G-，肾形成双排列 在患者脑脊液标本中位于中性粒细胞内 无芽胞、无鞭毛，具有荚膜、菌毛。,76,2培养特性,营养要求高，必须在含有血清或多种氨基酸、无机盐的培养基上生长良好。 血平板：半透明，灰褐色，圆形，湿润光滑露滴样菌落。 易自溶。,77,巧克力平板：圆形，扁平，蓝灰色，半透明，光滑湿润的菌落。 卵黄双抗（EPV）平板：较大，无色，光滑湿润，扁平，边缘整齐的菌落。 血清肉汤：呈微混浊。,78,3.生化反应,分解葡萄糖、麦芽糖：+ 硝酸盐还原试验阴性，不分解尿素 氧化酶试验阳性,79,4.抗原结构,可分9个血清群，对人致病的主要是A群,5抵抗力特点,对寒冷、光、热力，干燥等十分敏感。室温3h，60 5min死亡。 采集标本：注意保温迅速送检。 对磺胺类、青霉素、链霉素均敏感。,80,（二）致病性与免疫性,1致病物质：菌毛、荚膜、内毒素 2所致疾病：传染源、传播途径 寄生在正常人鼻咽部，存在易患人群，与患者补体介导的杀菌活性缺陷有关。约2%-3%的人表现为流脑症状。,3. 免疫性 病原可产生群特异性抗体，但不持久。,81,(三) 微生物学检验,1标本采集 菌血症期病人采集血液 有出血点或瘀斑者，可取瘀斑渗出液 有脑膜刺激症状，抽取脑脊液 带菌者：咽拭子,82,注意事项： 立即送检 注意保温（勿放冰箱） 防干燥 防紫外线,83,、脑膜炎球菌的检验程序,血 液,增菌培养（葡糖肉汤）,分离培养 （巧克力、血平板）,鉴定试验,涂染检 氧化酶 葡、麦糖 多价血清 药敏试验,结果报告,鼻咽拭子,卵黄双抗平板,510%co2,37 1824h,37 1824h,37 1824h,脑脊液 瘀血点,离心,上沉 清淀 液物,510%2,涂片 染色,初步 报告,直接凝集,84,脑膜炎球菌的鉴定依据,菌落特征符合 形态染色符合 分解葡、麦糖产酸 氧化酶、触酶阳性 血清凝集试验阳性,85,二、淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）,即淋球菌 为淋病的病原体，人是唯一天然宿主和传染源,86,（一）生物学性状,1形态结构 2培养特性 3. 生化反应 4抵抗力特点,87,1形态结构,G-，球形或肾形，成对排列 有荚膜，无芽胞和鞭毛,88,2培养特性,营养要求高，30-37 生长，须在含有血液或血清的培养基上培养，常用血液、巧克力等培养基 初次分离，须5-10%CO2才能生长发育 菌落：凸起，光滑、圆形，灰褐色，半透明,89,3.生化反应,氧化酶试验：（+） 触酶： （+） 葡萄糖（+） ，麦芽糖（-） 易自溶,90,4抵抗力特点,抵抗力弱， 在干燥环境中仅能存活1-2h，湿热55 5min,100 立即死亡。室温下存活1-2d。 对消毒剂极敏感,91,、致病物质：菌毛、外膜蛋白、等 、所致疾病： 侵犯人类泌尿生殖系统引起淋病(首位性病) 新生儿眼炎,（二）致病性与免疫性,92,1标本采集,标本：男性：尿道分泌物 女性：阴道分泌物 全身性淋病：血液、泌尿、生殖道的各种分泌物、尿液 立即送检,检验程序,(三) 微生物学检验,93,脓汁、分泌物,直接涂片染色,分 离 培 养 血、巧克力、TM平板,510%co2,351824h,鉴定试验,涂染检 氧化酶 糖发酵 药敏试验,报 告,初步报告,35 1824h,94,（）直接涂片镜检,急性淋病： 嗜中性粒细胞内大量G-，肾形双球菌具有诊断意义 慢性淋病：镜检较困难,检验方法,95,（）分离培养,即采集即培养，常用含有两种以上抗生素（万古霉素、粘菌素、磺胺类等）的选择培养基上培养（如ML、TM） 5-10%CO2 培养基先预温。,96,氧化酶试验： （+） 触酶： （+）（多数奈瑟菌为阴性） 葡萄糖（+），麦芽糖（-） PCR：灵敏，特异，标本不受限制(不需活菌),（）鉴定,97,1.名词解释： 血浆凝固酶、SPA、抗链“o”试验、Optochin试验。 2.根据色素和生化反应将葡萄球菌分成哪几种？ 3.金黄色葡萄球菌的鉴定依据有哪些？ 4.根据链球菌在血平板上的溶血现象，将其分成哪些类型？甲链和乙链有何区别？ 5. 简述链球菌的检验程序和检验方法。 6. 脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌有哪些异同点？ 7.采集脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的标本进行细菌检验应该注意哪些问题？为什么？,复习思考题,98,中等大，突起， 有色素，S型菌落。,葡萄球菌菌落形态 （普通琼脂平板）,99,金黄色葡萄球菌,表皮葡萄球菌,100,金黄色葡萄球菌有透明溶血环。,表皮葡萄球菌无溶血环。,101,葡萄球菌A蛋白（SPA）的意义： （1）降低抗体的调理作用，抗吞噬 （2）协同凝集试验:辅助诊断疾病。,102,血浆凝固酶试验,原理致病性葡萄球菌能产生种血浆凝固酶： 一种为结合型凝