血流感染实验室诊断

1、。血流感染实验室诊断新进展，尧尧，北京协和医院临床实验室，2013年4月13日。内容，什么是血流感染？血流感染的流行病学特征血液培养过程的优化提高培养结果的阳性率分析减少污染分子生物学方法检测血流感染基于PCR技术MALDI-TOF MS PNA-FISH，concept，感染=炎性病原体全身炎症反应综合征(SIRS)体温38C或90次/分钟呼吸频率20次/分钟，或PaCO212109/L或10%脓毒症=SIRS感染，血液培养可为阳性或阴性严重脓毒症)=脓毒症器官功能障碍，组织灌注不良和低血压性脓毒性休克。败血症：一种由病原菌及其毒素侵入血流引起的临床综合征，是一种临床综合征。病原体主要是细菌

2、，但也有真菌和分枝杆菌。菌血症：细菌在血流中短暂出现的现象，一般没有明显的毒血症状，在国外文献中常与败血症一起使用。血流感染：目前脓毒症和菌血症统称为血流感染。医院获得性血流感染原发性血流感染实验室确认的血流感染(LCBI)临床败血症继发血流感染：从血培养物中分离出显著的微生物，这与另一个部位的医院感染有关。除了由血管或血管内导管装置引起的血流感染。社区获得性血流感染。实验室确认的血流感染(LCBI)，标准1:从一个或多个血样中培养出一致的病原体，培养出的病原体与其他部位的感染无关。标准2:患者至少有下列症状和体征之一：发热(38 C)、寒战或低血压，且该疾病符合下列症状之一：1。皮肤寄生菌(

3、如白喉样芽孢杆菌、芽孢杆菌、丙酸杆菌、凝固酶阴性葡萄球菌或微球菌)从不同部位采集的血样中培养两次或更多次。2.从血管内导管患者的血样中至少培养一次皮肤寄生菌(如白喉样芽孢杆菌、芽孢杆菌、丙酸杆菌、凝固酶阴性葡萄球菌或微球菌)，主管医生开始适当的抗菌治疗。3.血液中抗原检测呈阳性(如流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌或乙型链球菌)。与实验室阳性结果一致的症状和体征与其他部位的感染无关。标准3:年龄38岁C)，体温过低(37 C)，呼吸暂停，心动过缓，以及下列情况之一(以上3分省略)。一、临床血流感染，以下两种情况之一：其他不明原因引起的发热和低血压(收缩压90毫微克或收缩压低于正常值40毫微

4、克以上)，任何一种临床症状如少尿(尿量小于30毫升/小时)，符合以下所有条件：无血培养，或血培养阴性或血抗原反应阴性，其他部位无明显感染者。医生针对这种感染中毒症状给1岁以下的婴儿服用适当的抗菌药物，并有任何一种临床症状，如发烧、体温过低、呼吸暂停或心动过缓等引起的其他书籍。并符合以下所有条件：无血培养，或阴性血培养或阴性血抗原反应，其他部位无明显感染者。医生针对这种感染中毒症状给予适当的抗菌药物。BSI流行病学特征，BSI发病率逐年上升。凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌和真菌血流感染的发病率逐年上升。革兰阴性菌逐年减少，耐药菌比例逐年上升。社区和医院获得的血流感染病原体谱存在差异。住院牛血清白蛋白

5、阳性患者死亡率高。美国败血症流行病学，马丁等，国家环境医学杂志2003；34833601546，加拿大加拿大世界监测2002-2009年，诊断微生物感染疾病。2011年；69: 307，加拿大加拿大世界监测组织，2002-2009年，诊断微生物感染疾病。2011年；69: 307，美国49家医院的牛血清白蛋白的病原体谱，CID.2004，39: 309-317，834血培养分离物在2012年在Pumph。ESBL 2012年144株鲍曼不动杆菌的药敏结果为60.2%，ESBL 2012年67株肺炎克雷伯菌的药敏结果为34.4%，北京2012年61株鲍曼不动杆菌的药敏结果，北京2012年76株金

6、黄色葡萄球菌的药敏结果，北京2012年46株溶血性链球菌的药敏结果2011 HIF-NET念珠菌对氟康唑的敏感性，2011 HIF-NET念珠菌对伏立康唑的敏感性，2011 HIF-NET其他酵母菌对氟康唑的敏感性，2011 HIF-NET其他酵母菌对伏立康唑的敏感性，采血是影响血培养阳性率的独立相关因素。 CLSI M47-A:为每个患者收集23套血液培养物(40 60毫升)。存活败血症运动指南(全球范围):在抗生素治疗前至少收集2组血培养物。英国国民保健制度血液培养标准：收集2套血液培养物。采血对血培养阳性率的影响，JCM，2007。采血对血培养阳性率的影响，临床。微生物学。2011，49

7、 (12) :4047，27岁的克林顿。微生物学。2011，49 (12) 3047。常规设置梅奥诊所： 2个细菌需氧菌瓶1个细菌厌氧溶菌瓶，采血量和阳性率，无条件致病菌，28、下述细菌阳性凝固酶阴性葡萄球菌、微球菌、丙酸杆菌、芽孢杆菌，它们在多种血液培养物中培养一次，可能是条件致病菌，应结合临床分析，血液培养污染细菌，29，无条件致病菌，梅奥诊所，(p38C或90/分；呼吸20分钟；白细胞12或10%未成熟中性粒细胞32%患者有一瓶以上中枢神经系统阳性，BSI68%，污染12% (p 0.001)无全身炎症反应综合征症状：BSI 5%，污染29% (p 30秒，1% 2%碘酊30秒或10%碘

