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文档简介

大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌,是周身有鞭毛，能运动的一种无芽孢杆菌。

《生活饮用水卫生标准》（GB5749-2006）规定总大肠菌群(MPN/100mL或CFU/100mL)不得检出。

测定方法有纸片快速法、酶底物法、多管发酵法。

任务二总大肠菌群数的测定项目七水样中生物指标测定一、方法原理

总大肠菌群指的是在37℃培养24h后能够发酵乳糖、产酸产气,需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

细菌生长繁殖会产酸使pH降低，所以溴甲酚紫指示剂由紫色变黄色。

在产气过程中，相应的脱氢酶在适宜的pH内会催化底物脱氢还原TTC形成红色的不溶性三苯甲臜(TTF)，即可在产酸后的黄色背景下显示出红色斑点(或红晕)。纸片快速法项目七水样中生物指标测定

二、试剂及仪器

（一）试剂及药品

（1）水质总大肠菌群测试纸片：:10mL水样量纸片、1mL水样量纸片。（2）无菌水：取适量实验用水，1℃高压蒸汽灭菌20min，备用。

（二）实验仪器

高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、试管、无菌刻度吸管或移液枪、采样瓶。项目七水样中生物指标测定三、操作步骤（一）水样采集

采集江、河、湖、库等地表水样时，可握住瓶子下部直接将带塞采样瓶插入水中，距水面10～15cm处，瓶口朝水流方向，拔瓶塞，使水样灌入瓶内然后盖上瓶塞，将采样瓶从水中取出。如果没有水流，可握住瓶子水平前推。采好水样后，迅速扎上无菌包装纸。（二）样品测定

项目七水样中生物指标测定55.5mL清洁水样10mL水样量纸片5张，每张接种水样10mL1mL水样量纸片10张，其中5张各接种水样1mL5张各接种1:10的稀释水样1mL受污染水样，接种3个不同稀释度的1mL稀释水样各5张。观察纸片结果：

若纸片上出现红斑或红晕且周围变黄，则为阳性；纸片全片变黄，无红斑或红晕，为阳性；纸片部分变黄，无红斑或红晕，为阴性；纸片的紫色背景上出现红斑或红晕，而周围不变黄，为阴性；纸片无变化为阴性。

同时，用无菌水做空白实验，培养后的纸片上不得有任何颜色反应，否则该次样品测定结果无效。（二）样品测定

项目七水样中生物指标测定大肠菌群不同样品种类的接种量见下表（三）结果计算项目七水样中生物指标测定式中

C—水样总大肠菌群或粪大肠菌群浓度，MPN/L

M—查MPN表得到的MPN值，MPN/100mL

Q—实际水样最大接种量，mL

根据不

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