糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化

HbA1c检测标准化和实验室操作规范化1糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024前言4个系统的正确度和精密度验证如何使检验结果更准确HbA1c检测的标准化展望提纲2糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024中国拥有全球最大的糖尿病人群：9240万PrevalenceofDiabetesamongMenandWomeninChina中国糖尿病流行病学调查中日友好医院杨文英组织3糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024与糖尿病相关的死亡21%心脏病14%截肢或致命性外周血管疾病43%12%卒中HbA1c1%微血管并发症，如肾病和失明37%降低HbA1c与降低并发症的风险密切相关

UKPDS

StrattonIM,etal.UKPDS35.BMJ.2000;321:405-12.微小改善可明显减少并发症

4糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024HbA1c与平均血糖正相关0501001502002503003504004505004567891011121314%HbA1cGlucose(mg/dL)MBG=35.6xA1C–77.3n=1439,r=0.82DiabetesCare2002;25(2)275-8HbA1c：糖尿病人较长期的血糖监控指标5糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024HbA1c在糖尿病中的作用

评价血糖控制的“金标准”临床意义：HbA1c不受短期的血糖浓度波动所影响，反映近2～3个月血糖控制的总体水平。HbA1c可作为糖尿病患者长期血糖控制的监测指标。与糖尿病慢性并发症的发生及发展有密切关系，影响患者长期预后。血糖控制达标的糖尿病患者每半年检查一次HbA1c。血糖控制未达标或治疗方案调整后，糖尿病患者应每3个月检查一次HbA1c。TheDiabetesControlandComplicationsTrialResearchGroup.NEnglJMed1993;329:977-86UKProspectiveDiabetesStudyGroup.Lancet1998;352:837-536糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/20242010年ADA糖尿病诊治指南

增加糖化血红蛋白（HbA1c)≥6.5%作为糖尿病的诊断标准

source：7糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/20242011-WHO将HbA1c作为糖尿病辅助诊断指标

HbA1c成功转型－－“治疗监控”到“诊断筛查”8糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024……因HbA1c6.5％的切点是否适合我国人群尚未在我国人群中验证，且我国HbA1c检测方法的标准化程度不够，测定的仪器和质量控制尚不能符合目前糖尿病诊断标准的要求，因此目前暂不推荐应用HbA1c诊断糖尿病

----中国血糖监测临床应用指南（２０１１年版）

9糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024准确度(accuracy):一次测量的结果与被测量真值的接近程度。正确度(trueness):真实度，大量测量的均值与真值的接近程度。精密度(precision):在规定条件下获得的独立测量结果之间的接近程度。重复性(repeatability)中间精密度(intermediateprecision)重现性(reproducibility)实验室内精密度（within-labprecision)其反义概念可以用数字表示，分别为不确定度、偏差标准差或变异系数。准确度、正确度、精密度陈文祥、申子瑜、郭健、杨振华,临床检验量值溯源中的重要术语与概念及有关问题中华检验医学杂志2005年2月第28卷第2期10糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024

日本东曹（TOSOH）HLC-723G7糖化血红蛋白测定仪及其配套试剂及校准品（简称G7）。日本爱科来（Arkray）ADAMSTMA1cHA-8160

糖化血红蛋白测定仪及其配套试剂及校准品（简称8160）。美国伯乐（Bio-Rad）D-10糖化血红蛋白测定仪及其配套试剂和校准品（简称D10）。日立7170A自动生化分析仪/罗氏（Roche）免疫比浊法HbA1c试剂盒及校准品（简称Roche）。德国Eppendorf2-20ul和200-1000ulResearch系列加样器。一、分析系统和设备11糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024A1c检测方法分类电荷差异离子层析法：HPLC

电泳法结构特异性亲和层析法免疫法标准化不同方法测定结果的可比性12糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024参加卫生部临床检验中心2011年HbA1c室间质评项目的实验室中，离子交换高效液相色谱和免疫比浊两种方法使用最为普遍，实验室所占比例分别超过45%（280/610）和25%（156/610）。13糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024CAP室间质评()

