中药粉末显微鉴别技术

1中药粉末显微鉴别技术第一节 取样、制片、染色一、取样取样的代表性直接影响到结果的推断准确，因此必需重视取样的各个环节。〔一〕比照品粉末是检定供试品的参照物，其制备是显微鉴别的先决条件。有阅历者，可自取标本，鉴定后制作，或购置药材经品种基原鉴定。还应留意有些药材的显微特征受生常年限及环境的影响，会产生确定的波动，所以对于供试品的产地、采收期、加工方法等也应当认真记录。〔二〕中药材原药材应留意基原、产地、规格的完整性、清洁程度以及有无水迹、霉变或其他物质污染等状况，并具体记录。从同批药材包件中抽取有代表性的检定用样品。对裂开的、粉末状的或大小在1cm100g-500g25g；贵重药材5g-10g；个体大的药材，依据实际状况抽取代表性的样品。将所取有代表性样品混合均匀，即为总样品量。前处理：将供试品捡净后，用量较小时，可以用乳体或小型电磨粉碎过《中国药典》6号筛〔1.0μm-250μm〕备用。1〔1〕取样：从各批号的箱、包、瓶中随机取样，记录好厂家、批号，从各包装盒中任意取1丸，每批号不312丸-3丸，乳钵中研成细粉后，取少量置裁玻片上，滴加规定的试液，搅拌均匀，使粘结的细胞、组织分别，再按粉末特征加水合氯醛试液或其他适当试液处理后观看。水蜜丸或大蜜丸；可直接用刀片横向切开取一薄片，或用小钢铲取一小块〔15mg〕放置在载玻片上制片观察。去包衣：中药片剂常见包衣为糖衣，隔离层常使用胶浆、糖浆和滑石粉。水丸和糊丸等〔挂〕衣的材料有滑石、蔗糖、朱砂、雄黄、青黛、百草霜、礞石、赫石等。可用刀片将包衣剥去，简洁的方法也可将片剂或丸剂断为两半，直接取内心，粉碎进展观看。添加剂：为便于观看，可对中成药的制造过程中使用的添加剂做适当的前处理。除去水溶性干扰物：将检品置于蒸馏水中研匀，离心处理，取沉淀物检查。除去脂溶性干扰物：将检品滴加适量氯仿，离心处理，取沉淀挥干氯仿后检查。除去淀粉，糊化淀粉的干扰：将检品滴加蒸馏水研匀，置烧杯中煮沸、冷却，离心处理，取沉淀检查。以上操作中，为防止某些显微特征的流失，应进展留样观看。二、制片〔一〕制片1、载玻片与盖玻片载玻片与盖玻片是影响图像质量的因素之一。因载物台下的聚光器是按使用确定厚度的载玻片设计的。首先应选择规格统一的载玻片〔厚0.9mm-1.2m〕与盖玻片〔厚0.12mm-0.17m载玻片与盖玻片用无水乙醇浸泡后，用松软的绸布或无纤维人造纸揩擦，至外表干净无暇。21滴，用玻璃棒搅匀，用镊子将盖玻片沿一侧轻轻放下，使液体自然展匀即可。可用滤纸吸拭溢出的液体或从盖玻片边缘补充液体缺乏的空隙。〔二〕制片按使用试剂分类12、斯氏试液制片试液由醋酸：甘油：水〔1：1：1〕组成。用于观看包括淀粉粒在内的全部显微鉴别特征。3、水合氯醛制片水合氯醛试液能渗透组织，使皱缩的细胞膨胀并能溶解淀粉粒、蛋白质、树脂、挥发油和叶绿素等，使细胞组织变得透亮而清楚。4、乙醇装片在观看的切片中有菊糖、粘液、树胶等时，使用95%以上的乙醇。〔三〕1、临时制片封藏介质一般为流淌性液体，不耐久藏。但制作简易、适用于一般的显微观看及显微化学反响。2、半永久性制片在上述临时制片四周，直接使用加拿大树胶，将盖玻片四周封严，室温放置110年以上观看使用。封藏介质还可以选用半固体的甘油明胶。3、永久性制片封藏介质一般呈固态，可长期保存，但制作费时，多用于教学标本。制作方法一般是先将粉末用无水乙醇浸润，随后沥去乙醇，用二甲苯浸润，再沥去二甲苯，滴加加拿大树胶的二甲苯溶液后，自然挥发枯燥固定后即可。