2.1微生物的实验室培养-(89张PPT).ppt

1、课题1微生物的实验室培养,专题2:微生物的培养与应用,细菌的菌落,鉴定菌种的重要依据,1.何为培养基？,3.不同的培养基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些营养元素？有何作用？请举例说明。,阅读教材P1415相关内容，回答以下问题：,2.按照不同的培养基划分标准，培养基有哪些种类、配制特点及其应用？,一、基础知识：,（一）培养基,（1）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。（2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。（3）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。,1.培养基的类型和用途,液体培养基：,表面生长,均匀混浊生长,

2、沉淀生长,back,半固体培养基：,无动力,有动力(弥散),固体培养基：菌落,微生物需要的五大类营养要素物质是：,2.培养基的成分,碳源、氮源、无机盐、水、生长因子,无机碳源：CO2；NaHCO3等,有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等,构成细胞物质和一些代谢产物异养微生物的能源,来源：,作用：,（1）微生物的碳源,无机氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。,有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等,凡是能够为微生物提供N元素的营养物质。,主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物。,（2）微生物的氮源,概念：,来源：,作用：,1.何为无菌技术？无菌技术包括哪些方面？,2.什么是消毒？灭

3、菌？两者有何区别？,3.常用的消毒与灭菌的方法有哪些？有何要求？,4.请说出干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操作步骤。,思考2：,二.无菌技术,1.无菌技术的概念,无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。,获得纯净培养物的关键是：防止外来杂菌的入侵,消毒定义：使用较温和的物理或化学方法，杀死物体表面或内部的部份微生物（不包括芽孢和孢子）。,2.消毒与灭菌的概念及两者的区别,灭菌的定义：,是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而达到完全无菌之过程。,煮沸消毒法：100煮沸5-6min。巴氏消毒法：70-75下煮30min或80下煮15min。化学药剂消毒法

4、：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。紫外线消毒。,.消毒的方法：,3.常用的消毒与灭菌的方法,灼烧灭菌干热灭菌：160-170下加热1-2h。高压蒸气灭菌：100kPa、121下维持15-30min.,.灭菌的方法：,1关于微生物营养物质的叙述中，正确的是A、是碳源的物质不可能同时是氮源B、凡碳源都提供能量C、除水以外的无机物只提供无机盐D、无机氮源也能提供能量,D,课堂练习,2下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是A、防止杂菌污染B、消灭杂菌C、培养基和发酵设备都必须灭菌D、灭菌必须在接种前,B,3.培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依

5、次是()。化学消毒灼烧灭菌干热灭菌紫外线灭菌高压蒸汽灭菌巴氏消毒法ABCD,A,4.可以作为硝化细菌碳源、氮源及能量来源的物质依次是（）A.含碳有机物、氨、光B.含碳无机物、氮、氮C.含碳有机物、氨、氨D.含碳无机物、氨、氨,D,5无菌技术包括以下几个方面的叙述，其中错误的是()A对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌B将用于微生物培养的培养皿、接种用具和培养基等进行灭菌C为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行D实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触,D,6下列物质中，不能用作酵母菌碳源的是（）A含碳有机物B蛋白胨C含碳无机物D花生粉饼等天然物质,C,

6、7。关于灭菌和消毒的理解不正确的是A灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和孢子B消毒和灭菌实质上是相同的C接种环用灼烧法灭菌D常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等,B,8.下列叙述错误的是（）A培养乳酸菌时需要在培养基中添加维生素B培养霉菌时需将培养基的PH调至碱性C培养细菌时需将PH调至中性或微碱性D培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件,B,9.甲、乙、丙是三种微生物，下表I、是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在中正常生长繁殖；乙能在I中正常生长繁殖，而甲和丙都不能；丙能在中正常生长繁殖，甲、乙都不能。下列说法正确的是（）A、甲、乙、丙都是异养微生物B、甲、乙都是自

7、养微生物、丙是异养微生物C、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物D、甲、乙是是固氮微生物、丙是异养微生物,D,1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？,2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手,答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。,答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。,旁栏思考,微生物实验室培养的基本操作程序,1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存,三、

8、实验操作,(一)制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌),2.制备牛肉膏蛋白胨培养基的步骤,（1）计算（2）称量（3）溶化:调PH值（4）灭菌:将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121，灭菌1530min。（5）.倒平板:待培养基冷却到50左右时，在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。,倒平板技术,1.将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。,1,2,3,4,倒平板技术,2.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。,1,2,3,4,倒平板技术,1,2,3,4,3.用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥

9、形瓶中的培养基(约1020mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。,倒平板技术,1,2,3,4,4.等待平板冷却凝固，大约需510min。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。,1.培养基灭菌后，需要冷却到50左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？,答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。,问题讨论,2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培

10、养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。,9.关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是（）A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C.待培养基冷却至50左右时进行倒平板D.待平板冷却凝固约510min后将平板倒过来放置,A,10有关倒平板的操作错误的是（）将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上B使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C将

11、培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上D等待平板冷却凝固后需要倒过来放置,C,（二）纯化大肠杆菌,平板划线法和稀释涂布平板法,微生物的接种方法：,纯化的原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落,平板划线法,稀释涂布平板法,一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。,问题讨论,1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物

12、；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？,答：以免接种环温度太高，杀死菌种。,3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？,答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

13、,11下列有关平板划线接种法的操作错误的是（）A将接种环放在火焰上灼烧B将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液C蘸取菌液和划线要在火焰旁进行D划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连,D,2.稀释涂布平板法,1.将分别盛有9mL水的6支试管灭菌，并按101106的顺序编号。,2.用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。,3.从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复第2步的操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。,注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰12cm处.,计算每克样品中的

14、菌落数：,每克样品中的菌落数(CV)M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。,涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？,应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。,问题讨论,微生物的恒温培养,微生物的恒温培养,微生物的恒温培养,菌种的保存,1.临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保存。2.长期保存：甘油冷冻管藏法,四、课题成果评价,（一）培养基的制作是否合格如果

15、未接种的培养基在恒温箱中保温12d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。,（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。,（三）是否进行了及时细致的观察与记录培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。,12获得纯净培养物的关键是（）A将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌B接种纯种细菌C.适宜环境条件下培养D.防止外来杂菌的入侵,D,13.有关稀释涂布平板法，叙述错误的是（）A先将菌液进行一系列的梯度稀释B然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C