紫外-可见分光光度法（三）

紫外-可见分光光度法主讲：黄小忠一二三四五六第一节概述第二节基本原理第三节紫外可见分光光度计第四节可见分光光度法第五节目视比色法第六节紫外分光光度法四、可见光分光光度法显色反应和显色剂显色条件的选择测量条件的选择定量方法四、可见光分光光度法氧化还原反应

Fe3＋＋e=Fe2＋配位反应Fe3＋＋5SCN－=Fe(SCN)52－显色反应：将待测组分转变成有色化合物的反应显色剂：与待测组分形成有色化合物的试剂四、可见光分光光度法01选择性要好02灵敏度要高03有色化合物的组成要恒定，化学性质稳定04显色剂的颜色与有色化合物的颜色差别要大显色条件要易于控制05四、可见光分光光度法M为被测物质，R为显色剂，MR为反应生成的有色配合物，其反应式为：M＋R≒MR实验的方法为：固定被测组分的浓度和其它条件，然后加入不同量的显色剂显色剂用量显色剂一般应适当过量四、可见光分光光度法溶液酸度

当酸度不同时，会生成配位比不同的配合物，其颜色也有所不同如：Fe3+与水杨酸的配合物：PH＜4

Fe(C7H4O3)+

紫色4＜PH＜9

Fe(C7H4O3)2－

红色PH＞9

Fe(C7H4O3)

33－

黄色四、可见光分光光度法四、可见光分光光度法酸度过高会降低配合物的稳定性；酸度较低时，不利于显色反应的进行酸度变化，显色剂的颜色可能发生变化四、可见光分光光度法固定待测液组分与显色剂浓度，改变溶液pH，分别测定吸光度A值，绘制A-pH关系曲线。选择曲线平坦部分对应pH作为应控制的pH范围实验方法四、可见光分光光度法一般显色反应在室温下进行，但是也有一些反应要加热到一定温度下才能进行显色温度适宜的显色温度要由实验来确定显色时间显色时间：反应完成所需要的时间；

稳定时间：显色后有色物质色泽保持稳定的时间

四、可见光分光光度法实验方法：配制一份显色溶液，从加入显色剂开始，每隔一定时间测定吸光度A值，绘制A-t关系曲线。选择曲线平坦部分对应时间作为应控制的时间范围适宜的显色时间要由实验来确定四、可见光分光光度法““溶剂的选择有色化合物在有机溶剂中稳定性好，溶解度大四、可见光分光光度法入射光波长的选择依据被测物质的吸收曲线，选用最大吸收波长作为入射波长入射光波长的选择根据“吸收最大干扰最小”的原则四、可见光分光光度法如果仅有显色剂与被测组分反应的产物有吸收，则可以用溶剂作参比溶液溶剂参比1如果显色剂和其他试剂有颜色，则用试剂溶液作参比液试剂参比2如果试液中其他共存组分有吸收，则用试液作参比液试液参比3参比溶液的选择四、可见光分光光度法调节溶液的浓度选用适当厚度的比色皿吸光度测量范围的选择测量吸光度过高或过低，误差都很大，一般适宜的吸光度范围是0.2～0.8控制的方法为：1、工作曲线法（标准曲线法）（1）作图法方法：配制一系列不同含量的待测组分的标准溶液，以不含待测组分的空白溶液为参比，测定标准溶液的吸光度。四、可见光分光光度法四、可见光分光光度法“工作曲线法（标准曲线法）方法：配制一系列不同含量的待测组分的标准溶液，以不含待测组分的空白溶液为参比，测定标准溶液的吸光度作图法四、可见光分光光度法计算法工作曲线可用一元线性方程表示：y=a＋bxb为直线斜率a为直线的截距r为相关系数四、可见光分光光度法比较法

用一个已知浓度的标准溶液cs，在一定条件下，测得其吸