第十七章病毒检验技术.ppt

1、、微生物学检测，第十七章查阅病毒检测技术，总目录，本章内容，学习目标和重点，学习目标：掌握病毒标本的采集和检测应遵循的原则病毒检测鉴定常用技术了解病毒血清学诊断常用方法病毒感染实验室快速诊断学会病毒的培养基本操作重点：病毒标本采集和运输原则。 病毒学的诊断和鉴定常用的方法。 病毒培养的基本操作。 第一节标本的采集、处理和运输，一、标本的采集和处理1 .采集时间：发病早期或急性期提前采集。 2 .采集部位：根据临床症状和疑似感染的病毒。 如流感病毒感染-鼻咽拭子乙型脑炎病毒感染-脑脊液轮状病毒感染-粪便乙型肝炎病毒感染-血液3 .采集方法和处理提高病毒检测分离率，采集时无菌操作，加入抗生素可以杀

2、菌，二， 标本的运输和保存1 .标本的运输应尽快冷冻，防止冷藏运输泄漏，专家，标记2 .标本的保存-70加入甘油和二甲基亚砜(DMSO )、Hanks液和小牛血清等可防止病毒灭活，另一方面，病毒检测分离培养2 .鸡胚培养，第二节病毒检测分离和鉴定初代细胞培养二倍体细胞培养传代细胞、羊膜腔接种尿囊腔接种卵黄囊接种绒毛尿囊膜接种、组织细胞培养、鸡胚培养、动物接种，1 .组织细胞培养、鸡成纤维细胞、heel一般优选914d鸡胚，来源充分，组织分化程度低，自身携带病毒和细菌少， 对接种病毒抗体和病毒易增殖等，2 .鸡胚培养，优点：第二节病毒检测分离和鉴定，选择不同的接种部位是病毒分离成功的关键主要是尿

3、囊腔接种、羊膜腔接种第二节病毒检测分离和鉴定，2 .鸡胚培养、尿囊腔接种、羊膜腔接种、尿囊腔、羊膜腔、常用接种途径常用于羊膜腔接种、卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种、流感病毒、流行性腮腺炎病毒和新城疫病毒的适应及传代培养。天花病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒检测分离、卵黄囊、第二节病毒检测分离和鉴定，3 .常用于动物接种的实验动物有大鼠、大鼠、豚鼠、兔、猴和鸡等常用接种途径包括皮下、皮内的二、病毒增殖的观察病毒细胞内增殖的鉴定指标1细胞形态的变化2红血球吸附3细胞培养液的pH变化(二)病毒数量及病毒感染性测定1血液凝固试验2中和试验3空斑形成试验4半数感染量(ID50 )和组织培养半数感染量(TCID5

4、0 )、第二节病毒检测分离和鉴定二、病毒增殖的观察(一) 病毒在细胞内增殖的鉴定指标1细胞形态的变化(一)细胞病变效果(cytophathic effect，CPE )、第二节病毒检测分离和鉴定，正常细胞病变细胞是指某病毒，特别是指无包膜的病毒感染组织细胞堆积成葡萄状，鉴定为第二节病毒检测分离(2) 1细胞形态的变化，具有呼吸道合胞病毒、麻疹病毒等被膜的病毒，融合了感染细胞的多核巨细胞，与第二节病毒检测分离鉴定，(3)封入体，1细胞形态的变化一般是完整的病毒粒子或尚未组装的病毒亚单位集合，称为封入体第二节鉴定为病毒检测分离，2吸附红细胞3细胞培养液pH变化，2观察病毒增殖，病毒感染细胞后改变细

5、胞代谢，引起培养液pH变化。 第二节病毒检测分离和鉴定、(二)病毒数量和病毒感染性的测定、二、病毒增殖的观察、1凝血试验、病毒颗粒、红血球，某病毒(如流感病毒)表面的己糖(HA )引起人或某哺乳动物的红血球的凝集。凝血现象、第二节病毒检测分离与鉴定、能使红血球完全凝聚的病毒的最高稀释倍数为该病毒的凝血效价，使该效价为一个凝血单位(HAU )、第二节病毒检测分离与鉴定即第二节病毒检测分离与鉴定， 2中和试验(Nt )是在体外孵化病毒和特异性抗体的混合物，使病毒和抗体相互反应，在敏感的宿主体内接种混合物，培养后观察CPE或红细胞吸附现象是否消失，即特异性抗体是否中和相应的病毒，测定残留病毒传播力的

6、方法， 3 .空斑形成试验测定4半数的感染量(ID50 )和组织培养半数的感染量(TCID50 )，病毒感染鸡胚、动物或细胞后，测定引起50%死亡或病变的最小量。用于估计病毒感染的强弱，但无法准确测定感染性病毒粒子的多寡，结合文章内容，第二节病毒检测分离与鉴定，第三节病毒学的检查与诊断，一、形态学检查及诊断1 .光学显微镜检查： *大病毒体(天花病毒等) * 封闭体狂犬病感染-2.电子显微镜检查： * 透射电子显微镜用于观察病毒的大小、形态和结构以及细胞内的超微结构等*扫描电子显微镜：用于观察病毒与细菌的表面结构与附属结构等一、形态学检查与诊断、扫描电子显微镜、第三节病毒学检查与诊断、第三节病

7、毒学检查与诊断，(1) 超过滤法超离心法接种细胞快速增殖法免疫凝集法，(2)常用观察法负染色法超薄切片法免疫电镜法，病毒颗粒在明亮、周围黑暗的背景下呈现亮点，过程类似于病理切片过程，免疫组织化学与电镜技术相结合，透射电镜，第三节病毒学检测与诊断，二， 血清学检测及诊断原理：用已知的病毒抗原检测患者血清中的抗体水平，或者用已知的病毒抗体直接检测标本中的病毒抗原1 .病毒抗原检测：用荧光素、酶或者胶体金等标志物检测标本中相应的病毒抗原。 ELISA为HBsAg，第三节病毒学检测及诊断，2 .病毒抗体检测：已知的病毒抗原多为由基因工程技术制备的重组抗原，其次为从患者标本中分离纯化的抗原。 检测抗体类型确定患者的感染阶段急性期单位血清的IgM检测是诊断原发感染和早期感染igg含量的检测应取患者急性期和恢复期的两部分血清，含量上升4