DB32T3855-2020构树组织培养技术规程

ICS65.020.20

B61

DB32

江苏省地方标准

DB32/XXXXX—2020

构树组织培养技术规程

TechnicalregulationfortissuecultureofBroussonetiapapyrifera

2020-XX-XX发布2020-XX-XX实施

江苏省市场监督管理局发布

DB32/XXXXX—2020

构树组织培养技术规程

1范围

本标准规定了构树组织培养的母株选择、外植体选择与灭菌、诱导培养、增殖培养、瓶外生根培

养、增殖苗扦插、插后管理和记录。

本标准适用于构树的组织培养。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的

修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用

于本标准。

LY/T1882—2010林木组织培养育苗技术规程

NY/T393—2013绿色食品农药使用准则

3母株选择

选取生长健壮、无病虫害的构树单株。

4外植体选择与灭菌

4.1外植体采集

在4月~7月，选择连续3d以上的晴天，采集母株上萌发的嫰枝作为外植体。

4.2外植体表面灭菌

4.2.1清洗

用中性洗洁精将外植体洗净，并用自来水冲洗15min~20min。

4.2.2灭菌

在超净工作台上，用75%乙醇溶液消毒外植体5s~10s，无菌水漂洗1次~2次；再用10%次氯酸

钠溶液浸泡外植体6min~8min，无菌水漂洗4次~6次，每次5min；将漂洗后的外植体置于无菌滤纸

上吸干表面水分。

5诱导培养

5.1培养基

诱导培养基参见附录A。培养基制备按照LY/T1882—2010规定进行。

5.2接种

1

DB32/XXXXX—2020

将外植体修剪为2cm的带芽茎段，垂直接种到诱导培养基上。

5.3培养条件

诱导培养的温度控制在23℃~25℃，光照强度为1500lx~3000lx，光照时间为8h/d~12h/d，培养室

湿度为70%~80%。

5.4转接

诱导培养25d~30d后，转接到6.1增殖培养基上进行增殖培养。

6增殖培养

6.1培养基

增殖培养基参见附录A。培养基制备按照LY/T1882—2010规定进行。

6.2接种

将诱导培养的试管苗剪成1cm~2cm的带芽茎段，接种到增殖培养基上。

6.3培养条件

增殖培养的温度控制在23℃~25℃，光照强度为1500lx~3000lx，光照时间为10h/d~16h/d，培养室

湿度为70%~80%。

6.4继代培养

增殖培养25d~35d后，转接至新鲜的增殖培养基。

7瓶外生根培养

7.1设施

宜在温室进行培养。

7.2容器

宜采用塑料穴盘，穴孔呈倒锥形，口径约4.5cm，高约5cm。旧穴盘需经消毒后才可使用。

7.3基质

基质选用pH6.2~pH6.8的草炭，用0.1%高锰酸钾溶液将基质淋透消毒，分装到穴盘内。

8增殖苗扦插

8.1插条处理

选择生长健壮、高6cm~8cm且叶片展开的增殖苗，清水洗净，剪去芽苗根部膨大部分，按单株剪

下，每株剪成3cm~4cm带芽茎段作为插条。插条基部（0.5cm~1.0cm）速蘸1000mg/L萘乙酸（NAA）

溶液5s以促进生根。

2

DB32/XXXXX—2020

8.2扦插

用镊子将插条基部插入基质，扦插深度以1cm为宜。

8.3覆膜

扦插后浇透水，在穴盘上方覆盖塑料薄膜或保鲜膜。

9插后管理

9.1环境管理

穴盘置于温室中培养，温度为20℃~30℃，以25℃为宜，光照强度为2000lx~2500lx，光照时间

为12h/d～13h/d，空气湿度75%~80%。

9.2揭膜

培养10d~15d后撤去塑料薄膜或保鲜膜。

9.3水肥管理

每隔3d浇水1次，每两周喷一次叶面肥。

9.4病虫害防治

每月喷1次药剂，宜采用75%百菌清可湿性粉剂700~800倍液，50%马拉松乳剂1000倍液。防治方法

按照NY/T393—2013规定执行。

9.5出苗

苗高15cm~20cm，活叶片数4片以上，根系生长健壮，无病虫害，即可出苗。

10记录

根据组织培养技术规程内容进行记录，按时填写，做到准确无误，记录保存2年以上。

3

DB32/XXXXX—2020

附录A

（规范性附录）

构树组织培养基配方

表A.1构树组织培养基配方表

母液名称药品名称诱导培养基（mg/L）增殖培养基（mg/L）

KNO318001800

NH4NO3720720

大量元素KH2PO4500500

CaCl2·2H2O100100

MgSO4·7H2O370370

MgSO4·4H2O22.322.3

ZnSO4·7H2O8.658.65

H3BO36.26.2

微量元素NaMoO4·2H2O0.250.25

KI0.830.83

CuSO4·5H2O0.0250.025

CoCl2·6H2O0.0250.025

FeSO4·7H2O27.827.8

铁盐

Na2EDTA37.237.2

氨基乙酸2.02.0

盐酸硫胺素（VB1）0.10.1

有机质盐酸吡哆醇（VB6）0.50.5

烟酸（VB3）0.50.5

肌醇100100

糖蔗糖3000030000