71%参与实验室采取免疫学方法检测HbA1c2007年1995年免疫比浊法离子交换层析法亲和层析法电泳法2011年14糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024美国伯乐质控品（LyphochekDiabetesControl，批号：33810，冻干粉，两个浓度水平），用于验证各系统的精密度；复溶混匀后分装，-80℃保存。JCTLM认证的标物JCCRM411-2（日本JDSLot4，新鲜冰冻血），该标物共有五个水平，取其中的水平二和水平四用于各系统的正确度验证，标物于-80℃保存，开盖后在4℃下保存，2天内用完。二、材料

15糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024所有系统在实验前进行一次校准，在实验过程中不再对各系统进行校准。每天实验时须测定高低两个浓度水平的室内质控样本，只有室内质控在控时当天的数据方可接受。三、仪器校准和质控16糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024样本分析方式采用稀释模式：按照各系统说明书要求的稀释比例，使用各系统的稀释液对样本进行稀释混匀后，再上机测定。每天在一个实验批内对两个浓度水平的样本进行3次重复测定，重复5天；四、精密度验证17糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024五、正确度验证选取JCCRM411-2的水平2和水平4，每天在一个实验批内，对这两个样本进行2次重复测定，重复5天。本实验中精密度和正确度验证实验在一批内同时进行测定。计算所有系统每个样本测定结果的均值。六、95%置信区间（CI）的计算采用总误差=偏倚±1.96×SD的公式来计算偏差的95%CI。七、评判标准1.批内不精密度CV为1.5%，实验室内不精密度CV为2%。2.95%CI在±0.75%HbA1c范围内。18糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024测定系统水平1水平2均值%批内CV实验室内CV均值%批内CV实验室内CV81605.120.280.468.750.260.28D105.440.781.179.520.360.60G75.610.460.469.500.360.83Roche5.361.021.178.760.541.504个系统的精密度验证结果（单位：%）19糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024系统测定均值（n=10）标准物质NGSP值偏倚（%HbA1c）由标准物质IFCC值导出的NGSP值偏倚（%HbA1c）81605.535.59-0.065.55-0.02D105.840.250.29G76.000.410.45Roche5.41-0.18-0.144个系统测定水平2的结果（%）20糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024系统测定均值（n=10）标准物质NGSP值偏倚（%HbA1c）由标准物质IFCC值导出的NGSP值偏倚（%HbA1c）81609.559.73-0.189.340.21D109.860.130.52G79.940.210.6Roche9.39-0.340.054个系统测定水平4的结果（%）21糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024系统水平2

水平4实验室内SDBias95%Cl下限95%Cl上限

实验室内SDBias95%Cl下限95%Cl上限81600.024-0.06-0.11-0.010.025-0.18-0.23-0.13D100.0640.250.120.380.0570.130.020.24G70.0260.410.360.460.0790.210.060.36ROCHE0.063-0.18-0.30-0.06

0.132-0.34-0.60-0.084个系统测定标准物质偏倚的95%置信区间(Cl)计算结果（%HbA1c）22糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024好的检验系统厂家：溯源保证实验室：性能验证实验室质量保证分析前变异室内质控、室间质评分析后如何使检验结果准确23糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024检测方法高效液相色谱法(离子交换法、亲和法)低压液相法免疫比浊法酶法POCT检测系统仪器、试剂、校准品SOP、人员、样本好的？检测系统24糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024AffinityMajorHbA1cLaboratory

Instruments离子交换HPLCHPLCSource：施小美Immunoassay25糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024PointofCareDevicesDCA2000(Immunoassay)

In2it

(Affinity)A1CNow(immunoassay&chemistry)Source：施小美26糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024HbA1c方法的选择标准质量标准化不精密度正确度色谱图抗干扰能力稳定性其他因素成本样本量维修与技术支持Source：施小美27糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024厂家担负的责任优化仪器的性能保证校准品的传递和样本检测结果与IFCC、DCCT/NGSP的可比性获得NGSP认证/IFCC认证确保色谱柱/试剂的不同批号间的稳定性为客户提供产品的标准化操作流程（SOP）为操作人员提供培训/教育Source：施小美28糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024世面常见的HPLC方法获得NGSP认证；在国内操作不正规多数免疫方法获得NGSP认证；部分层析方法获得NGSP认证；SFDA注册产品？量值溯源29糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024AbbottArchitectSystem/Aeroset组Bio-RadHPLC组TOSOHG7组DrewDS5/Bio-RadDiastat组其它仪器组PrimusHPLC组NycoCardReaderII组ARKRAYHA-8160组BeckmanSynchronSystems组Hitachi系列组OlypusAUSystems组RocheCOBAS,Roche/Hitachi组中国实验室的常用仪器（按字母排列）30糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024“国产器械”关键字“糖化血红蛋白试剂盒”的内容列表，共有55条记录；无一通过NGSP认证。民族产业