三、染色为使标本片特征显著，可依据细胞壁及细胞内含物的性质，参与不同染色剂染色。常见的显微化学反响如下〔全部试液的配制方法参见《中国药典。〔一〕细胞壁性质的检定11-21色。此操作最好在水合氯醛透化后再进展，其效果较好。2、木栓化或角质化细胞壁，加苏丹III3、纤维素细胞壁加氯化锌碘试液，或先加碘试液潮湿后，稍放置，再加硫酸溶液33-5〕显蓝色或紫色。〔二〕细胞内含物性质的检定12、糊粉粒〔1〕加碘试液，呈黄棕色〔2〕加硝酸汞试液，呈砖红色〔材料中如含有多量脂肪油，宜先用乙醚或石油醚脱脂后进展。3〔1〕加苏丹III加90〔蓖麻油及巴豆油例外410%α801-2快溶解。56、草酸钙结晶〔1〕加稀醋酸不溶解，加稀盐酸即溶解但无气泡发生〔2〕加硫酸〔1-2〕渐渐溶解。片刻后析出针状硫酸钙结晶。7、碳酸钙〔钟乳体，加稀盐酸溶解，同时有气泡发生。8其次节 显微镜及显微摄影为能照实地记录，客观地反映中药材粉末的显微鉴别特征，把握显微镜摄影技术是格外重要的。一、显微镜显微镜主要是由机械局部与光学局部组成，虽然型显微镜不断面市，但其原理及各局部的构造均大同小异。〔一〕机械局部主要包括镜座、镜臂、镜筒、载物台、物镜转换盘、焦距调整装置等。123、镜筒为一中空的金属圆筒，用以固定物镜与目镜用的距离。现以双筒倾斜式为常见。4、载物台用于放置载玻片之用，并有夹压片固定。装置较完善的显微镜，载物台一侧附有旋钮，可把握载玻片前后左右的移动。43-6物镜。5、焦距调整装置通过镜筒与载物台的升降，调整物镜与标本间的距离。2〔二〕主要由一系列的放大透镜组合而成。除了主要用于放大的透镜组外，尚有光密度调整装置、滤光片、光源装置等。1、物镜物镜是打算显微镜性能的最重要局部，内装有多组复式透镜。2、目镜内装有一组放大率较小的透镜组。其作用在于将物镜所成图像作进一步的放大。3、光密度调整装置聚光器：由数片透镜组成，位于载物台下方，用于将光线集中到所要观看的标本上。聚光器的一侧，尚装有升降调整轮，供会聚光线密度所用。聚光器的光阑开孔最好为物镜数值孔镜的60%-70%。场光阑：位于光源的上方，主要功能是靠削减物镜反射光斑来把握图像的光。二、显微摄影1、镜头的选择物镜：显微照像时，必需选用平场消色差镜或平场复消色差物镜，如带有广视野的物镜则更优。目镜：应选择生产厂家原配置的照像专用目镜。2、取景与对焦现常用者多为专用的显微摄影装置。这类装置主要由一个取景目镜和一个目镜照像机组成。3、显微照明现一般的显微镜均附有透射式中心照明光源，即承受了柯勒照明法，以获得强而均匀的照明。4、滤光片为削减显微镜观看所造成的疲乏，一般装在光圈上端的滤光片架内，放置一个中等密度的滤光片可以减弱图像的亮度，到达令人舒适的光亮程度。5、曝光把握显微摄影的装置中，多具有自动曝光把握功能，以PM-10AD10全自动显微照像装置为例。在曝光操作盘上，装有以下操作钮。35mm胶片感光度设定：ISO胶片倒易失效校正钮：参考微机处理机上所附有的常用牌号胶片倒易率失效特性数据，将旋钮拧到所用胶片的位置，即可自动地调整曝光时间。标本暗视野补偿钮：依据视场内的标本分布的明暗反差状态，把胶片的有效感光速度在额度值的0.25-4之间转换。摄影方式选择钮：选择自动或手动方式。三、其他留意事项1、显微镜的使用使用显微镜观看时，应当留意两先两后，即先低倍、后高倍、先粗调、后微调。2、显微镜的维护应特别留意防尘、防潮与防腐。