《DB32T 3762.15-2021新型冠状病毒检测技术规范 第15部分血清血浆IgM和IgG抗体化学发光法检测程序》

ICS13.100

C50

DB32

江苏省地方标准

DB32/T3762.15—2021

新型冠状病毒检测技术规范

第15部分：血清/血浆IgM和IgG抗体磁

微粒化学发光法检测程序

TechnicalspecificationsforSARS-CoV-2detection

Part15:Serum/PlasmaIgMandIgGantibodiestestprocedurebyMCLIA

2021-12-09发布2022-01-09实施

江苏省市场监督管理局发布

DB32/T3762.15—2021

I

DB32/T3762.15—2021

新型冠状病毒检测技术规范

第15部分：血清/血浆IgM和IgG抗体磁微粒化学发光法检测程序

1范围

本文件规定了新型冠状病毒血清/血浆IgM和IgG抗体磁微粒化学发光法的检测程序。

本文件适用于新型冠状病毒确诊病例、无症状感染者、疑似病例、密切接触者以及一般人群血清/

血浆样本中新冠特异性IgM和IgG抗体磁微粒化学发光法检测的实验操作。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

WS233微生物和生物医学实验室生物安全通用准则

DB32/T3762.1新型冠状病毒检测技术规范第1部分：生物样本采集、运输和保存

新型冠状病毒实验室生物安全指南（第二版）

可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定原中华人民共和国卫生部

3术语和定义

本文件没有界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

IgG：免疫球蛋白G（ImmunoglobulinG）

IgM：免疫球蛋白M（ImmunoglobulinM）

MCLIA：磁微粒化学发光法（MagneticChemiluminescenceEnzymeImmunoassay）

RLU：相对发光单位（RelativeLightUnit）

5原理

磁微粒化学发光法综合了磁微粒载体技术和化学发光免疫检测技术。人血清/血浆中待测的新型冠

状病毒IgM、IgG抗体与荧光素标记的重组抗原结合，随后加入包被着抗荧光素抗体的磁微粒，通过

抗荧光素抗体与荧光素的特异性结合使抗原抗体复合物连接在磁微粒上。在外加磁场中直接沉淀，去上

清后清洗沉淀的复合物，加入酶标抗体，形成磁微粒－抗原－抗体－酶标抗体夹心免疫复合物。再次清

洗后，加入酶促化学发光底物。底物在碱性磷酸酶作用下被催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当