-Leavemuchtobedesired31糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024NGSP&IFCC溯源性证书32糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024EQAS比对计划

同期中国用户不同厂家仪器间的变异系数比较部分仪器国内外差异系数差距明显！33糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024检测场所：检验科/内分泌科实验/门诊所用设备与试剂：进口产品/国产产品所有的检测方法在中国均有使用有SFDA证书即可销售，没有一个强制要求的标准化实验室不规范化操作（如少做质控/甚至校准）……分析国内外差距原因34糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024(1)目前应采用结合NGSP标准化的HbA1c结果来估计平均血糖水平；(2)实验室应该采用离子交换高效液相色谱法检测HbA1c，但需参加卫生管理部门的质控；３）HbA1c仍然是糖尿病管理的关键指标，要尽量避免HbA1c参考范围的变化。因HbA1c6.5％的切点是否适合我国人群尚未在我国人群中验证，且我国HbA1c检测方法的标准化程度不够，测定的仪器和质量控制尚不能符合目前糖尿病诊断标准的要求，因此目前暂不推荐应用HbA1c诊断糖尿病。中国血糖监测临床应用指南（２０１１年版）中华医学会糖尿病学分会35糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024室内质控的结果CV<3%(推荐)实验室内变异水平36糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024不同CV对A1C分析的影响AnalyticalCV%6.5%A1C7.0%A1C8.0%A1C26.4-6.66.9-7.17.9-8.136.3-6.76.8-7.27.8-8.256.2–6.86.7–7.37.7-8.386.0–7.06.5-7.57.5-8.537糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/20242.美国研究数据HbA1C(%)截点U.S人群（百万）

人数变化67.1195.8%6.15.4125.0%6.24.379.2%6.34.379.2%6.43.545.8%6.52.40.0%6.62.2-8.3%6.72-16.7%6.82-16.7%6.91.7-29.2%71.5-37.5%ClinicalChemistry56:14–6(2010)38糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024HbA1c（%）批号1室内质控变异系数分析39糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024HbA1c（%）批号2室内质控变异系数分析40糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024关于POCTSixofEightHemoglobinA1cPoint-of-CareInstrumentsDoNotMeettheGeneralAcceptedAnalyticalPerformanceCriteriaErnaLenters-Westra1,2*andRobbertJ.Slingerland1,2ClinicalChemistry56:144–52(2010)41糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024行业标准《糖化血红蛋白分析仪》规范化操作42糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024方法精密度要求：室内3%；血液采集：合适的采血管；样本保存：按照说明书要求，长期保存需在-70℃；室内质控：每批分析都应同时测定至少2个不同水平（高、低值）的质控物；质控品分装冷冻保存，-70℃可保存一年以上。参加室间质评结果报告：NGSP(%),IFCC(mmol/mol)参考区间：验证规范化操作43糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024应包括：样本类型、采集、运输、保存方式；仪器操作维护程序；仪器校准程序；……SOP易于获取，并被操作人员熟知；由操作人员编写并由实验室负责人批准；SOP44糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024均值和SD：自己实验室的均值；CV：控制在3%以下；室内质控由操作人员完成，不可由厂家越俎代庖；制定合适的失控判断规则：1-3S；失控后处理程序：纠正措施；……记录室内质控45糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024校准间隔；校准物定值的溯源性；……记录校准46糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024参加室间质评；视同临床样本对待；室间质评47糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024糖化血红蛋白测定标准化48糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024从无序到有序49糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024特点定义明确的被测量：HbA1c特异的测定HbA1c的参考方法高度纯化的一级标准物质国际参考实验室网络不适用于常规实验室使用，仅用于标准化IFCC参考方法50糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024各个标准与IFCC之间的转换及数值差异(%)IFCC%HbA1cJDS%HbA1c2.03.64.35.66.47.68.69.610.811.6NGSP%HbA1c4681012JDS/JSCC=0.927*IFCC+1.73NGSP=0.915*IFCC+2.15Sweden=0.989*IFCC+0.8851糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024IFCC/DCMMasterEquationsStudy NGSP JDS SwedenMarrakech y=0.926x+2.14y=0.934x+1.76y=1.008x+0.90Chicago y=0.926x+2.05y=0.926x+1.67y=0.941x+1.09Kyoto-1 y=0.906x+2.21y=0.920x+1.78 y=1.002x+0.78Kyoto-2 y=0.912x+2.17y=0.943x+1.68y=0.968x+1.15Barcelona-1 y=0.905x+2.23y=0.912x+1.78y=0.964x+0.95Barcelona-2 y=0.897x+2.21y=0.916x+1.70y=0.963x+0.92LA-1 y=0.901x+2.24y=0.880x+1.95y=0.949x+1.10LA-2 y=0.907x+2.23y=0.911x+1.73y=0.997x+0.91Orlando-1 y=0.913x+2.15y=0.892x+1.84y=0.961x+1.01Orlando-2 y=0.924x+2.07y=0.928x+1.63y=0.998x+0.88Amsterdam-1y=0.890x+2.28y=0.866x+1.89y=0.968x+0.89

