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文档简介
微生物的生理生化反应实验九、十一、目的要求
1.了解细菌的一般生化反应;
2.了解细菌的生化鉴定方法其原理。
二、实验材料
菌种:大肠杆菌;枯草杆菌;变形杆菌;自己划线分离的大肠杆菌。
培养基:糖发酵培养基(紫红色液体)
H2S试验用培养基(固体、试管)
蛋白胨水培养基(吲哚实验)(液体)
淀粉水解用培养基(固体、平板)
葡萄糖蛋白胨水培养基(甲基红实验)(液体)三、实验原理及方法
由于各种微生物的新陈代谢类型不同,因此,对各种物质利用后所产生的代谢产物也不同,我们可以用化学反应来测定微生物的代谢产物,这种反应称为生化反应。生化反应常用来鉴别在形态或其它方面不易区别的微生物,例如:肠道细菌中,大肠杆菌和伤寒杆菌,二者在形态上不易区分,但前者能发酵乳糖,后者不能。因此可以从它们能否发酵乳糖来区别它们,所以微生物的生化反应是微生物分类鉴定的重要依据之一。微生物的生理生化反应原理1、糖发酵试验(含碳化合物的分解利用)绝大多数细菌都能利用糖类作为能源及碳源,但是细菌的分解糖类的能力上有相当大的差异。发酵后产生的有机酸:乳酸、醋酸、丙酸等(溴甲酚紫变色范围pH5.2~6.8,pH<5.2黄色,pH>6.8紫色)
发酵后产生的气体:甲烷、H2
、CO2等(杜氏小管内有气泡)微生物的生理生化反应原理2、产硫化氢试验某些菌能分解含硫的有机物或无机物产生硫化氢(H2S),H2S遇金属盐类,如铅盐、铁盐等,则形成黑色的硫化铅或硫化铁的沉淀物。从而可断定H2S的产生与否。本实验采用含有柠檬酸铁铵的培养基穿刺培养,看是否有黑色沉淀。微生物的生理生化反应原理3、甲基红试验某些细菌在糖代谢过程中,将培养基中的糖分解为甲酸、乙酸、乳酸等,使培养基变酸,加入培养基中的甲基红指示剂[pH4.2(红色)-6.3(黄色)],可使培养基由原来的桔黄色变为红色,即甲基红阳性反应。微生物的生理生化反应原理4、淀粉水解试验(生物大分子的分解利用)微生物对大分子的淀粉不能直接利用,必须靠产生的胞外淀粉酶将其分解后才能吸收利用。淀粉遇碘液呈蓝色,但在淀粉被细菌水解的区域,遇碘不再呈蓝色,这可作为细菌产生淀粉酶的证据。结果:有水解圈—淀粉水解实验阳性;无水解圈—淀粉水解实验阴性.用接种环取少量枯草杆菌在平板的一边划“+”字形接种(或
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