8、消毒60秒：从穿刺点划一圈进行消毒，直径3厘米70急诊血液培养的污染率与工作量有关。密歇根大学卫生系统的大部分急诊血培养由采血者采集，其次是护士和医生，名患者=1:9，重症护士，名患者=233603，其他地区的：名护士=82521名患者=133604，7586名血培养者(11.4%)在至少一个瓶中呈阳性，致病菌阳性率为8.0%，污染率为3.7% 单一培养的阳性率为5.1%(p0.001)，污染率无显著差异(2.2%对2.6% Schuyler halverson，et al. jcm.2013 online，急诊科每小时工作量，schuyler halverson，et al. jcm.201

9、3 online，血液培养物的污染率在繁忙时增加，or=1.23，or=0.93，schuyler halverson，Et al .JCM。2013年在线。抗生素治疗和血流感染死亡率，死亡率，胸部115 (2): 1999，42，血液培养三级报告系统，阳性血液培养，最终报告，革兰氏染色，繁殖培养，初步报告(直接药物敏感性)，菌株鉴定。血培养结果对治疗的影响，A=适当治疗I=不适当治疗，临床感染病例24:584-602，1997，血流感染的快速分子诊断，分子诊断不受抗菌药物使用的影响。血液培养后的分子诊断为阳性。直接使用血样进行分子诊断快速，但不能提供药物敏感性结果。血液培养阳性瓶的分子鉴定，

10、安提戈涅科萨基等，专家意见医学诊断，2012，6 (3) :209，阳性血培养-基于聚合酶链反应的检测，聚合酶链反应特异性检测病原体特异性聚合酶链反应特异性耐药基因检测：葡萄球菌属，肠球菌属范细菌载量：肺炎链球菌自溶的lytA拷贝数A基因广谱检测：聚合酶链反应扩增特异性目标多态性分析测序后续基因检测种特异性实时聚合酶链反应，专家意见医学诊断2012，6(3)330209。当前意见感染dis.2011，24 (2) :137，47，qpcr鉴定血培养阳性瓶中的铜绿假单胞菌，目标：ecfxgene血培养系统：BatC/ALLET，87瓶FA和13瓶FN显示G-b对照方法：氧化酶，API 20E D

11、NA提取：0.5毫升肉汤，离心后，加入裂解液，煮沸定量pcr:扩增：寡核苷酸引物基因特异性检测：荧光标记杂交探针，152bp片段，年度临床微生物抗菌谱2010，9:21，48、qpcr鉴定出血培养阳性瓶中的铜绿假单胞菌和33瓶pae，敏感性和特异性均为100%。在pae (20CFU/ml)kpn (108CFU/ml)的条件下，聚合酶链反应(-)检测限：将ATCC27853 ecfX基因克隆到大肠杆菌前10位，临床微生物抗菌谱2010，9336021。阳性血培养-基于聚合酶链反应的检测。对最常见的病原体进行多重聚合酶链反应电泳、酶联免疫吸附杂交、多重实时聚合酶链反应混合血液筛查(bag，li

12、ch，Germany) :多重聚合酶链反应酶联免疫吸附试验和证明分离(mobidiag，赫尔辛基，芬兰):多重实时聚合酶链反应微阵列分析、各种病原体的检测和mecA、在3h内完成多重实时聚合酶链反应、专家意见。医学。Diagn。2012，6 (3) :209。嘿。血培养阳性多重实时聚合酶链反应，新微生物学，36，65-74，2013，血培养阳性多重实时聚合酶链反应，新微生物学，36，65-74，2013，52，血培养阳性-PNA FISH核酸荧光原位杂交，血培养阳性肉汤革兰氏染色阳性，革兰氏阴性细菌：商业试剂盒eco/kpn/pae Efa/其他肠球Sau/scn Cal/cgl/其他念珠菌报

13、告沙门氏菌属。完成了90分钟的PNA鱼，应用环境微生物。2010年；76:4476克林顿。微生物学。2013，51(4):1301 J临床微生物学。2009年；473360247，基质辅助激光分析电离原理：样品分散在基质分子中形成晶体，然后直接注入。当晶体受到激光照射时，基质吸收了大部分激光能量，因此基质分子和样品获得能量并将其投射到气相中，成为带电离子。基质在离子形成过程中起质子化或去质子化的作用，这使得样品带正电或负电，并成为带电荷的离子基质，这将干扰被检测分子的质谱峰的大小和浓度。飞行时间原理：离子源产生的离子在加速电场中获得动能。当进入高真空非电场飞行管道并在其中飞行时，较轻的离子快速

14、飞行并较早到达探测器；较重的离子缓慢飞行，稍后到达探测器。因此，根据离子的飞行时间与质荷比(m/z)的平方根成正比的关系，可以通过测量飞行时间来计算相应离子的分子量。飞行时间质谱操作步骤。56，MALDI-TOF MS快速鉴定阳性血培养物，快速鉴定菌落和阳性血培养液：20分钟(从报警到鉴定结果)MALDI-TOF MS(Bruker)Bactec(BD):正确鉴定：193/213阴性细菌(包括厌氧菌)在284/319阳性细菌(89.02%)中，80.9%被正确鉴定，7株缓解链球菌被鉴定为SPN maldi-tof ms (Bruker)细菌/警报15瓶复合菌：使用16: 1631 J克林微生物学2010；483360 1542，以16s为金标准，980株临床分离菌，鉴定正确率为肠杆菌科97.7%，非发酵菌92%，葡萄球菌94.3%，链球菌84.8%，HACEK84%，酵母菌85.2%，临床微生物483360900，189份阳性血培养