十五 甾体激素类药物的分析PPT课件

1、第15章类固醇激素的分析，第1节基本结构和分类结构：a环：大部分是带有4-3-酮的脂环族，少数苯环C3:可能有酮基或烃基；大部分C10和C13:具有角甲基，而小部分C10没有角甲基。Cll:可能有酮基或羟基。C 17:可含有羟基、酮基、酮基、-醇酮基、甲基、乙炔基等。基本结构：环戊烷二氢菲，3，类固醇激素的分类，肾上腺皮质激素，雄激素和蛋白质，合成代谢类固醇激素，孕酮和雌激素，4，1，肾上腺皮质激素(简称皮质激素)，如氢化可的松，曲安奈德，醋酸地塞米松等。结构特征：环a :具有21个碳原子，具有4-3-酮基，环C17:具有-醇酮基，大部分具有-羟基，环C11:具有角甲基，环C11:具有羟基或酮

2、基，环c 11:具有紫外吸收，氢化可的松，5，肾上腺皮质激素，醋酸地塞米松，C1，C2和C4之间的双键，环C5，9，抗炎作用增强，环c 16，羟基形成醋酸酯，可延长肌肉注射时的作用时间，6，2。雄性激素和蛋白质合成类固醇雄性激素：睾丸酮衍生物，如甲基睾丸酮、丙酸睾丸酮、十一酸睾丸酮和其他蛋白质。合成代谢类固醇有苯丙酮。7。结构特征：雄性激素母核有19个碳原子，蛋白质合成代谢类固醇母核有18个碳原子，A环：有4-3-酮基C17:无侧链。它们大多数是-羟基，由它们形成的一些酯具有紫外吸收。雄性激素：丙酸睾酮，蛋白质合成类固醇：去甲苯基丙酸酯，Cl0上无角甲基。8，3，黄体酮促黄体激素或黄体酮。典型

3、的药物是孕酮。中国药典含有：黄体酮、醋酸甲羟孕酮的原料和制剂。母核有21个碳原子。环A :有4-3-酮基C17:有酮基，有些有-羟基，与乙酸、己酸等形成酯。黄体酮，醋酸甲羟孕酮。10，4，雌激素(卵泡激素)负载有雌二醇、炔雌醇、苯甲酸雌二醇等。其结构特征是：母核有18个碳原子；环：是苯环，C3:有酚羟基和一些形式的酯或醚；角自由甲基有-羟基，一些烃基形成酯，一些有乙炔基。鉴定试验1、物理常数的测定：熔点、比旋度、吸收系数等。2、化学鉴定方法(1)用强酸显色反应许多甾体激素(母核)可以用硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸等显色。其中与硫酸的显色反应被广泛使用。类固醇激素药物，生色剂，h2so4h3po4h

4、cl4hcl4hcl。12、13、(ii)反应的官能团1、C17-醇酮基、肾上腺皮质激素类药物、显色剂、四唑盐、可还原剂、氧化剂、除氟林试验溶液、多洛试验溶液、14、类固醇激素类药物、腙(黄色)、羰基试剂、2。酮基：C3-酮基和C20-酮基的显色反应，#常用的羰基试剂：2，4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼、15、甾体激素类药物与酮基或活性亚甲基、显色反应、硝基铁氰化钠(间二硝基苯酚、芳香醛)、显色反应3、酮基、16、黄体酮、蓝紫色、硝基铁氰化钠、其他类固醇、浅橙色或无显色、专属鉴别反应、17，有机氟，F，有机破坏，有机氯，Cl，4，有机卤素的显色反应，茜素氟蓝二氧化铈硝酸盐，硝酸-硝酸银，Ag

5、Cl，显色反应，18，5，酚羟基的显色反应，雌激素类药物，红色偶氮染料，重氮苯磺酸。19，含炔基的类固醇激素，银盐沉淀，硝酸银，6。乙炔基、20、3的沉淀反应。衍生物的制备及其熔点的测定与一些试剂反应生成酯、肟、缩二脲用醇碱溶液水解甾体酯生成相应的前体，然后测定其熔点进行鉴定。虽然该方法繁琐耗时，但特异性强，仍被一些国家药典采用。缩氨基脲的形成，熔点约为182(分解)，2。酯的水解，熔点为150 156。22，4，紫外分光光度法分子含有，-不饱和酮，苯环等共轭结构，在紫外区有特征吸收，4-3-酮240nm，苯环280nm，23，苯磺隆，丙酸倍氯米松，溶剂，甲醇，乙醇，20微克/毫升，浓度，20