避开载玻片上滴加过多的液体试剂，避开试剂流出引起腐蚀。32种标尺，即台测微尺与目测微尺。台测微尺为显微长度测量的标准，用于校正目测微尺的长度。全长1mm，分10个大格，每个大格再分为1010μm。目测微尺为一圆形的小玻片，一面印有标尺，长度通常为1cm，分为100个小格，使用时留意将有刻度的一面朝下。胶片的选择 显微标本一般都是静态的，所以胶片的感光度并不重要。彩色胶片分日光型和灯光型，只要在光路中置一正确的滤光片使照明调整到日光光质，不管哪一类都能在显微摄影中成功地使用。胶片的有效期限，在包装盒上印的有效期限之前使用，过期胶片易发生色平衡的变化。冲扩 冲扩为最终一步，把握不好，将功亏一篑。自己冲洗时，应认真做好观看记录。送到照像馆扩印时，应同时附上样片，照片后一般自动记录有显影条件，可供调试冲扩条件时参考。图像欠佳的缘由 图像不清楚时，应检查一下显微镜的微调焦方面是否有“滑轮”现象。是否因按快门时过重或太快造成震惊。取景目镜中的双十宇线是否看清。如有油迹消灭在物镜前透镜上，或标本的载玻片上，则图像是模糊的。照片亮度不匀时，应检查一下照明器及其里面的光源与显微镜是否成始终线，如照明不均匀，将对所拍摄照片有明显影响，其背景或检体的图像常一边偏暗。中药材粉末及中成药的显微鉴别第一节 中药材粉末显微鉴别要点生物的各种组织形态均具有较为稳定的显微特征，中药材被粉碎时，其组织、细胞、内含物等照旧可见。了解并把握这些根本特征，是开展中药粉末鉴别的根底。一、根及根茎类药材根及根茎类药材的粉末显微鉴别，以具有特征性的后含物、厚壁组织、分泌组织为观看重点，其次是导管、木栓细胞等。细胞后含物〔1〕淀粉粒：其形态随植物种类而异。观看时，应留意淀粉粒的多少，外形、类型、大小、脐点外形及位置，层纹等特征。菊糖：为菊科、桔梗科植物药所特有。结晶：大多为草酸钙结晶，偶有含硅质块的。分泌组织 如有分泌细胞、分泌腔(室)、分泌管(道)及乳汁管等类型。3、厚壁组织(])纤维：常分为韧皮纤维和木纤维两大类。其中木纤维又分为韧型纤维和纤维管胞。(2)石细胞：多成群或单个散在，有的与木栓细胞或薄壁细胞相连接，如苍术等。观看时，应留意石细胞的外形，大小、细胞壁增厚形态和程度，纹孔外形及大小、孔沟密度等特征。导管导管多为梯纹、网纹或具缘纹孔，少为螺纹和环纹。木栓组织双子叶植物根和根茎中常见，单子叶植物根茎中少有存在。后生皮层仅见于为数不多的双子叶植物根和单子叶植物根茎。表皮及下皮表皮一般在单子叶植物药材中较普遍，双子叶植物药材仅见于较瘦长的须状根。8、内皮层细胞多见于单子叶植物根、根茎类粉末中，如泽泻等。少数双子叶植物的根具有分隔的内皮层细胞，如龙胆等。9．薄壁细胞包括皮层、韧皮部、木质部、射线及髓部的薄壁细胞。薄壁细胞中的后含物或特别物质是重要的鉴别特征，如熟地黄具黑棕色核状物的薄壁组织等。二，皮类药材主要指木本植物形成层以外的局部，显微鉴别时，以观看厚壁细胞、木栓组织等为重点。木栓细胞大多为棕色，极少数浅红色或紫红色，少数无色，常有不同颜色的后含物。木栓细胞外表观大多为多角形，细胞壁栓质化；也有的细胞壁呈不均匀木化增厚，并具纹孔，形似石细胞．如肉桂等。纤维 普遍存在。应留意是单个散在或成束，颜色、外形、直径、长短、壁增厚的程度，纹孔及孔沟外形等特征。同时留意有无晶纤维，如黄柏等。石细胞较普遍存在。应留意外形、大小、颜色，细胞壁形态、有无分枝、有无内含物等特征。射线细胞多碎断。应留意观看射线细胞的宽度和高度(有时裂开不易看清)、细胞内含物等特征。