MEy=0.915x+2.15y=0.927x+1.73y=0.989X+0.88ClinicalChemistry2004;50:166-174.52糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024IFCC和NGSPIFCC是全球公认的HbA1c标准IFCC参考方法不适合常规临床实验室使用实验室报告的“IFCC”数值来自于经IFCC2nd

参考物质校准的常规方法，仍无法避免各种干扰因素.大多数(不是全部)IFCC认可方法是经过NGSP认证的方法IFCC和NGSP每年做两次样本比对53糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024IFCC和NGSPNGSP更实用商品化方法通过IFCC2nd

参考物质（冻干全血）的校准溯源到IFCC与IFCC参考方法的溯源性和不确定度只通过文件证明，并没有对各个方法的偏差（Bias）和不确定度的量设定限制54糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024我们需要改变HbA1c数值吗?IFCC数值比DCCT数值偏低没有大型临床研究支持DCCT与日本和瑞典标准共存有大型临床数据支持55糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/20242009年10月的上述几大国际组织经过共同讨论又得出第二次共识：HbA1c的检测必须在世界范围内标准化，包括参照系统和数值报告。IFCC的参考系统是唯一能够满足标准化要求的方法。将来HbA1c同时以IFCC单位(mmol/mol)以及衍生的NGSP单位(%)报告，使用IFCC-NGSP换算公式进行转换。需要确保基层糖尿病团体容易获得SI(IFCC)和NGSP单位的转换公式。杂志编辑和出版物建议采用SI(IFCC)和NGSP/DCCT两个单位共同报告HbA1c。糖化血红蛋白的标准名称为HbA1c，在指南或教育材料中也可以简写为A1C。此共识一直到2011年有效，将在下次2011年迪拜IDF会议上再次讨论

关于HbA1c检测标准化的第二次共识Meanwhiledecisionshavebeenmadeinseveralcountries:UKandJapanwill,afteratransitionperiod,reportinthenewIFCCunitsonly,andUSwillreportintheoldNGSPunitsandeAG.“Fromordertochaos”56糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024RelationBetweenIFCCNumbersandtheRespectiveNationalDCMsNationalDCMFromIFCCtoDCMFromDCMtoIFCCUSA(NGSP–BioRex70Resin)NGSP=0.09148IFCC+2.152IFCC=10.93NGSP–23.50JAPAN(JDS/JSCCK0500HPLC)JDS=0.09274IFCC+1.724IFCC=10.78JDS–18.59SWEDEN(Mono-S)Mono-S=0.09890IFCC+0.884IFCC=10.11Mono–S-8.94MASTEREQUATIONSClinChem2004;50:16657糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024HbA1cDiagnosticCutoffsHbA1c(NGSP)(%)HbA1c(IFCC)(mmol/mol)≥6.5≥4758糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024我们可以做得更好59糖化血红蛋白检测标准化和实验室操作规范化5/9/2024LabIDJC01JC02JC03JC04Instrument16.58.110.46.6TOSOHG726.568.1110.416.50ARKRAY816036.48.010.56.5TOSOHG746.47.910.36.4TOSOHG756.37.79.96.3TOSOHG766.27.