激发态中间体回到基态时便发出光子，形成发光反应，通过光量子阅读系统记录光子能量，并通过计算

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DB32/T3762.15—2021

机处理系统将光能量强度在标准曲线上RLU转换为待测抗体的浓度，样本的RLU与其中的新型冠状

病毒IgM、IgG抗体浓度呈正相关，从而检测人血清/血浆中的新型冠状病毒IgM、IgG抗体。

6实验室生物安全防护要求

6.1实验室资质及级别

检测工作应在BSL-2级实验室内进行。生物安全应遵照GB19489和WS233对生物安全2级

（BSL-2）实验室的生物安全要求。

6.2操作人员资质及防护

实验中的个人防护遵照GB19489和新型冠状病毒实验室生物安全指南（第二版）。

6.3废弃物的处理

实验室使用过的实验用品应遵照GB19489对废弃物的处理要求进行无害化处理。

7准备

7.1实验室

生物安全防护二级（BSL-2）或以上等级实验室和相应的配套设施。

7.2仪器设备

常用仪器设备如下：

——生物安全柜

——化学发光免疫分析仪

——离心机

——移液器

——高压锅

——生物安全运输箱

——水浴锅

7.3试剂

常用试剂如下：

——磁性颗粒-抗荧光素抗体

——荧光素标记新型冠状病毒重组抗原

——碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM/IgG单克隆抗体

——清洗液

——底物液

——样本稀释液

8样本采集、要求、保存和运输

8.1样本采集

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DB32/T3762.15—2021

血清/血浆样本按照DB32/T3762.1中5.3的要求采集。

8.2样本要求

出现严重黄疸、溶血、脂血和微生物污染的样本，均不可进行检测。

8.3样本保存

血清/血浆样本可于2℃～8℃条件下保存3d、-20℃及以下条件下可长期保存，并避免反复冻

融。用于存放样本的冰箱应当专用。

8.4样本运输

按照可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定、DB32/T3762.1中6.1、

6.2的要求。

9检测方法

9.1血清/血浆IgM抗体磁微粒化学发光法

9.1.1试剂制备

将新型冠状病毒阴阳性对照和底物液在室温18℃~25℃下平衡30min。用纯水将清洗液稀释到

工作浓度。若清洗液有结晶，可将清洗液置于室温或37℃待结晶溶解后再进行稀释。

9.1.2磁微粒化学发光法反应体系和反应程序

取1mL样本稀释液，加入20μL样本（至少15μL），用漩涡混匀仪混匀5s，静止15min后

开始实验。根据实验需要，如质量控制，设置阴性、阳性对照各2管及处理后样本若干。分别加入50

μL磁性颗粒-抗荧光素抗体、75μL处理后样本或阴性对照/阳性对照、50μL荧光素标记新型冠状病

毒重组抗原、75μL碱性磷酸酶标记鼠抗人IgM单克隆抗体。反应时间35min；完成第二次清洗后每

管加入底物液200μL，避光检测，反应5s读数。磁微粒化学发光法反应体系的总体积可根据不同厂

家、型号的化学发光仪做相应调整。

9.1.3结果分析

根据RLU自动计算Cutoff值，样本检测的结果以S/CO值进行判定：

a)阴性（－）：S/CO＜1.000，待检样本未检出新型冠状病毒IgM抗体；

b)阳性（＋）：S/CO≥1.000，待检样本检出新型冠状病毒IgM抗体。

9.1.4质量控制

根据不同厂家、型号的化学发光仪和配套试剂的要求，阳性、阴性对照S/CO应在规定的范围内。

以上要求不符合，应重新进行试验，重新进行的试验应从试剂制备开始。

9.1.5结果表述

当质量控制符合要求：

a)S/CO＜1.000，结果表述为“待检样本未检出新型冠状病毒IgM抗体”。

b)S/CO≥1.000，结果表述为“待检样本检出新型冠状病毒IgM抗体”。

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DB32/T3762.15—2021

9.2血清/血浆IgG抗体磁微粒化学发光法

9.2.1试剂制备

将新型冠状病毒阴阳性对照和底物液在室温18℃~25℃下平衡30min。用纯水将清洗液稀释到

工作浓度。若清洗液有结晶，可将清洗液置于室温或37℃待结晶溶解后再进行稀释。

9.2.2磁微粒化学发光法反应体系和反应程序

取1ml样本稀释液，加入20μL样本（至少15μL），用漩涡混匀仪混匀5s，静止15min后

开始实验。根据实验需要，在质量控制时，设置阴性、阳性对照各2管及处理后样本若干。分别加入

50μL磁性颗粒-抗荧光素抗体、75μL处理后样本或阴性对照/阳性对照、50μL荧光素标记新型冠状

病毒重组抗原、75μL碱性磷酸酶标记鼠抗人IgG单克隆抗体。反应时间35min；完成第二次清洗后

每管加入底物液200μL，避光检测，反应5s读数。磁微粒化学发光法反应体系的总体积可根据不同

厂家、型号的化学发光仪做相应调整。

9.2.3结果判读

根据RLU自动计算Cutoff值，样本检测的结果以S/CO值进行判定

a)阴性（－）：S/CO＜1.000，待检样本未检出新型冠状病毒IgG抗体；

b)阳性（＋）：S/CO≥1.000，待检样本检出新型冠状病毒IgG抗体。

9.2.4质量控制

根据不同厂家、型号的化学发光仪和配套试剂的要求，阳性、阴性对照S/CO应在规定的范围内。

以上要求不符合，应重新进行试验，重新进行的试验应从试剂制备开始。

9.2.5结果表述

当质量控制符合要求时，