筛管为皮类药材的标志，观看其分子端壁的筛板及筛域的分布状态，如厚朴等。裸子植物皮类药材无筛管，而有筛胞，如土荆皮等。此外，还应留意分泌组织的有无、类型、外形、大小及分泌物的颜色，细胞后含形态，大小等特征。三、木类药材主要指双子叶植物茎的心材，显微鉴别时，导管，纤维、木薄壁细胞等为观看重点。1、导管 一般较兴盛，多为具缘纹孔和网纹导管，其分子的宽度、长度、纹孔的排列方式是重要的鉴别特征，如降香的具缘纹孔导管。木纤维 分为韧型纤维及纤维管胞，前者细胞壁无纹孔或单斜纹孔，后者有具缘纹孔，留意纹孔口的状况、有否形成晶纤维，含晶细胞壁的厚度及是否木化等。木薄壁细胞木薄壁细胞的胞壁大都木化、具纹孔，如苏木的木薄壁细胞。木射线细胞应留意木射线细胞的外形、宽度和高度、细胞壁的增厚程度等，如降香的木射线细胞。四、藤茎类药材药用者多为木质藤茎，皮类和木类药材的组织特点均可察见，少数带有叶的茎类药材可见到叶肉组织、气孔或毛茸，机械组织较兴盛，草酸钙结晶常见，淀粉粒常较小等。其他鉴别要点参见皮类和木类药材鉴别要点。五、叶类药材叶肉组织和气孔是叶类药材的主要标志。观看时应留意以下特征。表皮细胞 外表观。断面观的外形，颜色、垂周壁的弯曲程度、胞壁增厚状况、角质层的形态以及有无纹孔等。气孔 轴式及副卫细胞数目。毛茸腺毛：重点观看腺头的外形、细胞数目、大小、分泌物的颜色及腺柄的细胞数目、大小等特征，如桑叶；唇形科植物叶的腺毛形成腺鳞，头部由8T字形，多细胞；石韦非腺毛为星状，多细胞，番泻叶非腺毛为单细胞，壁厚，具疣状突起；荷叶非腺毛则为非腺毛聚合体等。晶体留意观看其类型、大小及存在方式。有的叶类药材有2晶和柱晶；桑叶既有钟乳体结晶又有草酸钙簇晶和方晶；穿心莲叶含大形螺状钟乳体。此外，还要留意栅栏细胞的列数，长度和直径，导管的类型和直径、厚壁组织的有无，如茶叶含有石细胞等特征。六、花类药材分泌组织如红花、纤维如菊花等特征的存在。花粉粒 是鉴别花类药材的主要特征主要留意花粉粒的外形大小萌发孔形态外壁构造及纹饰(理)等特征。外形：指立体状态或极面观、赤道面观的轮廓。大小：除圆球形只测其直径外，一般需分别测量极轴或赤道轴的长度。(3)花粉壁：花粉一般具有较厚的外壁和较薄的内壁。(4)萌发孔：为花粉外壁较薄的区域，当花粉有萌发时，花粉内壁由萌发孔向外伸出形成花粉管。花粉粒的外形、数目及大小，因种而异。花粉囊内壁留意其纹饰类型。毛茸留意其类型、外形、大小、细胞数目、排列及外表特征等。七、果实类药材果实类药材一般为完整果实或果实的某一局部。显微鉴别时，以外果皮、中果皮、内果皮为观看重点。1．外果皮 留意观看细胞外形，垂周壁增厚状况。2、中果皮 留意观看分泌组织。内果皮留意观看石细胞。对含有种子的果实类药材，还应留意种皮、肝乳组织等特征。八、种子类药材种子类药材一般为枯燥成熟的种子，有的只用种子的某一局部。显微鉴别时，多以观看特化为厚壁细胞的种皮细胞为重点。厚壁细胞豆科及旋花科植物等大都有种皮栅状细胞，要留意种皮栅状细胞的列数、外形、有无光辉带及所处位置等。种皮细胞常由石细胞构成，是重要的鉴别依据。其次应留意种皮支持细胞、油细胞、色素细胞的有无和形态；有无毛茸、草酸钙结晶、淀粉粒、分泌组织碎片等。有时胚乳细胞也是鉴别依据。如砂仁等。九、全草类药材大多为草本植物的地上局部、少数为带根的全株。全草类包括了草本植物药的各个部位；除草质茎外，其他前文均已沦述。