6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.21.0

植物生长调节剂

萘乙酸（NAA）1.00.2

凝固剂卡拉胶60006000

注：FeSO4·7H2O应先与Na2EDTA配制成络合物，然后才与其他溶液混合。

_________________________________

4

DB32/TXXXX—2020

前  言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由江苏省林业局提出并归口。

本标准由江苏省林业科学研究院起草。

本标准主要起草人：陈庆生、黄婧、张敏、蒋泽平、周鹏、陆青、薛欢。

I

DB32/XXXXX—2020

构树组织培养技术规程

1范围

本标准规定了构树组织培养的母株选择、外植体选择与灭菌、诱导培养、增殖培养、瓶外生根培

养、增殖苗扦插、插后管理和记录。

本标准适用于构树的组织培养。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的

修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用

于本标准。

LY/T1882—2010林木组织培养育苗技术规程

NY/T393—2013绿色食品农药使用准则

3母株选择

选取生长健壮、无病虫害的构树单株。

4外植体选择与灭菌

4.1外植体采集

在4月~7月，选择连续3d以上的晴天，采集母株上萌发的嫰枝作为外植体。

4.2外植体表面灭菌

4.2.1清洗

用中性洗洁精将外植体洗净，并用自来水冲洗15min~20min。

4.2.2灭菌

在超净工作台上，用75%乙醇溶液消毒外植体5s~10s，无菌水漂洗1次~2次；再用10%次氯酸

钠溶液浸泡外植体6min~8min，无菌水漂洗4次~6次，每次5min；将漂洗后的外植体置于无菌滤纸

上吸干表面水分。

5诱导培养

5.1培养基

诱导培养基参见附录A。培养基制备按照LY/T1882—2010规定进行。

5.2接种

1

DB32/XXXXX—2020

将外植体修剪为2cm的带芽茎段，垂直接种到诱导培养基上。

5.3培养条件

诱导培养的温度控制在23℃~25℃，光照强度为1500lx~3000lx，光照时间为8h/d~12h/d，培养室

湿度为70%~80%。

5.4转接

诱导培养25d~30d后，转接到6.1增殖培养基上进行增殖培养。

6增殖培养

6.1培养基

增殖培养基参见附录A。培养基制备按照LY/T1882—2010规定进行。

6.2接种

将诱导培养的试管苗剪成1cm~2cm的带芽茎段，接种到增殖培养基上。

6.3培养条件

增殖培养的温度控制在23℃~25℃，光照强度为1500lx~3000lx，光照时间为10h/d~16h/d，培养室

湿度为70%~80%。

6.4继代培养

增殖培养25d~35d后，转接至新鲜的增殖培养基。

7瓶外生根培养

7.1设施

宜在温室进行培养。

7.2容器

宜采用塑料穴盘，穴孔呈倒锥形，口径约4.5cm，高约5cm。旧穴盘需经消毒后才可使用。

7.3基质

基质选用pH6.2~pH6.8的草炭，用0.1%高锰酸钾溶液将基质淋透消毒，分装到穴盘内。

8增殖苗扦插

8.1插条处理

选择生长健壮、高6cm~8cm且叶片展开的增殖苗，清水洗净，剪去芽苗根部膨大部分，按单株剪

下，每株剪成3cm~4cm带芽茎段作为插条。插条基部（0.5cm~1.0cm）速蘸1000mg/L萘乙酸（NAA）

溶液5s以促进生根。

2

DB32/XXXXX—2020

8.2扦插

用镊子将插条基部插入基质，扦插深度以1cm为宜。

8.3覆膜

扦插后浇透水，在穴盘上方覆盖塑料薄膜或保鲜膜。

9插后管理

9.1环境管理

穴盘置于温室中培养，温度为20℃~30℃，以25℃为宜，光照强度为2000lx~2500lx，光照时间

为12h/d～13h/d，空气湿度75%~80%。

9.2揭膜

培养10d~15d后撤去塑料薄膜或保鲜膜。

9.3水肥管理

每隔3d浇水1次，每两周喷一次叶面肥。

9.4病虫害防治

每月喷1次药剂，宜采用75%百菌清可湿性粉剂700~800倍液，50%马拉松乳剂1000倍液。防治方法

按照NY/T393—2013规定执行。

9.5出苗

苗高15cm~20cm，活叶片数4片以上，根系生长健壮，无病虫害，即可出苗。

10记录

根据组织培养技术规程内容进行记录，按时填写，做到准确无误，记录保存2年以上。

3

DB32/XXXXX—2020

附录A

（规范性附录）

构树组织培养基配方

表A.1构树组织培养基配方表

母液名称药品名称诱导培养基（mg/L）增殖培养基（mg/L）

KNO318001800

NH4NO3720720

大量元素KH2PO4500500

CaCl2·2H2O100100

MgSO4·7H2O370370

MgSO4·4H2O22.322.3

ZnSO4·7H2O8.658.65

H3BO36.26.2

微量元素NaMoO4·2H2O0.250.25

KI0.830.83

CuSO4·5H2O0.0250.025

CoCl2·6H2O0.0250.025

FeSO4·7H2O27.827.8

铁盐