6、微克/毫升。结果表明，在238nm处有最大吸收，在239nm处有最大吸收，为0.57 0.60，在239nm和263nm处的吸光度比值为2.25 2.45。24，5。红外分光光度法测定的甾体激素类药物结构复杂。红外吸收光谱是鉴别这些药物的有效而可靠的方法。大多数都是用这种方法识别的。嘿。25，结构特征：酚羟基，C17-OHC17-乙炔基，炔雌醇，26，1505 cm-1，3505 cm-1，3300 cm-1，1590 cm-1，3610 cm-1，酚羟基，醇羟基，1615cm-1，苯环骨架振动，27，6，薄层色谱法，主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别，方法：对照方法要求供试品溶液显示的主斑点的

7、颜色和位置与对照溶液的颜色和位置相同。注意：炔诺酮薄层色谱图：供试品应进行预处理；显色后，立即检查。29，7。在一定的色谱条件下，高效液相色谱法比较类固醇激素样品的保留时间和鉴别的参考峰。一般规定，在含量测定项下，供试品色谱峰的保留时间应与对照品色谱峰的保留时间一致。第3节特殊杂质检查1。其他类固醇1。具有不同定义和标记药物结构的类固醇化合物称为“其他类固醇”。其他类固醇与类固醇激素具有相似的药物结构，并具有一定的药理作用，但彼此不同。2.原料来源，中间体，异构体，降解产物。特征(1)可能有多种类固醇杂质(2)结构相似4。方法(具有一定分离能力)薄层色谱法(主成分自稀释对照法)高效液相色谱法(

8、无校正因子的主成分自稀释对照法)。32，1。薄层色谱法：中国药典(1)薄层板：硅胶G板、硅胶GF 254或硅胶HF 254。(2)供试品溶液和对照品溶液的制备：用溶剂(如氯仿-甲醇或甲醇或氯仿或丙酮)制备一定浓度的溶液。(3)显色剂体系：更常用不同比例的二氯甲烷-乙醚-甲醇-水混合溶剂，(4)显色剂：碱性四唑蓝试液、硫酸-乙醇(2:8或1:1或：7)、20%硫酸、10%磷钼酸-乙醇溶液。(5)检测方法：将碱性四唑蓝试液风干，105烘烤10分钟，100喷洒碱性四唑蓝试液，立即检查硫酸-乙醇风干，先喷洒显影剂，120烘烤5分钟，20%硫酸风干，先喷洒显影剂，105烘烤10分钟，10%磷钼酸-乙酸风

9、干，喷洒显影剂，100加热10-15分钟。(6)测定方法：根据规定的斑点数量和颜色，34，2。中国药典(2005年版)高效液相色谱的色谱条件如下：(1)柱填料：十八烷基硅烷键合硅胶。(2)流动相：不同比例的甲醇-水混合溶剂。(3)探测器：紫外吸收探测器(241纳米、254纳米、28纳米、218纳米、230纳米、288纳米等。视品种而定)。(4)供试品溶液和对照品溶液的制备：溶液为高浓度，溶液为低浓度。(5)测定方法：溶液中显示的杂质峰数不得超过1个或几个；每种杂质的峰面积或其总和不得大于溶液主峰面积的某一部分。也就是说，根据每个药物项目下指定的杂质峰的数量和面积的要求，进行判断。例如，黄体酮中

10、“其他类固醇”的检测方法如下：取本品适量，准确称量，以甲醇为溶剂，配制8毫克/升溶液和0.02毫克/升溶液。使用含量测定项下的方法和溶液，将5u1注入液相色谱仪，调整仪器的灵敏度，使pe图a中峰1面积的四分之三，38，2，硒的检查，二氧化硒(SeO2)在源合成中的脱氢作用，毒性，方法，原理：3，甲醇和丙酮药典规定，用气相色谱法测定时，不得出现甲醇峰。该方法测定甲醇的检出限为3.1克。甲醇 0.3%丙酮5.0%内标校正因子。40，4，游离磷酸用途：在生产和储存过程中，磷酸盐可能被引入地塞米松磷酸钠中，应检查游离磷酸盐。方法：钼蓝、地塞米松磷酸钠检查游离磷酸精确称量20毫克，置于25毫升容量瓶中，

11、用15毫升水溶解，精确加入2.5毫升钼酸铵硫酸试液和1毫升1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液，加水至刻度，摇匀，在20放置30 50分钟，根据分光光度法测定740纳米处的吸光度，用同样方法处理的吸光度不得大于4.0毫升对照溶液。43，(对照溶液0.0035% KH2PO4)。44，第4节内容1的确定。反相分配色谱法是最广泛用于测定类固醇激素含量的高效液相色谱法(48%)。固定相：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：甲醇和水的混合物，紫外检测器：带4-3-酮和苯环，在240纳米或280纳米吸收。45、实例：黄体酮含量测定色谱条件：固定相ODS，流动相甲醇-水(65336035)，检测波长254nm，内标