草质茎与木质茎药材粉末的主要区分在于：机械组织较少，导管直径较小；一般无木栓组织：绿色薄壁组织较多：毛茸多见。表皮角质层纹理、气孔较明显，如麻黄的哑铃状特异型气孔是该药的重要鉴别特征。十、菌类药材大多以子实体或菌核的形式入药。无淀粉粒和高等植物的显微特征。观看时应留意菌丝的外形、有无分枝、颜色，大小；团块、孢子的形态：结晶有无及形态、大小与类型。十一、动物类药材因药用部位不同，有动物体、分泌物、病理产物和角甲类之分。动物全体应留意皮肤碎片细胞的形态与色素颗粒的颜色。分泌物和病理产物应留意团块的颜色及其包埋物的性质特征，表皮脱落组织，毛茸及其他细胞的外形、大小、颜色等特征，如麝香、牛黄等。角甲类药材应留意碎块的外形、颜色、横断面和纵断面观的形态特征及色素颗粒颜色，如羚羊角等。十二、矿物类药材除龙骨等少数化石类药材外，一般无植〔动〕物性显微特征。主要应留意晶体的大小，直径或长径；晶形的棱角、锐角或钝角；色泽、透亮度、外表纹理及方向、光滑度；偏光显微镜下的特征等，如朱砂、石膏、雄黄等。其次节中成药显微鉴别要点一、了解剂型制法，生疏组方药材了解剂型和制法，生疏处方中组成药物的显微特征是中成药鉴别的根底。中成药的显微鉴别与中药材粉末显微鉴别相比要简洁得多，由于中成药一般多由二味以上中药材承受多种方法制备而成。制备方法的不同对显微鉴别会产生确定的影响。而且组成药物及各种辅料的显微特征还会消灭相互影响和干扰。在对中成药鉴别前，首先要尽可能地了解该药的剂型和制法，分析可能检出的药物有多少。例如牛黄解毒丸中的8味药都是原粉人药，3味药为煎汁投料，这些药便看不到各自的显微特征，不能检出。应视具体状况做具体分析，不行一概而论。赋形剂常使用淀粉的种类有玉蜀黍、木薯、小麦、米及马铃薯。对于组成药物的显微特征，可分诞生疏的、根本生疏的和不生疏的3类，只有生疏之后，方可灵敏应用。对于二、排解穿插干扰，明确专属特征排解穿插干扰，确定专属性特征是中成药鉴别的关键。在对各组成药物粉末分析比较观看时，分析处方，选取各药在中成药中的专属性特征，作为鉴别依据。因此，单一药材粉末的主要特征在成药中有时不愿定能作为鉴别依据，而某些较次要特征有时则可起到鉴别作用。选取各组成药物显微特征时要考虑到2点：一是所选特征在该处方中的专属性；二是该特征尽可能在处方外的中药中也要有专属性。一般地说，每味组成药选取1个能代表该药改换其他特征亦较难时，可考虑增加1三、娴熟正规操作，确保结果准确显微鉴别与一般的仪器分析方法相比，受主观因素影响较大，对操作者来说，不仅要有扎实的生药学理论基础，还要有娴熟的显微观看技能和摄影技术。530行，每次观看幅宽约0.5mm〔有的显微镜可通过自动移动装置把握。一般可在100-400倍下照相记录，含细胞后含物较多者，制片静置一周后应复查制片的稳定性。关于各种显微特征的量度测定，一般应取20个测量其平均值，力求客观。因此，在中成药中的显微特征的量度值与药材原粉中测量的数值不—定完全一样，但大都在原粉末量度值范围内。2至于未知组成样品的鉴别，难度相应增大。但只要把握大量的单味药粉末显微特征，积存丰富的鉴别阅历，同样可以逐步解决。鉴别时，为便利观看，还应考虑多种手段的应用。如某些特别的组成药材，粉末显微特征不易确定，可用微量升华的方法来解决，如冰片等。偏光显微镜在中药显微鉴别中的应用中药材粉末的偏光特征：偏振光显微镜(p01arizingmicroscope)简称偏光显微镜。与一般的明视野显微镜相比，偏光显微镜利用了自2(N