尼古丁通过上调CD147对卵巢癌HO-8910的影响

尼古丁通过上调CD147对卵巢癌HO-8910的影响卵巢癌是妇科三大恶性肿瘤之一,也是最致命的妇科恶性肿瘤,由于其解剖位置深,早期无明显症状且发病迅速,70%的患者诊断时已为晚期,5年生存率<30%。虽然近些年来卵巢癌治疗手段取得了较大进展,但是治疗失败和疾病转移仍无法避免。随着全球女性吸烟者的增加,越来越多研究组织认为吸烟是卵巢癌的潜在危险因素。其中尼古丁是香烟的主要成分,有许多研究显示尼古丁在许多体系中可以通过诱导细胞周期进程,上皮间质转化、迁移、侵袭、血管生成、逃避凋亡促进肿瘤的增长和转移。但吸烟是否与卵巢癌直接相关仍然争议不断,有研究认为吸烟与粘液性卵巢癌密切相关,但与浆液性卵巢癌的关系不明确。浆液性卵巢癌(serousovariancarcinoma,SOC)是所有妇科癌症中最常见且死亡率最高的亚型,因此,即使吸烟导致浆液性卵巢癌进展程度很小,但对于世界范围内的影响而言其重要性是不可小觑的。CD147在人体内广泛分布,参与多种生理功能,且与肿瘤的增殖、侵袭、转移等过程密切相关。CDl47已被证实表达于多种人类肿瘤细胞中。CD147通过刺激成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶(MMPs),其中MMPs家族中的MMP2、MMP9与肿瘤侵袭和转移的关系最为密切,通过降解细胞外基质,在许多癌症侵袭、转移和进展中发挥重要作用。CD147的表达水平与肿瘤的恶性程度相关,与癌症患者的不良预后相关,是一个潜在的预测癌症发生和侵袭的生物标记物。目的:探讨尼古丁对卵巢癌HO-8910细胞系增殖、迁移作用的影响,及在这一过程中CD147的作用及其分子机制,为阐明CD147在尼古丁引起的细胞增殖、迁移作用的分子机制提供理论和实验依据。方法:1.体外培养卵巢癌HO-8910细胞系,用不同浓度的尼古丁处理,作用一段时间后,用MTT(四甲基偶氮唑盐)比色法检测细胞的增殖情况,用划痕实验检测细胞的迁移情况,用westernblot检测cd147、mmp2、mmp9表达情况。2.先用sirnacd147沉默cd147基因,再用1um尼古丁处理,分别用mtt、划痕实验、westernblot检测细胞的增殖、迁移情况及cd147、mmp2、mmp9表达情况。3.先用erk抑制剂u0126抑制erk信号通路,再用1um尼古丁处理,用westernblot检测u0126对细胞cd147、mmp2、mmp9的表达的影响。结果:1.尼古丁对卵巢癌ho-8910细胞作用适宜浓度和时间的确定用mtt法检测细胞的存活率,结果显示:尼古丁在一定范围内促进ho-8910细胞增殖,随着浓度的增高而增高,1um时为最大,若继续增加尼古丁的浓度,则细胞生长明显受到抑制;尼古丁对ho-8910细胞增殖的促进作用随时间的增加而增加,存在时间依赖关系。2.尼古丁对卵巢癌ho-8910细胞cd147、mmp2、mmp9表达的影响用westernblot检测不同浓度尼古丁(0、0.1、1、10um)处理ho-8910细胞48小时后cd147、mmp2、mmp9的表达情况,结果显示:随着浓度的增加,细胞cd147、mmp2、mmp9的表达水平越高,1um时为最大;用1um尼古丁分别作用于ho-8910细胞0、24、48、72小时,结果显示:随着作用时间的延长,细胞cd147、mmp2、mmp9的表达水平越高,存在时间依赖关系。3.尼古丁对卵巢癌ho-8910细胞erk活性的影响用westernblot检测不同浓度尼古丁(0、0.1、1、10um)处理ho-8910细胞48小时,erk磷酸化水平表达情况,结果显示:随着浓度的增高,细胞p-erk水平也逐渐增高,1um时为最大。4.cd147对尼古丁促进卵巢癌ho-8910细胞erk活性及增殖、迁移的影响用尼古丁与cd147sirna转染后的ho-8910细胞作用,用mtt比色法、westernblot、划痕实验检测各组细胞,结果显示:cd147基因的沉默可导致细胞cd147、mmp2、mmp9表达及erk磷酸化水平的降低,同时细胞的增殖和迁移能力下降。5.erk抑制剂对尼古丁上调卵巢癌ho-8910细胞cd147、mmp2、mmp9作用的影响用尼古丁与erk抑制剂u0126预处理后的ho-8910细胞作用,用westernblot检测各组细胞,结果显示:ERK信号通路的抑制可导致细胞CD147、MMP2、MMP9表达水平降低。结论:1.尼古丁作用于卵巢癌HO-8910细胞系后,可以选择性的增加细胞CD147的表达,进而上调MMP2和MMP9的表达,导致细胞增殖和迁移能力增强。2.尼古丁这种促进增殖和迁移的作用可以被CD147siRNA所抑制,提示CD147在尼古丁介导的增殖和迁移