12、己烯雌酚系统适用性试验：n1000，r符合要求。嘿。46、测定样品：黄体酮原料、注射液。定量方法：内标法、甲、对照品、乙、供试品、47，II和紫外分光光度法(30%)在分子中有4-3-酮、苯环等共轭体系，因此它们在紫外区有特征吸收。4-3-酮240nm()，肾上腺皮质激素雄激素和蛋白合成代谢类固醇孕激素，苯环280nm()，雌激素，例如，48:醋酸地塞米松片的含量均匀度检查(1)制备供试品溶液，取10片进行测量(2)测量：240纳米(3)计算，49，规格：0.75毫克/片吸收系数=357，计算每片100%标示量的含量x，找出平均值和标准偏差S，差值A，A 1.80S15.0合格A 15.0不合

13、格A 1.80 15.0不合格A 1.80 15.0和A S15.0复试。50，3，比色法(1)异烟肼比色法1，原理，肾上腺皮质激素，雄激素和蛋白质合成代谢类固醇，孕酮，420nm，51，暗45 ，参考物质法，52，2。测定方法实施例：醋酸地塞米松软膏含量的测定：对照品溶液的制备：准确称取25毫克醋酸地塞米松对照品，放入10毫升容量瓶中，加入适量无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精确测量5m1，用无水乙醇稀释至5Ml，摇匀，即可。试样溶液的制备：取本品适量(约25毫克醋酸地塞米松)，准确称量，置于烧杯中，加入约25毫升无水乙醇，水浴加热，搅拌溶解醋酸地塞米松，然后置于冰浴中冷却；过滤，将滤液放入

14、10毫升容量瓶中，用同样的方法提取3次，将滤液加入容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。53、测定方法：分别准确测定对照品溶液和供试品溶液的lOmI，放入带塞的容器中，水浴蒸去乙醇，向残渣中加入氯仿lOmI，摇匀溶解残渣，加入0.1%异烟肼甲醇溶液LoMi(取0.5g异烟肼，063m1盐酸，加甲醇溶解至50毫升)，摇匀，置于55避光处45分钟，取出。 冷却至室温，用氯仿稀释至25ml，摇匀，分别测定415nm处的吸光度，分别计算，本方法主要用于测定类固醇激素制剂，如倍他米松软膏、哈希米软膏、倍他米松磷酸钠及其注射液。 讨论(1)溶剂的选择：一般采用盐酸异烟肼甲醇、乙醇、无水乙醇，无水乙醇

15、稳定性好，显色强度高，在植物中溶解度低(3)水分、温度、光照和氧气含量的影响水分含量腙水解A - %；非挥发性溶剂，当水分未被吸收时O2和光照对T4无影响)反应的特异性：带有4-3-酮基的甾体激素在室温下小于1h可与酸性异烟肼定量反应。其他甾酮化合物需要放置或加热很长时间才能完全反应。例如，黄体酮和可的松反应缓慢。C17-酮化合物也能反应并形成腙、57。其他带有共轭双键的甾酮化合物，如5-7-酮胆固醇乙酸酯，在长时间内不能完全反应。Cll- one在上述条件下不会发生反应。C3=o c17=o，C20=O，C11=O不反映该方法的反应特异性C3-酮。(5)雌激素药物不能用异烟肼比色法测定：环A

16、为苯环，不含，-不饱和酮基。最常用的四氮唑盐是2，3，5-三苯基四氮唑盐(TTC)，其还原产物为不溶于水的深红色三苯基四氮唑盐，m为480 49 onm，其次为蓝色四氮唑盐(BT)，还原产物为深蓝色二氯甲烷，m约为525nm。59，肾上腺皮质激素，C17-醇酮基的强还原性，2，原理，60，O，羟基-，分子重排，61，三苯基甲基红、62，3，测定方法，对照方法，63，4，讨论，(1)基团对反应速度的影响，c11=o c11-oh，c21-oh c21-酯，64，(2)受溶剂和水的影响，含水量 5% ，含水量10%10%含水量30%反应小，-无水乙醇，具有一定的还原性。65，(3)碱的种类和加入顺序，反应应在强碱(pH13.75)下进行，以四甲基氢氧化铵为最佳结果，加入顺序：66，(4)O2和光的影响，反应过程中的反应产物，对光的恐惧，避光，快速，O2影响颜色强度和稳定性，隔绝空气，快速，填充N2，指甲油对空气中的氧敏感，67，(